肺癌是我国发病率和死亡率增长最快,对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤,其发生发展机制尚未完全清楚。肿瘤的低氧微环境发现于1955年,而肺癌组织低氧直至2006年才被成功检测到。随着研究的深入,低氧对肺癌的影响不仅限于对放疗的抵抗...肺癌是我国发病率和死亡率增长最快,对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤,其发生发展机制尚未完全清楚。肿瘤的低氧微环境发现于1955年,而肺癌组织低氧直至2006年才被成功检测到。随着研究的深入,低氧对肺癌的影响不仅限于对放疗的抵抗作用,而且还会通过一个重要的促癌分子低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)以及其调节蛋白脯氨酸羟化酶(prolyl hydroxylase domain,PHD)和希佩尔林道病基因产物(product of von Hippel-Lindau gene,pVHL)对肺癌的发生发展、侵袭转移、化疗耐药以及预后等产生重要的调节作用。因此,低氧、HIF、PHD和pVHL必将成为十分有潜力的肺癌治疗靶点。展开更多
背景与目的以人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)作为抑癌基因IL-24的细胞载体的研究目前未见报道。应用Gateway法构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green uorescentprotein,EGFP)基因和IL-24...背景与目的以人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)作为抑癌基因IL-24的细胞载体的研究目前未见报道。应用Gateway法构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green uorescentprotein,EGFP)基因和IL-24基因的慢病毒载体,探讨其对hBMSCs的转导情况,为今后肿瘤的基因治疗奠定基础。方法应用DNA重组技术构建含有IL-24和EGFP基因的慢病毒表达载体,并与慢病毒包装系统(ViraPowerTMLentiviralPackaging Mix)共转染293FT细胞,收集上清,纯化浓缩,测定重组病毒的滴度。取重组慢病毒感染hBMSCs,通过嘌呤霉素筛选并纯化hBMSCs,应用实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)及ELISA法分别检测hBMSCs中IL-24mRNA及IL-24蛋白水平的表达情况。结果成功构建了共表达IL-24和EGFP基因的重组慢病毒载体,经包装、纯化及浓缩,病毒滴度为7.25×107PFU/mL。重组慢病毒转导hBMSCs后,通过筛选获得纯化,转导效率可达到100%。qPCR检测示:转导组IL-24mRNA表达明显高于未转导组(P<0.05);ELISA法检测显示转导组hBMSCs上清液IL-24蛋白表达40g/L,未转导组为阴性。结论构建的携带IL-24基因的重组慢病毒载体可有效转导hBMSCs,表达IL-24蛋白。展开更多
目的:研究多黏菌素B通过下调核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。方法:通过MTT法检测多黏菌素B在HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞中的细胞毒...目的:研究多黏菌素B通过下调核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。方法:通过MTT法检测多黏菌素B在HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞中的细胞毒性;使用10、50和100 nmol/L的多黏菌素B处理HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞,通过RT-qPCR方法检测细胞中HBV RNA和HBV DNA水平,ELISA方法检测细胞上清中乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)水平,明确多黏菌素B对HBV的调控作用。利用转录组测序筛选多黏菌素B调控HBV转录复制的效应分子NF-κB;同时检测敲减及过表达NF-κB对HBV的调控作用;利用双萤光素酶报告基因实验检测NF-κB对Cp、Xp、Sp1和Sp2启动子活性的影响;利用回补实验探究多黏菌素B调控HBV转录复制是否依赖于NF-κB。结果:MTT实验结果显示,浓度低于100μmol/L时,多黏菌素B对HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞无明显毒性。在10、50和100 nmol/L的浓度下,多黏菌素B呈浓度依赖性抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平。通过转录组测序发现,多黏菌素B可以显著抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞中NF-κB的表达水平;进一步,过表达NF-κB显著上调HBV感染的HepG2-NTCP细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平,沉默时则相反;同时,双萤光素酶报告基因实验显示NF-κB可增强HBV Sp2启动子活性。回补实验发现多黏菌素B调控HBV转录复制依赖于NF-κB。结论:多黏菌素B通过下调NF-κB进而抑制HBV Sp2启动子活性,最终抑制HBV转录复制。展开更多
文摘肺癌是我国发病率和死亡率增长最快,对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤,其发生发展机制尚未完全清楚。肿瘤的低氧微环境发现于1955年,而肺癌组织低氧直至2006年才被成功检测到。随着研究的深入,低氧对肺癌的影响不仅限于对放疗的抵抗作用,而且还会通过一个重要的促癌分子低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)以及其调节蛋白脯氨酸羟化酶(prolyl hydroxylase domain,PHD)和希佩尔林道病基因产物(product of von Hippel-Lindau gene,pVHL)对肺癌的发生发展、侵袭转移、化疗耐药以及预后等产生重要的调节作用。因此,低氧、HIF、PHD和pVHL必将成为十分有潜力的肺癌治疗靶点。
文摘背景与目的以人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)作为抑癌基因IL-24的细胞载体的研究目前未见报道。应用Gateway法构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green uorescentprotein,EGFP)基因和IL-24基因的慢病毒载体,探讨其对hBMSCs的转导情况,为今后肿瘤的基因治疗奠定基础。方法应用DNA重组技术构建含有IL-24和EGFP基因的慢病毒表达载体,并与慢病毒包装系统(ViraPowerTMLentiviralPackaging Mix)共转染293FT细胞,收集上清,纯化浓缩,测定重组病毒的滴度。取重组慢病毒感染hBMSCs,通过嘌呤霉素筛选并纯化hBMSCs,应用实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)及ELISA法分别检测hBMSCs中IL-24mRNA及IL-24蛋白水平的表达情况。结果成功构建了共表达IL-24和EGFP基因的重组慢病毒载体,经包装、纯化及浓缩,病毒滴度为7.25×107PFU/mL。重组慢病毒转导hBMSCs后,通过筛选获得纯化,转导效率可达到100%。qPCR检测示:转导组IL-24mRNA表达明显高于未转导组(P<0.05);ELISA法检测显示转导组hBMSCs上清液IL-24蛋白表达40g/L,未转导组为阴性。结论构建的携带IL-24基因的重组慢病毒载体可有效转导hBMSCs,表达IL-24蛋白。
文摘目的:研究多黏菌素B通过下调核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。方法:通过MTT法检测多黏菌素B在HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞中的细胞毒性;使用10、50和100 nmol/L的多黏菌素B处理HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞,通过RT-qPCR方法检测细胞中HBV RNA和HBV DNA水平,ELISA方法检测细胞上清中乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)水平,明确多黏菌素B对HBV的调控作用。利用转录组测序筛选多黏菌素B调控HBV转录复制的效应分子NF-κB;同时检测敲减及过表达NF-κB对HBV的调控作用;利用双萤光素酶报告基因实验检测NF-κB对Cp、Xp、Sp1和Sp2启动子活性的影响;利用回补实验探究多黏菌素B调控HBV转录复制是否依赖于NF-κB。结果:MTT实验结果显示,浓度低于100μmol/L时,多黏菌素B对HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞无明显毒性。在10、50和100 nmol/L的浓度下,多黏菌素B呈浓度依赖性抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平。通过转录组测序发现,多黏菌素B可以显著抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞中NF-κB的表达水平;进一步,过表达NF-κB显著上调HBV感染的HepG2-NTCP细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平,沉默时则相反;同时,双萤光素酶报告基因实验显示NF-κB可增强HBV Sp2启动子活性。回补实验发现多黏菌素B调控HBV转录复制依赖于NF-κB。结论:多黏菌素B通过下调NF-κB进而抑制HBV Sp2启动子活性,最终抑制HBV转录复制。
