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内含子源性长链非编码RNA SOS1-IT1对肝癌细胞的调控
被引量:
2
1
作者
付楠楠
刘蕊
刘涛
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2021年第19期2447-2452,2457,共7页
目的探寻内含子来源的长链非编码RNA(lncRNA)SOS1-IT1对肝癌细胞的影响及分子机制。方法用人肝癌细胞系QGY-7703作为细胞模型,CCK-8实验检测细胞活性,EdU实验检测细胞DNA复制活性。生物信息学预测RNA序列中的miR-124潜在结合位点(MRE)...
目的探寻内含子来源的长链非编码RNA(lncRNA)SOS1-IT1对肝癌细胞的影响及分子机制。方法用人肝癌细胞系QGY-7703作为细胞模型,CCK-8实验检测细胞活性,EdU实验检测细胞DNA复制活性。生物信息学预测RNA序列中的miR-124潜在结合位点(MRE)。用真核表达质粒pcDNA3.1(+)作为SOS1-IT1及其MRE,以及miR-124的过表达载体。将MRE克隆插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的编码区下游,构建荧光报告基因质粒。荧光报告基因实验检测miR-124对MRE序列的特异性结合和调控。结果在人肝癌QGY-7703细胞系中,过表达lncRNA SOS1-IT1能够增强细胞的活性[(1.184±0.114)vs.(0.928±0.104),P<0.05]并加速DNA复制[(0.625±0.013)vs.(0.206±0.016),P<0.05],抑制SOS1-IT1则降低细胞活性[(0.648±0.062)vs.(0.870±0.091),P<0.05]并减缓DNA复制[(0.126±0.022)vs.(0.271±0.033),P<0.05]。生物信息学预测发现,SOS1 mRNA及SOS1-IT1分别包含3个和1个潜在的miR-124的MRE。荧光报告基因实验确定,SOS1 mRNA的前2个MRE,以及SOS1-IT1的MRE均为miR-124的有效结合位点。用包含SOS1-MRE的荧光报告基因质粒转染QGY-7703细胞,同时表达SOS1-IT1的MRE能够增强荧光强度[(3.68±0.315)vs.(2.71±0.180),P<0.05]。进一步过表达miR-124后,荧光强度发生回落[(1.09±0.143)vs.(4.04±0.079),P<0.05]。若将任意一个MRE序列突变,荧光强度不再发生变化[(2.57±0.244)vs.(2.71±0.180);(2.66±0.200)vs.(2.88±0.169),均P>0.05]。结论内含子来源的lncRNA SOS1-IT1能够与宿主基因SOS1竞争性结合细胞内源性miR-124,通过竞争性内源RNA(ceRNA)机制促进SOS1的表达,并促进肝癌细胞的活性和DNA复制。
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关键词
肝细胞癌
长链非编码RNA
微RNA
竞争性内源RNA
内含子
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题名
内含子源性长链非编码RNA SOS1-IT1对肝癌细胞的调控
被引量:
2
1
作者
付楠楠
刘蕊
刘涛
机构
天津市
儿童
医院
(
天津大学
儿童
医院
)
消化
科
天津市
第一中心
医院
国家卫生健康委员会危重病急救医学重点实验室
出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2021年第19期2447-2452,2457,共7页
基金
国家自然科学基金项目(编号:81402322)
天津市第一中心医院科技基金项目(编号:2020CM01)。
文摘
目的探寻内含子来源的长链非编码RNA(lncRNA)SOS1-IT1对肝癌细胞的影响及分子机制。方法用人肝癌细胞系QGY-7703作为细胞模型,CCK-8实验检测细胞活性,EdU实验检测细胞DNA复制活性。生物信息学预测RNA序列中的miR-124潜在结合位点(MRE)。用真核表达质粒pcDNA3.1(+)作为SOS1-IT1及其MRE,以及miR-124的过表达载体。将MRE克隆插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的编码区下游,构建荧光报告基因质粒。荧光报告基因实验检测miR-124对MRE序列的特异性结合和调控。结果在人肝癌QGY-7703细胞系中,过表达lncRNA SOS1-IT1能够增强细胞的活性[(1.184±0.114)vs.(0.928±0.104),P<0.05]并加速DNA复制[(0.625±0.013)vs.(0.206±0.016),P<0.05],抑制SOS1-IT1则降低细胞活性[(0.648±0.062)vs.(0.870±0.091),P<0.05]并减缓DNA复制[(0.126±0.022)vs.(0.271±0.033),P<0.05]。生物信息学预测发现,SOS1 mRNA及SOS1-IT1分别包含3个和1个潜在的miR-124的MRE。荧光报告基因实验确定,SOS1 mRNA的前2个MRE,以及SOS1-IT1的MRE均为miR-124的有效结合位点。用包含SOS1-MRE的荧光报告基因质粒转染QGY-7703细胞,同时表达SOS1-IT1的MRE能够增强荧光强度[(3.68±0.315)vs.(2.71±0.180),P<0.05]。进一步过表达miR-124后,荧光强度发生回落[(1.09±0.143)vs.(4.04±0.079),P<0.05]。若将任意一个MRE序列突变,荧光强度不再发生变化[(2.57±0.244)vs.(2.71±0.180);(2.66±0.200)vs.(2.88±0.169),均P>0.05]。结论内含子来源的lncRNA SOS1-IT1能够与宿主基因SOS1竞争性结合细胞内源性miR-124,通过竞争性内源RNA(ceRNA)机制促进SOS1的表达,并促进肝癌细胞的活性和DNA复制。
关键词
肝细胞癌
长链非编码RNA
微RNA
竞争性内源RNA
内含子
Keywords
hepatocellular carcinoma
long non-coding RNA
microRNA
competing endogenous RNA
intron
分类号
R735.3 [医药卫生—肿瘤]
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作者
出处
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被引量
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1
内含子源性长链非编码RNA SOS1-IT1对肝癌细胞的调控
付楠楠
刘蕊
刘涛
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2021
2
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