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人可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量：
1
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作者
孙剑
黎燕
+3 位作者
冯建男
孙瑛勋
胡美茹
沈倍奋
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期171-173,共3页
目的:钓取人B细胞刺激因子基因,构建其表达的大肠杆菌工程菌,并体外表达、纯化可溶性B细胞刺激因子方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA并逆转录得到cDNA,用PCR扩增目的基因,连接到原核生物表达载体pET-30a上。制备质粒后,酶切...
目的:钓取人B细胞刺激因子基因,构建其表达的大肠杆菌工程菌,并体外表达、纯化可溶性B细胞刺激因子方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA并逆转录得到cDNA,用PCR扩增目的基因,连接到原核生物表达载体pET-30a上。制备质粒后,酶切、进行菌落PCR及DN测序对其进行鉴定。然后转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达对纯化的目的蛋白进行肽质量指纹分析、鉴定,并进一步做体外B细胞刺激试验。结果:RT-PCR钓取出可溶性B细胞刺激因子基因片段。DNA测序结果与报道序列完全一致。在IPTG诱导下,目的基因在工程菌中表达。利用镍金属螯合琼脂糖凝胶亲和层析柱分离。纯化目的蛋白的肽质量指纹图经Mascot搜索与B细胞刺激因子吻合。纯化的蛋白在体外可刺激B细胞增殖。结论:成功地克隆可溶性B细胞刺激因子基因,表达的纯化目的蛋白是具有生物学活性的B细胞刺激因子。
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关键词
B细胞刺激因子
表达
B细胞
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职称材料
人B淋巴细胞刺激因子体外活性分析
2
作者
孙剑
林周
+2 位作者
黎燕
冯建男
沈倍奋
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期729-730,共2页
目的:分别采用MTT和ATPLiteTM-M发光法分析人B细胞刺激因子对培养的小鼠脾细胞的生物学活性。方法:分离小鼠脾细胞,培养72h后,MTT和ATP方法测定不同密度脾细胞的增殖,从中选定适当的脾细胞密度分析BLyS活性。然后,检测不同剂量的BLyS对...
目的:分别采用MTT和ATPLiteTM-M发光法分析人B细胞刺激因子对培养的小鼠脾细胞的生物学活性。方法:分离小鼠脾细胞,培养72h后,MTT和ATP方法测定不同密度脾细胞的增殖,从中选定适当的脾细胞密度分析BLyS活性。然后,检测不同剂量的BLyS对脾细胞的刺激作用。结果:用MTT和ATPLiteTM-M发光法分析发现:BLyS在1、5、10和20mg/L时,都能明显促进小鼠脾细胞的增殖。结论:MTT法检测BLyS对小鼠脾细胞的增殖作用是一种简单、快捷的方法。利用这种细胞模型,可以对BLyS拮抗剂进行初步筛选以期获得具有潜在应用价值的治疗剂。
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关键词
B细胞刺激因子
自身免疫性疾病
ATPLiteTM
B细胞
MTT
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职称材料
题名
人可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量：
1
1
作者
孙剑
黎燕
冯建男
孙瑛勋
胡美茹
沈倍奋
机构
天津大学药物科学与技术学院分子细胞药理系
军事医学
科学
院基础医学研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期171-173,共3页
文摘
目的:钓取人B细胞刺激因子基因,构建其表达的大肠杆菌工程菌,并体外表达、纯化可溶性B细胞刺激因子方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA并逆转录得到cDNA,用PCR扩增目的基因,连接到原核生物表达载体pET-30a上。制备质粒后,酶切、进行菌落PCR及DN测序对其进行鉴定。然后转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达对纯化的目的蛋白进行肽质量指纹分析、鉴定,并进一步做体外B细胞刺激试验。结果:RT-PCR钓取出可溶性B细胞刺激因子基因片段。DNA测序结果与报道序列完全一致。在IPTG诱导下,目的基因在工程菌中表达。利用镍金属螯合琼脂糖凝胶亲和层析柱分离。纯化目的蛋白的肽质量指纹图经Mascot搜索与B细胞刺激因子吻合。纯化的蛋白在体外可刺激B细胞增殖。结论:成功地克隆可溶性B细胞刺激因子基因,表达的纯化目的蛋白是具有生物学活性的B细胞刺激因子。
关键词
B细胞刺激因子
表达
B细胞
Keywords
B lymphocyte stimulator
expression
B cell
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
人B淋巴细胞刺激因子体外活性分析
2
作者
孙剑
林周
黎燕
冯建男
沈倍奋
机构
天津大学药物科学与技术学院分子细胞药理系
军事医学
科学
院基础医学研究所
分子
免疫学实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期729-730,共2页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA020503)
文摘
目的:分别采用MTT和ATPLiteTM-M发光法分析人B细胞刺激因子对培养的小鼠脾细胞的生物学活性。方法:分离小鼠脾细胞,培养72h后,MTT和ATP方法测定不同密度脾细胞的增殖,从中选定适当的脾细胞密度分析BLyS活性。然后,检测不同剂量的BLyS对脾细胞的刺激作用。结果:用MTT和ATPLiteTM-M发光法分析发现:BLyS在1、5、10和20mg/L时,都能明显促进小鼠脾细胞的增殖。结论:MTT法检测BLyS对小鼠脾细胞的增殖作用是一种简单、快捷的方法。利用这种细胞模型,可以对BLyS拮抗剂进行初步筛选以期获得具有潜在应用价值的治疗剂。
关键词
B细胞刺激因子
自身免疫性疾病
ATPLiteTM
B细胞
MTT
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
孙剑
黎燕
冯建男
孙瑛勋
胡美茹
沈倍奋
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
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职称材料
2
人B淋巴细胞刺激因子体外活性分析
孙剑
林周
黎燕
冯建男
沈倍奋
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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