目的:探讨铁过载对小鼠脾脏CD8^+T细胞凋亡及分泌功能的影响。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、去铁组、抗氧化组,每组10只。腹腔注射右旋糖酐铁建立小鼠铁过载模型,观察小鼠铁负荷情况及脾脏CD8^+T淋巴细胞内可变铁...目的:探讨铁过载对小鼠脾脏CD8^+T细胞凋亡及分泌功能的影响。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、去铁组、抗氧化组,每组10只。腹腔注射右旋糖酐铁建立小鼠铁过载模型,观察小鼠铁负荷情况及脾脏CD8^+T淋巴细胞内可变铁池(LIP)水平,活性氧(ROS)水平;用流式细胞术检测脾脏CD8^+T细胞比例以及IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B和perforin细胞因子的分泌情况,Annexin/PI标记流式细胞术检测CD8^+T细胞凋亡。免疫磁珠分选小鼠脾细胞获得CD8^+T细胞,RT-PCR检测CD8^+T细胞的IFN-γ、TNF-α、G ranzyme-B、perforin、BCL-2和BAX表达。结果:脾组织铁染色及流式细胞术检测均显示脾发生铁过载。与对照组相比外周血中CD8^+T细胞中ROS明显上升(108.45±9.22 vs 187.48±5.36,P<0.01)。与对照组相比,铁过载组小鼠脾脏CD8^+T细胞比例明显降低(7.41±1.23)%vs(14.05±0.79)%,(P<0.01)。流式细胞术检测显示,与对照组相比,铁过载组小鼠脾CD8^+T细胞IFN-γ显著降低(11.62±1.99)%vs(3.77±0.84)%,(P<0.05),GranzymeB表达显著降低(11.36±1.48)%vs(5.29±1.74)%,(P<0.05);小鼠脾CD8^+T细胞中IFN-γ(×10-4)表达(10.94±0.13 vs 2.19±0.78,P<0.05)明显下降,Granzyme-B(×10-3)表达(7.70±0.75 vs 4.88±0.08,P<0.05)明显下降。与对照组相比,小鼠脾CD8^+T细胞凋亡率明显增高(11.33±0.48)%vs(2.27±0.33)%,(P<0.05);小鼠脾CD8^+T细胞中BCL-2表达(×10-3)明显下降(48.29±5.81 vs 1.17±0.21,P<0.05),BAX表达(×10-2)明显上升(13.90±2.67 vs 446.93±76.64,P<0.05)。上述铁过载对小鼠脾CD8^+T细胞的作用经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转。结论:铁过载可通过上调脾CD8^+T细胞内ROS进而上调BAX并下调BCL-2,增加CD8^+T细胞凋亡率,抑制CD8^+T细胞IFN-γ、Granzyme-B和蛋白的表达。经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转此作用。展开更多
文摘目的:探讨铁过载对小鼠脾脏CD8^+T细胞凋亡及分泌功能的影响。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、去铁组、抗氧化组,每组10只。腹腔注射右旋糖酐铁建立小鼠铁过载模型,观察小鼠铁负荷情况及脾脏CD8^+T淋巴细胞内可变铁池(LIP)水平,活性氧(ROS)水平;用流式细胞术检测脾脏CD8^+T细胞比例以及IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B和perforin细胞因子的分泌情况,Annexin/PI标记流式细胞术检测CD8^+T细胞凋亡。免疫磁珠分选小鼠脾细胞获得CD8^+T细胞,RT-PCR检测CD8^+T细胞的IFN-γ、TNF-α、G ranzyme-B、perforin、BCL-2和BAX表达。结果:脾组织铁染色及流式细胞术检测均显示脾发生铁过载。与对照组相比外周血中CD8^+T细胞中ROS明显上升(108.45±9.22 vs 187.48±5.36,P<0.01)。与对照组相比,铁过载组小鼠脾脏CD8^+T细胞比例明显降低(7.41±1.23)%vs(14.05±0.79)%,(P<0.01)。流式细胞术检测显示,与对照组相比,铁过载组小鼠脾CD8^+T细胞IFN-γ显著降低(11.62±1.99)%vs(3.77±0.84)%,(P<0.05),GranzymeB表达显著降低(11.36±1.48)%vs(5.29±1.74)%,(P<0.05);小鼠脾CD8^+T细胞中IFN-γ(×10-4)表达(10.94±0.13 vs 2.19±0.78,P<0.05)明显下降,Granzyme-B(×10-3)表达(7.70±0.75 vs 4.88±0.08,P<0.05)明显下降。与对照组相比,小鼠脾CD8^+T细胞凋亡率明显增高(11.33±0.48)%vs(2.27±0.33)%,(P<0.05);小鼠脾CD8^+T细胞中BCL-2表达(×10-3)明显下降(48.29±5.81 vs 1.17±0.21,P<0.05),BAX表达(×10-2)明显上升(13.90±2.67 vs 446.93±76.64,P<0.05)。上述铁过载对小鼠脾CD8^+T细胞的作用经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转。结论:铁过载可通过上调脾CD8^+T细胞内ROS进而上调BAX并下调BCL-2,增加CD8^+T细胞凋亡率,抑制CD8^+T细胞IFN-γ、Granzyme-B和蛋白的表达。经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转此作用。
