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液相芯片技术在检验医学和生物医学中的应用 被引量:32
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作者 杨洋 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期256-261,共6页
液相芯片技术是以100种不同荧光编码的微球作为探针的载体,生物分子间的反应在悬浮液态体系中进行的一类新的生物芯片技术.在这个灵活和开放的平台中可进行蛋白质、核酸等生物大分子的检测.液相芯片较传统的固相芯片的优势在于检测准确... 液相芯片技术是以100种不同荧光编码的微球作为探针的载体,生物分子间的反应在悬浮液态体系中进行的一类新的生物芯片技术.在这个灵活和开放的平台中可进行蛋白质、核酸等生物大分子的检测.液相芯片较传统的固相芯片的优势在于检测准确、信息质量稳定、可重复性好.液相芯片以其易于操作、高通量、高灵敏度、高准确度、高精密度以及宽的线性测定范围的特点,逐渐进入了临床诊断领域. 展开更多
关键词 液相芯片 蛋白质芯片 基因芯片 生物芯片
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RNA干扰抑制癌胚抗原表达对结肠癌细胞增殖的影响 被引量:4
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作者 崔欲晓 刘民 +1 位作者 李欣 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期78-82,共5页
癌胚抗原(CEA)作为肿瘤标志物,在多种恶性肿瘤中高表达.为探索CEA在肿瘤发生发展过程中的生物学作用,本研究以结肠癌细胞株8307为研究对象,应用RNAi技术抑制CEA在8307细胞中的表达,观察其对8307细胞生长的影响.依据siRNA设计原则,设计... 癌胚抗原(CEA)作为肿瘤标志物,在多种恶性肿瘤中高表达.为探索CEA在肿瘤发生发展过程中的生物学作用,本研究以结肠癌细胞株8307为研究对象,应用RNAi技术抑制CEA在8307细胞中的表达,观察其对8307细胞生长的影响.依据siRNA设计原则,设计合成靶向CEA的shRNA并克隆到pSilencer2.1-U6 neo载体中,成功构建了CEA shRNA表达载体,通过脂质体介导转染8307细胞,经G418筛选出抑制CEA表达的稳定细胞.RT-PCR、Western印迹分别检测CEA mRNA及蛋白表达水平,MTT及集落形成实验检测细胞增殖活性.实验结果显示,构建的CEA shRNA表达载体明显抑制CEA mRNA及蛋白水平的表达.MTT实验中,CEA表达下调的8307细胞生长活性降低,与对照组相比,抑制率达39%(P<0.05),细胞集落形成能力也显著降低(P<0.05).上述结果初步证明,构建的CEA shRNA表达载体能明显降低CEA的表达,并抑制结肠癌细胞增殖活性. 展开更多
关键词 癌胚抗原 RNA干扰 SHRNA 结肠癌
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胃腺癌细胞系MGC803中miR-23a靶基因IL-6R的鉴定 被引量:2
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作者 朱丽华 汤华 刘涛 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期700-703,共4页
目的建立双荧光蛋白报告基因分析系统,并用来验证miR-23a的靶基因白细胞介素-6受体(IL-6R)。方法选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将IL-6R3′UTR的一段特异性序列插入该质粒中,并与miR-23a及表达红色荧光蛋白质pDsRed2-N1共同转... 目的建立双荧光蛋白报告基因分析系统,并用来验证miR-23a的靶基因白细胞介素-6受体(IL-6R)。方法选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将IL-6R3′UTR的一段特异性序列插入该质粒中,并与miR-23a及表达红色荧光蛋白质pDsRed2-N1共同转染胃腺癌细胞系MGC803,转染后的细胞和提取的蛋白样品,分别用荧光显微镜和荧光分光光度计进行定性和定量检测。结果共转miR-23a和pcDNA3/EGFP-IL-6R3′UTR质粒后,绿色荧光蛋白的表达量明显低于pcDNA3和pcD-NA3/EGFP-IL-6R3′UTR共转组。结论研究表明IL-6R可能是miR-23a的直接靶基因。 展开更多
关键词 胃肿瘤 腺癌 MGC803 miR-23a 白细胞介素-6受体 靶基因
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Wnt3a重组真核载体的构建及其在晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞的表达 被引量:1
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作者 包秀丽 汤欣 赵建丽 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第11期1033-1035,共3页
目的构建Wnt3a真核表达载体并检测其在SRA01/04细胞中的瞬时表达情况。方法采用cDNA文库设计的含有Wnt3acDNA全长序列模板的菌种,PCR法获得Wnt3a片段,与pcDNA3连接,进行酶切鉴定及测序。重组质粒瞬时转染人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞... 目的构建Wnt3a真核表达载体并检测其在SRA01/04细胞中的瞬时表达情况。方法采用cDNA文库设计的含有Wnt3acDNA全长序列模板的菌种,PCR法获得Wnt3a片段,与pcDNA3连接,进行酶切鉴定及测序。重组质粒瞬时转染人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞,检测Wnt3a蛋白表达情况。结果 Wnt3a-pcDNA3表达载体基因测序与Genebank报告基因序列一致,Wnt3a-pcDNA3瞬时转染至SRA01/04细胞,Wnt3a蛋白表达明显增强;正常人晶状体上皮细胞系SRA01/04中,仅有少量Wnt3a表达。结论成功构建Wnt3a-pcDNA3真核表达,获得Wnt3a/SRA01/04细胞系,为研究后囊膜混浊的病理机制和防治提供实验基础。 展开更多
关键词 WNT3A 晶状体上皮细胞 载体构建 转染 后囊膜混浊
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MicroRNA-17-5p反义寡核苷酸阻滞白血病K562细胞的细胞周期
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作者 马卓娅 李欣 +1 位作者 汤华 刘民 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期644-647,共4页
目的:以反义寡核苷酸技术研究microRNA-17-5p(miR-17-5p)对人慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:脂质体法将miR-17-5p反义寡核苷酸(miR-17-5p antisense oligonucleotide,miR-17-5p-ASO)和对照无义寡核苷酸(control... 目的:以反义寡核苷酸技术研究microRNA-17-5p(miR-17-5p)对人慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:脂质体法将miR-17-5p反义寡核苷酸(miR-17-5p antisense oligonucleotide,miR-17-5p-ASO)和对照无义寡核苷酸(control nonsense oligonucleotide,Ctrl-NSO)转染入K562细胞,同时设未转染对照组(Ctrl)。MTT法检测K562细胞的增殖,TUNEL法检测K562细胞的凋亡,流式细胞术检测K562细胞周期的改变。结果:MTT检测结果显示,miR-17-5p-ASO组K562细胞增殖活性为Ctrl-NSO组的(61.7±4.7)%,miR-17-5p-ASO转染显著抑制K562细胞的增殖(P<0.05)。TUNEL检测显示,miR-17-5p-ASO转染不影响K562细胞凋亡(P>0.05);miR-17-5p-ASO组K562细胞G2期细胞比例为(10.8±0.8)%,显著低于Ctrl-NSO组和Ctrl组的(34.6±0.4)%和(33.9±1.3)%(P<0.05)。结论:MiR-17-5p反义寡核苷酸可以通过调控细胞周期抑制K562细胞的增殖,有望成为白血病治疗的新手段。 展开更多
关键词 microRNA-17-5p 反义寡核苷酸 白血病 K562细胞 细胞周期
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