大鼠骨髓间充质干细胞神经分化潜能的体内外研究 被引量：3

1

作者 邓全军 张建宁 +2 位作者 王志涛 康春生 浦佩玉 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期17-22,共6页

目的体内外研究大鼠骨髓间充质于细胞向神经细胞分化的潜能。方法从大鼠骨髓中分离培养得到的BMSCs传至5代后分为:A组,无诱导剂组;B组,神经细胞诱导组;C组,成骨诱导组;D组,脂肪细胞诱导组。流式细胞仪检测细胞的免疫表型。A,B两组行神... 目的体内外研究大鼠骨髓间充质于细胞向神经细胞分化的潜能。方法从大鼠骨髓中分离培养得到的BMSCs传至5代后分为:A组,无诱导剂组;B组,神经细胞诱导组;C组,成骨诱导组;D组,脂肪细胞诱导组。流式细胞仪检测细胞的免疫表型。A,B两组行神经细胞相关蛋白检测;C组行茜素红染色,D组行油红O染色。将Hoechst33258标记的第5代BMSCs立体定向植入(n=10只)大鼠顶叶皮质,4周后观测。结果BMSCs表面CD29、CD44、CD90阳性,CD31、CD34、CD45阴性。在体外,A组细胞仅Nestin阳性,B组细胞Nestin、MAP2、NSE、GFAP均呈阳性,且形态类似神经细胞。C组经诱导后可见矿化结节。D组细胞浆内出现脂肪滴。大鼠脑内移植部位可见Hoechst33258染色阳性的BMSCs。并呈Nestin,MAP2、NSE、GFAP阳性。结论体外BMSCs易于分离、培养及扩增。BMSCs具有多向分化潜能,可通过诱导向脂肪、成骨及神经细胞分化。在体外能自发表达神经干细胞相关蛋白,在大鼠脑内可自发向神经细胞分化。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 脂肪细胞 神经细胞 细胞分化

在线阅读 下载PDF 职称材料

神经生长因子对糖皮质激素诱导大鼠海马神经元凋亡的保护作用 被引量：6

2

作者 夏颖华 孔晓冬 +4 位作者 雷平 张释双 张明义 赵子龙 葛歆瞳 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2017年第3期209-213,共5页

目的探讨神经生长因子对糖皮质激素诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法体外分离原代培养18只新生Wister大鼠海马神经元,噻唑蓝法测定地塞米松诱导海马神经元凋亡的最低敏感剂量,观察不同质量浓度神经生长因子对地塞米松(0.10... 目的探讨神经生长因子对糖皮质激素诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法体外分离原代培养18只新生Wister大鼠海马神经元,噻唑蓝法测定地塞米松诱导海马神经元凋亡的最低敏感剂量,观察不同质量浓度神经生长因子对地塞米松(0.10×10^(-6)mol/L)诱导海马神经元凋亡的保护作用。结果与阴性对照组相比,地塞米松Ⅰ组(10×10^(-6)mol/L)、Ⅱ组(1×10^(-6)mol/L)和Ⅲ组(0.10×10^(-6)mol/L)大鼠海马神经元活性均降低(P=0.000,0.000,0.000)。予不同质量浓度神经生长因子后,神经生长因子0.18 ng/ml组大鼠海马神经元活性低于阴性对照组(P=0.000)和阳性对照组(P=0.010),神经生长因子18 ng/ml组大鼠海马神经元活性高于阳性对照组(P=0.000)和神经生长因子0.18 ng/ml组(P=0.000)。结论糖皮质激素可以诱导体外培养的大鼠海马神经元凋亡,地塞米松0.10×10^(-6)mol/L是诱导海马神经元凋亡的最低敏感剂量,神经生长因子可以拮抗地塞米松诱导的大鼠海马神经元凋亡。 展开更多

关键词 神经生长因子 糖皮质激素类 海马 细胞凋亡 细胞 培养的 疾病模型 动物

在线阅读 下载PDF 职称材料

人脑胶质瘤表皮生长因子受体表达及与增殖和侵袭相关性的研究 被引量：7

3

作者 康春生 浦佩玉 +5 位作者 李捷 于士柱 王虎 江荣才 董伦 王广秀 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期349-352,i011,共5页

目的 探讨胶质瘤细胞EGFR基因表达以及和肿瘤细胞增殖及侵袭性生长的相互关系。方法 应用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR、Ki67、MMP2和MMP9表达。结果 EGFR、Ki67、MMP2和MMP9在胶... 目的 探讨胶质瘤细胞EGFR基因表达以及和肿瘤细胞增殖及侵袭性生长的相互关系。方法 应用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR、Ki67、MMP2和MMP9表达。结果 EGFR、Ki67、MMP2和MMP9在胶质瘤中的表达不同,正常脑组织和WHOⅡ级与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤和体外细胞系之间的表达差异显著,且四者间的表达水平两两相关。结论 EGFR过表达可以引起Ki67、MMP2和MMP9的过表达,从而促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。 展开更多

关键词 胶质瘤 表皮生长因子 增殖 侵袭

在线阅读 下载PDF 职称材料

靶向表皮生长因子受体psiRNA抑制人脑胶质瘤细胞系U251生长的体外研究 被引量：5

4

作者 韩磊 张安玲 +5 位作者 康春生 许鹏 王广秀 贾志凡 张春智 浦佩玉 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2008年第5期442-448,共7页

目的探讨靶向表皮生长因子受体(EGFR)RNA干扰(RNAi)技术抑制人脑胶质瘤细胞系U251EGFR表达后,在体外对细胞增殖活性和侵袭能力的抑制作用。方法应用流式细胞术、Annexin V法、MTT法、Matrigel细胞外基质生长实验和Transwell细胞侵袭实... 目的探讨靶向表皮生长因子受体(EGFR)RNA干扰(RNAi)技术抑制人脑胶质瘤细胞系U251EGFR表达后,在体外对细胞增殖活性和侵袭能力的抑制作用。方法应用流式细胞术、Annexin V法、MTT法、Matrigel细胞外基质生长实验和Transwell细胞侵袭实验评价由脂质体Lipofectamine 2000介导转染的人脑胶质瘤细胞系U251转染前后细胞增殖活性和侵袭能力的变化;Western blotting检测EGFR和PI3K/Akt信号转导通路中相关蛋白质的表达水平。结果与对照组和psiRNA-scr组比较,psiRNA-EGFR组EGFR以及PI3K/Akt信号转导通路中相关蛋白质表达水平降低(均P=0.000)。转染后,psiRNA-EGFR组细胞阻滞于G0和G1期,S期细胞数目减少(均P=0.000);其细胞凋亡率为(9.60±0.26)%,高于对照组和psiRNA-scr组(均P=0.000);自培养第2天其细胞增殖速率即呈下降趋势,且低于对照组和psiRNA-scr组(均P=0.001)。结论靶向表皮生长因子受体RNAi技术可以序列特异性地抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞表皮生长因子受体表达,在体外对U251细胞生长具有明显抑制作用。靶向表皮生长因子受体psiRNA基因治疗可能成为脑胶质瘤治疗的新策略。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 RNA 小分子干扰 受体 表皮生长因子 转染

在线阅读 下载PDF 职称材料

反义miR-221/222上调Cx43恢复人胶质瘤细胞系U251细胞间缝隙连接通讯的体外研究 被引量：2

5

作者 张春智 康春生 +3 位作者 杨卫东 王广秀 张安玲 浦佩玉 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2009年第6期578-582,共5页

目的探讨反义miR-221/222上调缝隙连接蛋白43(Cx43)以恢复人胶质瘤细胞系U251细胞间缝隙连接通讯的作用机制。方法脂质体共转染反义寡核苷酸(AS-miR-221/222),下调U251细胞miR-221和miR-222表达水平,采用Northern blotting法检测U251细... 目的探讨反义miR-221/222上调缝隙连接蛋白43(Cx43)以恢复人胶质瘤细胞系U251细胞间缝隙连接通讯的作用机制。方法脂质体共转染反义寡核苷酸(AS-miR-221/222),下调U251细胞miR-221和miR-222表达水平,采用Northern blotting法检测U251细胞miR-221和miR-222表达水平;虫荧光素酶活性分析并获得靶基因;Western blotting法和免疫荧光法检测U251细胞Cx43表达水平;划痕标记染料示踪技术检测细胞间缝隙连接通讯。结果 AS-miR-221/222组U251细胞miR-221(t=1312.152,P=0.000)和miR-222(t=1226.031,P=0.000)表达水平明显降低;荧光活性明显高于其他各组(均P=0.000),证实Cx43基因为miR-221和miR-222靶基因;Cx43表达水平亦明显升高,且高于无义序列组(t=735.768,P=0.000)和对照组(t=686.252,P=0.000)。对照组和无义序列组U251细胞细胞间缝隙连接通讯缺失,罗氏黄仅传递划痕细胞边缘单列细胞;AS-miR-221/222组U251细胞细胞间缝隙连接通讯明显恢复,罗氏黄传递至划痕细胞邻近7～8列细胞。结论反义miR-221/222可通过上调Cx43表达水平恢复人胶质瘤细胞系U251细胞间缝隙连接通讯。 展开更多

关键词 RNA 反义 RNA 小分子干扰 连接蛋白43 脑肿瘤 神经胶质瘤 缝隙接合部 转染 细胞 培养的

在线阅读 下载PDF 职称材料

miRNA-21与肿瘤相关研究新进展 被引量：15

6

作者 杨旸(综述) 康春生(审校) 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期357-360,共4页

小RNA(microRNA,miRNA)是近年发现的一类内源性非编码单链RNA,在转录后水平对基因表达发挥负调控作用,参与细胞生长、发育、凋亡等重要生物过程。研究发现miRNA-21在肿瘤的发生发展过程中扮演着非常重要的角色,在不同类型肿瘤中的表达... 小RNA(microRNA,miRNA)是近年发现的一类内源性非编码单链RNA,在转录后水平对基因表达发挥负调控作用,参与细胞生长、发育、凋亡等重要生物过程。研究发现miRNA-21在肿瘤的发生发展过程中扮演着非常重要的角色,在不同类型肿瘤中的表达均出现明显上升,与肿瘤细胞的增殖、侵袭、血管的生成和抗药性等生物学行为相关。本文将从miRNA-21的表达与定位、对靶基因的调控以及对miRNA-21的转录调控等方面进行综述。 展开更多

关键词 MIRNA-21 肿瘤 信号通路 转录

在线阅读 下载PDF 职称材料

体外大鼠骨髓间充质干细胞多向分化潜能的研究 被引量：2

7

作者 邓全军 张建宁 +3 位作者 王志涛 李妍妍 康春生 浦佩玉 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2007年第6期521-526,共6页

目的研究体外大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞等不同组织细胞多向分化的潜能。方法从SD大鼠股骨骨髓中获得间充质干细胞,原代培养后1∶2传代,传至第5代后分为普通传代培养组、神经细胞诱导组、成骨细胞诱导组和脂肪细胞诱导组。倒置相... 目的研究体外大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞等不同组织细胞多向分化的潜能。方法从SD大鼠股骨骨髓中获得间充质干细胞,原代培养后1∶2传代,传至第5代后分为普通传代培养组、神经细胞诱导组、成骨细胞诱导组和脂肪细胞诱导组。倒置相差显微镜下观察各组细胞生长情况、形态变化以及矿化结节和脂肪细胞的形成;流式细胞检测第5代大鼠骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CD90、CD31、CD34、CD45;免疫组织化学检测普通传代培养组和神经细胞诱导组细胞巢蛋白、微管相关蛋白-2、胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶等神经细胞相关蛋白的表达情况。结果大鼠骨髓间充质干细胞呈贴壁生长,细胞扩增至第5代时形态趋于一致,呈梭形。大鼠骨髓间充质干细胞表面抗原CD29(99.83%)、CD44(99.77%)、CD90(99.86%)均呈阳性表达,CD31(0.83%)、CD34(1.78%)、CD45(2.90%)无表达。在体外,普通传代培养细胞仅巢蛋白呈阳性表达;由神经细胞诱导的细胞巢蛋白、微管相关蛋白-2、胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶均呈阳性表达,且形态类似神经细胞;由成骨细胞诱导的细胞质内可见矿化结节形成;由脂肪细胞诱导的细胞质内出现多个猩红色呈簇状的脂肪滴。结论大鼠骨髓间充质干细胞易于提取、纯化和扩增,可于体外自发表达神经干细胞标志蛋白,并可通过诱导向神经细胞、成骨细胞及脂肪细胞分化。提示骨髓间充质干细胞不仅具有多向分化潜能,而且可能具有自发向神经干细胞分化的特性。 展开更多

关键词 干细胞 骨髓细胞 脂细胞 成骨细胞 神经元 细胞分化

在线阅读 下载PDF 职称材料

脑胶质瘤信号转导通路研究进展 被引量：5

8

作者 康春生 浦佩玉 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2008年第5期388-392,共5页

脑胶质瘤是临床最为常见的原发性颅内肿瘤，约占颅内肿瘤的46％，占成年人全身肿瘤的2％；恶性胶质瘤的发病率为（5—8）／100万，在1998年WH0公布的按死亡率顺序排位中，恶性胶质瘤为34岁以内患者的第2位死亡原因，35～54岁患者的第3... 脑胶质瘤是临床最为常见的原发性颅内肿瘤，约占颅内肿瘤的46％，占成年人全身肿瘤的2％；恶性胶质瘤的发病率为（5—8）／100万，在1998年WH0公布的按死亡率顺序排位中，恶性胶质瘤为34岁以内患者的第2位死亡原因，35～54岁患者的第3位死亡原因。脑胶质瘤难以通过手术完全切除，而药物化疗和放射治疗不能高度特异性地杀伤肿瘤细胞，并且可能产生严重的不良反应。近30年的临床实践显示，上述情况并未得到根本的改善， 展开更多

关键词 脑胶质瘤 信号转导通路 原发性颅内肿瘤 恶性胶质瘤 杀伤肿瘤细胞 死亡原因 临床实践 全身肿瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

靶向表皮生长因子受体的小分子RNA干扰抑制人脑胶质瘤Notch1表达的实验研究 被引量：1

9

作者 裘明哲 浦佩玉 +4 位作者 康春生 张志勇 王广秀 贾志凡 江荣才 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2006年第3期198-202,共5页

目的探讨RNA干扰表皮生长因子受体后Notch1在人脑胶质瘤中的表达变化。方法应用免疫组织化学方法检测不同级别脑胶质瘤组织标本中Notch1的表达水平,并进行相关分析。选择人表皮生长因子受体的两个RNA干扰靶序列构建靶向表皮生长因子受体... 目的探讨RNA干扰表皮生长因子受体后Notch1在人脑胶质瘤中的表达变化。方法应用免疫组织化学方法检测不同级别脑胶质瘤组织标本中Notch1的表达水平,并进行相关分析。选择人表皮生长因子受体的两个RNA干扰靶序列构建靶向表皮生长因子受体的RNA干扰表达质粒,进行脂质体介导的TJ905人脑恶性胶质瘤细胞系表达;应用荧光定量逆转录-聚合酶链反应仪观察RNA干扰表皮生长因子受体后TJ905人脑恶性胶质瘤细胞系Notch1的表达变化。结果免疫组织化学检测显示,在不同级别胶质瘤组织标本中Notch1的阳性表达率分别为Ⅳ级93.33%(14/15);Ⅲ级92.31%(12/13);Ⅱ级68.42%(13/19)。Ⅱ级阳性表达程度较Ⅲ、Ⅳ级弱,组间差异有高度统计学意义(H=6.944,P<0.01),提示高级别胶质瘤Notch1阳性表达率高于低级别。RNA干扰表皮生长因子受体后,Notch1在TJ905胶质母细胞瘤细胞系中的表达下降(F=578.728,P<0.01):TJ905组与TJ905+空载组相比,差异无统计学意义(P>0.05);TJ905+空载组与TJ905+516组相比,差异有统计学意义(q=6.359,P<0.05);TJ905+516组与TJ905+2400组比较,差异有统计学意义(q=4.501,P<0.05);TJ905组与TJ905+2400组相比差异亦有统计学意义(q=10.015,P<0.05)。责任基因相对表达量,TJ905组和TJ905+空载组均为2.48×10-5,TJ905+516组为6.64×10-6,TJ905+2400组为2.08×10-7。结论表皮生长因子受体与Notch1关系密切,对二者关系的进一步研究可为胶质瘤的基因治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 RNA 信使 RNA干扰 受体 表皮生长因子 脑肿瘤 神经胶质瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

胶质瘤细胞U251中RNA干扰敲低wnt2的表达下调PI3K/AKT信号通路的体内外研究

10

作者 张志勇 张晋霞 +4 位作者 李绍彩 秦丽娟 浦佩玉 裘明哲 江荣才 《海南医学院学报》 CAS 2013年第6期721-724,727,共5页

目的:研究人脑胶质瘤细胞U251中RNA干扰敲低wnt2的表达对PI3K/AKT信号通路的影响。方法:向U251细胞转染靶向Wnt2的siRNA后,免疫印记及免疫荧光检测转染后,Wnt2、Frizzled2、β-catenin、PI3K、磷酸化AKT的表达变化。建立裸鼠胶质瘤皮下... 目的:研究人脑胶质瘤细胞U251中RNA干扰敲低wnt2的表达对PI3K/AKT信号通路的影响。方法:向U251细胞转染靶向Wnt2的siRNA后,免疫印记及免疫荧光检测转染后,Wnt2、Frizzled2、β-catenin、PI3K、磷酸化AKT的表达变化。建立裸鼠胶质瘤皮下动物模型,瘤内注射Wnt2siRNA观察以上指标的表达变化。结果:体外应用RNA干扰敲低Wnt2的表达后,frizzled2、β-catenin、PI3K、p-AKT的表达均下调。结论:胶质瘤细胞U251中RNA干扰敲低Wnt2的表达后,PI3K/AKT信号通路活性受到抑制。 展开更多

关键词 胶质瘤 Wnt2 FRIZZLED 2 β-catenin PI3K 磷酸化AKT

在线阅读 下载PDF 职称材料

颅脑损伤术后并发迟发性颅内血肿分析（附22例报告） 被引量：45

11

作者 杨卫东 王明璐 +1 位作者 杨树源 浦佩玉 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期282-284,共3页

本文报告了２２例颅脑损伤开颅术后并发２５个迟发性颅内血肿。发生在幕上２２个，幕下３个。脑实质内１１个，硬膜下４个，硬膜外１０个。并对其发生机理进行探讨，认为脑血管舒缩机制障碍、手术前后颅内压急骤变化、以及凝血机制障碍... 本文报告了２２例颅脑损伤开颅术后并发２５个迟发性颅内血肿。发生在幕上２２个，幕下３个。脑实质内１１个，硬膜下４个，硬膜外１０个。并对其发生机理进行探讨，认为脑血管舒缩机制障碍、手术前后颅内压急骤变化、以及凝血机制障碍是术后发生迟发性颅内血肿的重要因素。对其诊断和治疗提出建议。 展开更多

关键词 颅脑损伤 手术后 并发症 颅内血肿 迟发性

在线阅读 下载PDF 职称材料

电刺激预处理对大鼠颅脑创伤后认知功能的影响 被引量：6

12

作者 周子伟 韩振营 +7 位作者 单阳 田野 陈通恒 李盛杰 刘丽 雷平 江荣才 张建宁 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2011年第6期607-613,共7页

目的探讨非创伤性(电刺激)动员外周血内皮祖细胞对大鼠颅脑创伤后认知功能的影响及其可能机制。方法于电刺激后24h对成年雄性Wistar大鼠施行液压打击术,制备颅脑创伤模型,流式细胞术测量创伤后外周血内皮祖细胞数量;免疫组织化学染色观... 目的探讨非创伤性(电刺激)动员外周血内皮祖细胞对大鼠颅脑创伤后认知功能的影响及其可能机制。方法于电刺激后24h对成年雄性Wistar大鼠施行液压打击术,制备颅脑创伤模型,流式细胞术测量创伤后外周血内皮祖细胞数量;免疫组织化学染色观察患侧海马区血管性血友病因子表达阳性(vwF^+)微血管密度;Morris水迷宫实验评价大鼠伤后认知功能恢复程度。结果与单纯打击组比较,创伤后3h和6h电刺激预处理组大鼠外周血内皮祖细胞数量显著升高(均P=0.000),之后逐渐降至正常水平;与其他各组相比,伤后第1天电刺激预处理组大鼠海马区vWF^+微血管密度即开始增加,至第7天达高峰平台期(P=0.000);与单纯打击组相比,Morris水迷宫实验训练第3天时电刺激预处理组大鼠逃避潜伏期开始缩短,随着训练时间的延长,组间差异明显增加且具有统计学意义(P=0.016)。结论电刺激预处理可促进颅脑创伤后认知功能的恢复。其潜在的机制可能与创伤前动员机体外周血内皮祖细胞,使得伤后更多的内皮祖细胞归巢到损伤区域,有助于伤后血管新生和神经功能的恢复。 展开更多

关键词 经皮神经电刺激 脑损伤 干细胞 内皮细胞 认知障碍 预后

在线阅读 下载PDF 职称材料

人外周血内皮祖细胞分离培养与鉴定 被引量：5

13

作者 郭新宾 崔维韵 +2 位作者 刘庆国 张建宁 刘丽 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2009年第2期159-163,共5页

目的探讨人外周血内皮祖细胞体外分离培养和诱导分化的实验方法,为其在神经系统疾病中的应用提供理论依据。方法抽取健康成年男性志愿者外周血10ml,密度梯度离心获得单个核细胞,经体外培养后于倒置相差荧光显微镜下观察细胞生长情况及... 目的探讨人外周血内皮祖细胞体外分离培养和诱导分化的实验方法,为其在神经系统疾病中的应用提供理论依据。方法抽取健康成年男性志愿者外周血10ml,密度梯度离心获得单个核细胞,经体外培养后于倒置相差荧光显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;免疫荧光染色检测细胞表面标志物CD133、CD34和凝血因子Ⅷ表达水平;流式细胞术检测CD133-FITC和CD34-PE双阳性细胞所占比例及CD34-PE单阳性细胞所占比例。结果倒置相差荧光显微镜下观察,人外周血单个核细胞经体外培养至第2天时,呈贴壁生长;至第4～6天时细胞集落形成,集落周围有内皮样细胞,细胞质和细胞膜呈红色和绿色双色荧光,细胞核呈蓝色荧光,提示内皮祖细胞特异性吸附Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的Ⅰ型荆豆凝集素,具有内皮细胞功能。免疫荧光染色CD133、CD34和凝血因子Ⅷ表达阳性;流式细胞术检测CD133-FITC和CD34-PE双阳性细胞所占比例为38.30%,CD34-PE单阳性细胞所占比例为82.60%。结论初步确立人外周血内皮祖细胞体外分离培养和诱导分化的实验方法,为内皮祖细胞的移植研究奠定了基础。 展开更多

关键词 干细胞 内皮 血管 细胞 培养的 细胞分离 细胞培养技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组人红细胞生成素改善小鼠颅脑创伤后认知功能的机制探讨 被引量：4

14

作者 陈通恒 周子伟 +6 位作者 李盛杰 田野 杨国巍 王世召 魏铭 雷平 张建宁 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2013年第2期142-148,共7页

研究背景颅脑创伤后的炎症反应可导致继发性脑损伤，引起神经元凋亡和神经功能缺损。重组人红细胞生成素（rhEPO）具有神经保护作用，我们采用液压打击动物模型，观察经rhEPO治疗后脑组织中性粒细胞变化和神经元凋亡情况，以探讨该药对... 研究背景颅脑创伤后的炎症反应可导致继发性脑损伤，引起神经元凋亡和神经功能缺损。重组人红细胞生成素（rhEPO）具有神经保护作用，我们采用液压打击动物模型，观察经rhEPO治疗后脑组织中性粒细胞变化和神经元凋亡情况，以探讨该药对颅脑创伤后神经功能保护的潜在作用机制。方法采用液压打击模型模拟颅脑创伤，分别于创伤后第l、3和7天观察不同处理组小鼠海马区髓过氧化物酶阳性中性粒细胞和Caspase-3阳性神经元表达变化；并于创伤后第7～11天进行Morris水迷宫实验，记录小鼠逃避潜伏期。结果与假手术组相比，伤后第1天小鼠海马区髓过氧化物酶阳性中性粒细胞数目即开始增加（均P=0．000），并于第3天达峰值水平（均P=0．000），至第7天时减少（均P：0．000）；Caspase-3阳性神经元数目于伤后第1天开始逐渐增多（均P=0．000），至第7天达峰值水平（均P=0．000）。与生理盐水组相比，rhEPO组小鼠伤后第1～7天海马区髓过氧化物酶阳性中性粒细胞和Caspase-3阳性神经元数目呈逐渐减少趋势，不同观察时间点差异具有统计学意义（均P=0．000）。与生理盐水组相比，rhEPO组小鼠于Morris水迷宫实验训练第3天逃避潜伏期开始缩短（P=0．013），随着训练时间的延长，组间差异具有统计学意义（P=0．011，0．000）。结论液压打击后给予rhEPO可促进小鼠颅脑创伤后认知功能的恢复。其可能机制与抑制创伤后局部炎症反应、减少神经元凋亡、促进神经功能恢复有关。 展开更多

关键词 脑损伤 红细胞生成素 重组 过氧化物酶类 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 细胞凋亡 认知障碍 疾病模型 动物

在线阅读 下载PDF 职称材料

PI3K抑制剂联合Ad-PTEN对裸鼠移植胶质瘤的治疗作用 被引量：6

15

作者 宋云朋 刘哲 +7 位作者 钟跃 康春生 许鹏 韩磊 张安玲 王广秀 贾志凡 浦佩玉 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期104-107,共4页

目的本研究旨在观察磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002联合含PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)对人脑胶质瘤裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,初步探讨其可能的作用机制。方法将实验动物24只随机分为4组,即胶质瘤模型给予DMSO对照组、空载对照... 目的本研究旨在观察磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002联合含PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)对人脑胶质瘤裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,初步探讨其可能的作用机制。方法将实验动物24只随机分为4组,即胶质瘤模型给予DMSO对照组、空载对照组、LY294002治疗组及LY294002与Ad-PTEN联合治疗组。皮下接种LN229人脑胶质瘤细胞建立胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型,定期测量动物体质量及肿瘤直径;应用免疫组化法检测肿瘤细胞的PTEN、p-Akt、PCNA、CyclinD1、Caspase-3、MMP-2、p-FAK的表达水平。结果联合治疗组对人脑胶质瘤裸鼠移植瘤抑制作用较对照组及LY294002治疗组均明显增强(均P<0.01);与对照组及LY294002治疗组比较联合治疗组Caspase-3、PTEN表达显著升高(均P<0.05),p-Akt、CyclinD1、MMP2、p-FAK的表达均显著下降(均P<0.05)。结论LY294002与Ad-PTEN联合治疗可以提高对裸鼠移植人脑胶质瘤的抑制作用。 展开更多

关键词 胶质瘤 PI3K抑制剂 PTEN

在线阅读 下载PDF 职称材料

U251胶质瘤荷瘤鼠皮下模型的建立及其表皮生长因子受体通路成员异常表达 被引量：3

16

作者 刘晓智 康春生 +3 位作者 张志勇 贾志凡 王广秀 浦佩玉 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2007年第1期71-75,共5页

目的建立稳定可靠的荷瘤鼠皮下U251胶质瘤实验动物模型,使其良好地用于胶质瘤分子机制的研究。方法取生长状态良好的U251胶质瘤细胞悬液按1×106个细胞／50μl接种于10只荷瘤鼠腹腔皮下,待其成瘤后将肿瘤组织块接种于20只实验鼠,观... 目的建立稳定可靠的荷瘤鼠皮下U251胶质瘤实验动物模型,使其良好地用于胶质瘤分子机制的研究。方法取生长状态良好的U251胶质瘤细胞悬液按1×106个细胞／50μl接种于10只荷瘤鼠腹腔皮下,待其成瘤后将肿瘤组织块接种于20只实验鼠,观察并记录肿瘤皮下生长情况,于成瘤后第5周处死荷瘤鼠检测是否存在肿瘤远处转移;同时对肿瘤组织行HE和免疫组织化学染色检测胶质瘤的病理学特征,观察表皮生长因子受体、磷酰肌醇3-激酶和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶-2基因阳性表达率,结果与体外培养的U251胶质瘤细胞系的基因异常表达进行比较。结果细胞悬液接种可成功获得皮下U251胶质瘤模型,但潜伏期延长(2-3周),成功率低(6／10);若将其生成的肿瘤组织块再次接种于荷瘤鼠皮下则可获得高效、稳定的成瘤率(20／20)且潜伏期明显缩短(3d-5d)。荷瘤鼠生长状态良好,无恶病质变化,未发生其他脏器转移。大体标本观察显示,肿瘤体积>750mm3时其内部多见坏死伴囊性变,部分肿瘤尚有脂肪浸润或纤维化;肿瘤有假包膜形成,瘤体部分呈鱼肉状,是胶质瘤生发和再移植取材的部位。免疫组织化学检测显示,荷瘤鼠皮下胶质瘤组织和体外培养的U251胶质瘤细胞对表皮生长因子受体、磷酰肌醇3-激酶以及丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶-2基因通路主要成员的基因表达情况相似。结论将U251胶质瘤细胞悬液接种于荷瘤鼠皮下形成的胶质瘤再移植到荷瘤鼠皮下建立U251移植瘤实验模型的方法简便、潜伏期短、成功率高、稳定性好,可以作为胶质瘤体内实验研究的动物模型。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 受体 表皮生长因子-尿抑胃素 疾病模型 动物 基因表达 免疫组织化学

在线阅读 下载PDF 职称材料

人脑胶质瘤MMP2、MMP9和Ki-67的表达及其相关性的探讨 被引量：4

17

作者 康春生 浦佩玉 +5 位作者 李捷 于士柱 王虎 江荣才 董伦 王广秀 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第14期820-823,共4页

目的:探讨人脑胶质瘤基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和Ki-67的表达及其相关性。方法:应用MMP2、MMP9表达水平代表胶质瘤的侵袭活性,应用Ki-67标记指数代表胶质瘤的增殖活性;用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2例恶性胶质... 目的:探讨人脑胶质瘤基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和Ki-67的表达及其相关性。方法:应用MMP2、MMP9表达水平代表胶质瘤的侵袭活性,应用Ki-67标记指数代表胶质瘤的增殖活性;用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2例恶性胶质瘤体外细胞系的MMP2、MMP9和Ki-67表达,并分析其相关性。结果:在胶质瘤中MMP2、MMP9的阳性表达率和Ki-67LI均随肿瘤恶性程度增加而增加并与胶质瘤分级呈正相关;相关分析发现,MMP2、MMP9和Ki-67LI的表达两两相关。结论:增殖和侵袭在恶性胶质瘤的分子生物学演进过程中相互协同、共同促进肿瘤细胞的恶性进展。 展开更多

关键词 胶质瘤 基质金属蛋白酶Ki-67增殖侵袭

在线阅读 下载PDF 职称材料

创伤性与非创伤性应激对大鼠内皮祖细胞的影响 被引量：2

18

作者 熊建华 焦峻峰 +2 位作者 刘丽 贾叶华 张建宁 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2009年第6期599-604,共6页

目的观察大鼠在创伤性和非创伤性应激状态下外周血内皮祖细胞数目的变化,探讨可能影响其变化的相关因素。方法 36只健康雄性Wistar大鼠,随机接受颅脑创伤、电休克和冷水游泳刺激,分别于应激前(0h)及应激后3h、6h、24h、48h、72h和7d采... 目的观察大鼠在创伤性和非创伤性应激状态下外周血内皮祖细胞数目的变化,探讨可能影响其变化的相关因素。方法 36只健康雄性Wistar大鼠,随机接受颅脑创伤、电休克和冷水游泳刺激,分别于应激前(0h)及应激后3h、6h、24h、48h、72h和7d采集内眦球后静脉丛血,分离单个核细胞,CD34和CD133双荧光标记内皮祖细胞,流式细胞术计数内皮祖细胞数目。结果颅脑创伤组大鼠外周血内皮祖细胞数目于伤后3h即明显减少(P=0.000);随后迅速增加,至6h达峰值水平(P=0.005);至24h降至正常值范围(P=0.728)。而非创伤性应激(电休克和冷水游泳)后3h,大鼠外周血内皮祖细胞数目即开始增加(P=0.000,0.019);至24h达峰值水平(P=0.000,0.004);随后逐渐减少,至72h恢复至正常值范围(P=0.999,0.055)。对照组大鼠各观察时间点外周血内皮祖细胞数目变化,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论应激反应可以促进骨髓内皮祖细胞的动员,创伤性应激后内皮祖细胞数目先减少后增加的特征与非创伤性应激明显不同,其短暂性减少可能与组织损伤修复导致的内皮祖细胞消耗有关。 展开更多

关键词 颅脑损伤 电休克 应激 干细胞 内皮细胞 细胞 培养的 疾病模型 动物

在线阅读 下载PDF 职称材料

靶向AKT1和COX-2的RNAi抑制U251胶质瘤细胞侵袭的体外实验 被引量：2

19

作者 王轩 韩磊 +7 位作者 杨旸 岳晓 张安玲 王广秀 贾志凡 浦佩玉 申长虹 康春生 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期241-245,共5页

目的应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术敲低恶性胶质瘤细胞系U251中AKT1和COX-2表达后,在体外对细胞侵袭转移的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法构建重组腺病毒载体rAd5-A-C同时搭载靶向AKT1和COX-2的shRNA干扰序列,将其... 目的应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术敲低恶性胶质瘤细胞系U251中AKT1和COX-2表达后,在体外对细胞侵袭转移的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法构建重组腺病毒载体rAd5-A-C同时搭载靶向AKT1和COX-2的shRNA干扰序列,将其转染至恶性胶质瘤细胞系U251细胞。Realtime PCR检测RNAi后目的基因mRNA的表达水平,Western Blot检测目的基因及MMP-2、MMP-9、TIMP-2的表达情况。酶联免疫吸附试验检测转染前后分泌到细胞外的MMP-2和MMP-9的浓度变化。划痕实验和Transwell实验评价肿瘤细胞转染前后的细胞侵袭能力的变化。结果rAd5-A-C转染组AKT1和COX-2的mRNA和蛋白表达均明显抑制;MMP-2、MMP-9表达下调,TIMP-2表达则上调。ELISA检测胞外MMP-2、MMP-9浓度明显减低;划痕实验显示细胞转移运动能力明显减弱,Transwell体外侵袭实验结果显示穿过细胞数明显减低(P<0.001)。结论重组腺病毒介导的RNAi技术可以序列特异性地抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达,在体外对U251细胞侵袭转移产生明显抑制作用,可能成为恶性胶质瘤治疗的新策略。 展开更多

关键词 RNA干扰 恶性胶质瘤 侵袭 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响 被引量：1

20

作者 肖兵 叶敏华 +4 位作者 周旋 吴淼经 韩磊 康春生 祝新根 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第15期957-960,共4页

目的:研究VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:使用VHL表达质粒转染胶质瘤细胞,采用RT-PCR检测VHL mRNA表达,Western blot检测VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达,应用Transwell体外侵袭实验、划痕实验检测上调VHL基因后对U251... 目的:研究VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:使用VHL表达质粒转染胶质瘤细胞,采用RT-PCR检测VHL mRNA表达,Western blot检测VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达,应用Transwell体外侵袭实验、划痕实验检测上调VHL基因后对U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响。使用VHL表达质粒处理后的U251细胞建立裸鼠颅内模型,利用免疫组织化学染色法对颅内模型组织切片中VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达进行检测。结果:VHL表达质粒转染胶质瘤细胞后VHLmRNA、VHL蛋白表达增高,MMP-2、MMP-9蛋白表达下降;并抑制U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力。对染色后的组织切片进行分析,VHL表达质粒处理组中VHL的表达较对照组明显升高,MMP-2、MMP-9蛋白较对照组表达减少。结论:VHL基因能够有效抑制U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力,VHL基因可成为治疗胶质瘤的一个有效靶点。 展开更多

关键词 胶质瘤 侵袭 迁移 基质金属蛋白酶

在线阅读 下载PDF 职称材料