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环境内分泌干扰物双酚A对小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖和凋亡的影响 被引量:5
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作者 刘泽兵 王丽 +2 位作者 叶宣光 于秀杰 张友元 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1076-1080,共5页
目的:探讨环境内分泌干扰物双酚A(BPA)对小鼠甲状腺原代培养细胞增殖和凋亡的影响。方法:取雌性BALB/c nu/nu小鼠甲状腺组织,采用胶原酶I/中性蛋白酶联合消化并进行滤泡上皮细胞培养,Westernblotting检测甲状腺球蛋白表达对细胞进行鉴... 目的:探讨环境内分泌干扰物双酚A(BPA)对小鼠甲状腺原代培养细胞增殖和凋亡的影响。方法:取雌性BALB/c nu/nu小鼠甲状腺组织,采用胶原酶I/中性蛋白酶联合消化并进行滤泡上皮细胞培养,Westernblotting检测甲状腺球蛋白表达对细胞进行鉴定。采用不同浓度的BPA干预稳定培养48 h的小鼠甲状腺原代培养的滤泡上皮细胞,作用24 h后,光学显微镜观测干预前后细胞生长状态的变化,流式细胞术分析细胞增殖和凋亡,real-time PCR法和免疫细胞化学染色法测定干预前后肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(TRAIL-R1)mRNA和蛋白的表达变化。结果:原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞随BPA刺激浓度的增加,生长状态呈现先促进后抑制的趋势;0.01~0.1μmol/L BPA作用24 h后,细胞增殖呈剂量依赖性增长,0.1μmol/L BPA可显著刺激细胞增殖(P<0.05),而1μmol/L BPA刺激后则表现为细胞增殖水平显著下降(P<0.05);0.1μmol/L BPA刺激后凋亡指数减低(P<0.05);0.1μmol/L和1μmol/L BPA刺激后TRAIL-R1 mRNA表达均显著下调(均P<0.05),蛋白表达与mRNA表达结果趋势一致。结论:低、中浓度BPA可刺激原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡,而高浓度BPA对细胞主要表现为毒性损害作用。BPA对细胞凋亡的影响可能与TRAIL-R1相关途径有关。 展开更多
关键词 双酚A 细胞增殖 细胞凋亡 甲状腺
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甲状腺乳头状癌组织中E-cadherin、β-catenin和cyclinD1蛋白表达及意义 被引量:8
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作者 刘泽兵 王丽 +2 位作者 叶宣光 于秀杰 张友元 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期146-149,共4页
目的探讨甲状腺乳头状癌组织中E-cadherin、β-catenin和cyclinD1蛋白表达对其发生、发展的影响。方法应用免疫组化EnVision法检测36例甲状腺乳头状癌组织、27例甲状腺腺瘤旁组织E-cadherin、β-catenin和cyclinD1的蛋白表达,同时分析... 目的探讨甲状腺乳头状癌组织中E-cadherin、β-catenin和cyclinD1蛋白表达对其发生、发展的影响。方法应用免疫组化EnVision法检测36例甲状腺乳头状癌组织、27例甲状腺腺瘤旁组织E-cadherin、β-catenin和cyclinD1的蛋白表达,同时分析三者表达水平的变化与其它病理参数的关系。结果 E-cadherin在甲状腺乳头状癌的表达下降,阳性率为30.56%(P<0.05),与肿瘤淋巴结转移相关(P<0.01);β-catenin在癌组织中细胞核/核周区呈强阳性表达,且表达率明显升高为80.56%(P<0.01),其异常表达与肿瘤淋巴结转移相关(P<0.01);cyclinD1在癌组织中的阳性表达率为72.22%(P<0.01),与肿瘤淋巴结转移有关(P<0.05)。此外,E-cadherin的低表达与cyclinD1的过表达呈负相关(P<0.05),β-catenin的异位高表达与cyclinD1的过表达呈正相关(P<0.05)。结论 E-cadherin表达缺失和β-catenin异位高表达可能通过诱导cyclinD1的过表达,进而影响甲状腺乳头状癌的发生和发展。 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 乳头状癌 E-CADHERIN Β-CATENIN CYCLIND1
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Poly(I∶C)加重碘过量诱发的NOD鼠慢性淋巴细胞性甲状腺炎 被引量:4
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作者 刘泽兵 臧晓怡 +2 位作者 李庆欣 于秀杰 李兰英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期549-553,共5页
目的:探讨poly(I∶C)作为病毒类似物对碘过量所致NOD鼠慢性淋巴细胞性甲状腺炎的影响。方法:将32只雌性NOD鼠,随机分为4组,每组8只,分别为:(1)对照组;(2)碘过量组;(3)poly(I∶C)组;(4)碘过量联合poly(I∶C)组。作用9周后处死动物:观测... 目的:探讨poly(I∶C)作为病毒类似物对碘过量所致NOD鼠慢性淋巴细胞性甲状腺炎的影响。方法:将32只雌性NOD鼠,随机分为4组,每组8只,分别为:(1)对照组;(2)碘过量组;(3)poly(I∶C)组;(4)碘过量联合poly(I∶C)组。作用9周后处死动物:观测体重、甲状腺重量及其解剖形态;采用放射免疫分析法检测血清中甲状腺激素(T4)水平;HE染色观察甲状腺组织形态变化,TUNEL技术检测甲状腺组织细胞凋亡情况,定量PCR法检测凋亡相关基因(TRAIL、TRAIL-sR1)和炎症相关基因(ICAM-1、CXCL10)mRNA表达。结果:碘过量组较对照组、Poly(I∶C)组甲状腺绝对重量及相对重量均明显增加(P<0.01);血清总T4水平下降(P<0.05);炎症破坏和细胞凋亡明显加强;上调TRAIL、TRAIL-sR1、ICAM-1、CXCL10mRNA表达(P<0.05)。碘过量联合poly(I∶C)组较单纯碘过量组甲状腺绝对重量及相对重量均进一步增加;血清总T4水平显著下降(P<0.05);炎症进一步加重,破坏程度IV级所占比例升至50.0%;凋亡细胞数量明显增加,进一步上调TRAIL、TRAIL-sR1、ICAM-1、CXCL10mRNA表达(P<0.05)。Poly(I∶C)组各值与对照组趋势一致(P>0.05)。结论:Poly(I∶C)加重碘过量所致慢性淋巴细胞性甲状腺炎发病程度,其作用途径与增加淋巴细胞浸润和甲状腺细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 多聚肌苷酸:多聚胞苷酸 碘过量 慢性淋巴细胞性甲状腺炎
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HLA-I类抗原的组织配型基因芯片的建立及应用 被引量:2
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作者 郭刚 张瑞 +2 位作者 孙蓓 张明新 梁冬春 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1106-1111,共6页
目的:应用基因芯片技术进行北方汉族人群HLA-I类抗原中分辨度分型研究,建立稳定的HLA检测芯片。方法:采用寡核苷酸芯片分型方法,依据第十三届国际组织相容性工作会议报告及相关文献,同时考虑遗传的连锁不平衡,及强脊炎、幼年型糖尿病等... 目的:应用基因芯片技术进行北方汉族人群HLA-I类抗原中分辨度分型研究,建立稳定的HLA检测芯片。方法:采用寡核苷酸芯片分型方法,依据第十三届国际组织相容性工作会议报告及相关文献,同时考虑遗传的连锁不平衡,及强脊炎、幼年型糖尿病等与HLA密切相关的遗传病等因素,选择了中国人群基因频率较高的等位基因,根据HLA-I类不同基因亚型的独特序列,完成了探针的设计与筛选,最后设计了122条探针(HLA-A56条,HLA-B66条)制成基因分型芯片。采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-I类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交。杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型。结果:所有样本的HLA-I类抗原基因分型均获成功。此中分辨度探针可分出598个I类抗原等位基因,可检出I类抗原特异性57个。结论:基因芯片用于HLA-I类抗原分型可行。其分辨率高,特异性强,可用于HLA基因分型、骨髓移植、器官移植的HLA配型、与HLA有密切关系的遗传性疾病的人群筛查。 展开更多
关键词 HLA-Ⅰ类抗原 基因芯片 中分辨度 分型
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人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析
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作者 王宝利 戴芳 +4 位作者 梁晖 张瑞 吴亚锋 郭刚 张镜宇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期30-34,共5页
骨保护素 (OPG)成熟肽N端D1~D4结构域仅由 2个外显子编码 .以人基因组DNA作为模板 ,采用重叠延伸PCR得到N端D1~D4域编码序列 ,并在其上游引入 2×His密码子序列 ,然后克隆入载体pQE 30进行表达 ,SDS PAGE表明 8×His融合蛋白... 骨保护素 (OPG)成熟肽N端D1~D4结构域仅由 2个外显子编码 .以人基因组DNA作为模板 ,采用重叠延伸PCR得到N端D1~D4域编码序列 ,并在其上游引入 2×His密码子序列 ,然后克隆入载体pQE 30进行表达 ,SDS PAGE表明 8×His融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,可被抗OPG抗体识别 .变性条件下通过Ni NTA金属螯合亲和层析对表达产物进行纯化后再经梯度透析进行复性 ,采用破骨细胞样细胞 (osteoclast likecell ,OLC)诱导分化实验来检测重组蛋白的生物活性 ,证实单核 巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)和破骨细胞分化因子 (ODF)可协同促进多核OLC的生成 ,但加入重组OPG片段后 ,OLC生成显著减少 . 展开更多
关键词 重叠延伸法 骨保护素 表达 活性分析
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