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禽戊型肝炎病毒CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的生物信息学分析、原核表达及多克隆抗体制备
1
作者
张玉倩
吕志航
+2 位作者
刘春红
廉春杨
张雪莲
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024年第6期231-238,共8页
旨在分析禽戊型肝炎病毒(aHEV)CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的结构和生物学功能等,并利用大肠杆菌原核表达系统表达ORF2重组蛋白及制备抗ORF2蛋白多克隆抗体,验证重组蛋白的免疫原性和反应原性等。利用生物信息学软件对CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋...
旨在分析禽戊型肝炎病毒(aHEV)CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的结构和生物学功能等,并利用大肠杆菌原核表达系统表达ORF2重组蛋白及制备抗ORF2蛋白多克隆抗体,验证重组蛋白的免疫原性和反应原性等。利用生物信息学软件对CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的理化性质、结构和功能等方面进行分析;通过酶切、连接pET-32a(+)载体与CaHEV GDSZ01株的ORF2基因,构建pET-32a-ORF2-His和pET-32a-ORF2原核表达质粒,并转化至DE3感受态细胞中进行诱导表达,分析其表达形式;ORF2重组蛋白经切胶纯化,利用Western Blot试验验证其反应原性后,免疫新西兰大白兔以获得兔抗ORF2蛋白多克隆抗体,并通过Western Blot方法对多抗进行鉴定分析、利用间接ELISA方法进行抗体效价检测。生物信息学分析结果显示,CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白为亲水性的、不稳定的蛋白,且其存在信号肽的概率高达93.59%,其二级结构主要以无规则卷曲为主,具备结合抗体的结构条件,其保护性抗原整体预测评分则表明ORF2蛋白具备良好的免疫原性。试验成功构建了ORF2重组原核表达质粒,并成功诱导表达了目的蛋白,经SDS-PAGE试验和Western Blot试验显示,诱导表达的蛋白主要为非可溶性蛋白,并具有良好的反应原性;而制备的兔源抗aHEV ORF2蛋白多克隆抗体的效价为1∶102400,且能特异性识别免疫原ORF2蛋白、非免疫原ORF2-His蛋白和截短的sORF2蛋白。以上结果初步分析了ORF2蛋白的理化性质和部分生物学功能,成功表达了aHEV ORF2蛋白,制备了抗ORF2蛋白的兔源多克隆抗体。
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关键词
禽戊型肝炎病毒
ORF2蛋白
生物信息学
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
禽戊型肝炎病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
2
作者
张玉倩
刘春红
+2 位作者
吕志航
廉春杨
张雪莲
《华北农学报》
北大核心
2025年第4期225-231,共7页
为了针对禽戊型肝炎病毒(aHEV)建立一种快速、准确的抗体检测方法,以大肠杆菌原核表达系统表达的CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白作为包被抗原,对相关反应条件进行优化后确定其最佳工作条件,以建立检测aHEV鸡血清抗体的间接ELISA方法,并对该...
为了针对禽戊型肝炎病毒(aHEV)建立一种快速、准确的抗体检测方法,以大肠杆菌原核表达系统表达的CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白作为包被抗原,对相关反应条件进行优化后确定其最佳工作条件,以建立检测aHEV鸡血清抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验,与Western Blot方法进行对比后,初步应用于检测鸡临床血清样本。结果显示,ORF2蛋白被成功表达、纯化,并经Western Blot试验证实,可与aHEV阳性鸡血清发生特异性反应,建立的ELISA的最佳反应条件为:ORF2蛋白以200 ng/孔4℃包被过夜(12 h),5%脱脂乳37℃封闭1~2 h,血清1∶1600稀释、室温孵育1 h,兔抗鸡IgY-HRP 1∶5000稀释、37℃孵育90 min,TMB底物37℃显色20 min后终止。该ELISA方法可检出稀释51200倍后的aHEV阳性血清,且不与NDV、AIV-H5、AIV-H9、ALV、REV和MDV等其他鸡源性病毒的阳性血清发生交叉反应;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,与Western Blot方法的总体符合率达95.12%。通过该方法检测广东不同地区养鸡场的临床血清样本,总阳性率达66.34%。成功建立了一种操作简便、有效,且特异性、灵敏性和重复性均良好的aHEV血清学检测方法,可为基层监测、防控aHEV的感染提供一定的技术支持。
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关键词
禽戊型肝炎病毒
ORF2蛋白
间接ELISA
血清学检测
流行病学调查
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职称材料
实时荧光PCR检测棘球绦虫方法的建立及应用
被引量：
4
3
作者
赵福振
都勇
+5 位作者
蒋晓霞
李玉全
周傲白雪
李寒雪
谌升友
罗宝正
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期29-34,共6页
目的为了高效检测棘球绦虫(Echinococcus)。方法针对棘球绦虫的线粒体基因高度同源区域设计特异性引物和探针,建立了一种检测棘球绦虫的荧光PCR检测方法。在优化反应条件并测试灵敏度和特异性之后进行样本检测。结果该方法有较高的灵敏...
目的为了高效检测棘球绦虫(Echinococcus)。方法针对棘球绦虫的线粒体基因高度同源区域设计特异性引物和探针,建立了一种检测棘球绦虫的荧光PCR检测方法。在优化反应条件并测试灵敏度和特异性之后进行样本检测。结果该方法有较高的灵敏度,检测质粒浓度极限为10 copies/μL;特异性好,未见非特异性扩增;应用该方法对84份犬粪样本进行检测,发现41份样本为阳性。结论本研究所建立的荧光PCR方法可快速、准确地检测棘球绦虫,为棘球蚴病的早期诊断和预防提供了技术支撑。
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关键词
棘球蚴病
棘球绦虫
核酸检测
犬粪
病变组织
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职称材料
题名
禽戊型肝炎病毒CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的生物信息学分析、原核表达及多克隆抗体制备
1
作者
张玉倩
吕志航
刘春红
廉春杨
张雪莲
机构
佛山大学动物科技学院
天之
泰
生物技术
研究院
(
珠海
)
有限公司
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024年第6期231-238,共8页
基金
广东省基础与应用基础研究基金项目(2024A1515012840,2022A1515012194)
广东省教育厅普通高校重点领域专项(乡村振兴)(2020ZDZX1004)。
文摘
旨在分析禽戊型肝炎病毒(aHEV)CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的结构和生物学功能等,并利用大肠杆菌原核表达系统表达ORF2重组蛋白及制备抗ORF2蛋白多克隆抗体,验证重组蛋白的免疫原性和反应原性等。利用生物信息学软件对CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的理化性质、结构和功能等方面进行分析;通过酶切、连接pET-32a(+)载体与CaHEV GDSZ01株的ORF2基因,构建pET-32a-ORF2-His和pET-32a-ORF2原核表达质粒,并转化至DE3感受态细胞中进行诱导表达,分析其表达形式;ORF2重组蛋白经切胶纯化,利用Western Blot试验验证其反应原性后,免疫新西兰大白兔以获得兔抗ORF2蛋白多克隆抗体,并通过Western Blot方法对多抗进行鉴定分析、利用间接ELISA方法进行抗体效价检测。生物信息学分析结果显示,CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白为亲水性的、不稳定的蛋白,且其存在信号肽的概率高达93.59%,其二级结构主要以无规则卷曲为主,具备结合抗体的结构条件,其保护性抗原整体预测评分则表明ORF2蛋白具备良好的免疫原性。试验成功构建了ORF2重组原核表达质粒,并成功诱导表达了目的蛋白,经SDS-PAGE试验和Western Blot试验显示,诱导表达的蛋白主要为非可溶性蛋白,并具有良好的反应原性;而制备的兔源抗aHEV ORF2蛋白多克隆抗体的效价为1∶102400,且能特异性识别免疫原ORF2蛋白、非免疫原ORF2-His蛋白和截短的sORF2蛋白。以上结果初步分析了ORF2蛋白的理化性质和部分生物学功能,成功表达了aHEV ORF2蛋白,制备了抗ORF2蛋白的兔源多克隆抗体。
关键词
禽戊型肝炎病毒
ORF2蛋白
生物信息学
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Avian hepatitis E virus
ORF2 protein
Bioinformatics
Prokaryotic expression
Polyclonal antibody
分类号
S858.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
禽戊型肝炎病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
2
作者
张玉倩
刘春红
吕志航
廉春杨
张雪莲
机构
佛山大学动物科技学院
天之
泰
生物技术
研究院
(
珠海
)
有限公司
出处
《华北农学报》
北大核心
2025年第4期225-231,共7页
基金
广东省基础与应用基础研究基金项目(2024A1515012840,2022A1515012194)。
文摘
为了针对禽戊型肝炎病毒(aHEV)建立一种快速、准确的抗体检测方法,以大肠杆菌原核表达系统表达的CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白作为包被抗原,对相关反应条件进行优化后确定其最佳工作条件,以建立检测aHEV鸡血清抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验,与Western Blot方法进行对比后,初步应用于检测鸡临床血清样本。结果显示,ORF2蛋白被成功表达、纯化,并经Western Blot试验证实,可与aHEV阳性鸡血清发生特异性反应,建立的ELISA的最佳反应条件为:ORF2蛋白以200 ng/孔4℃包被过夜(12 h),5%脱脂乳37℃封闭1~2 h,血清1∶1600稀释、室温孵育1 h,兔抗鸡IgY-HRP 1∶5000稀释、37℃孵育90 min,TMB底物37℃显色20 min后终止。该ELISA方法可检出稀释51200倍后的aHEV阳性血清,且不与NDV、AIV-H5、AIV-H9、ALV、REV和MDV等其他鸡源性病毒的阳性血清发生交叉反应;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,与Western Blot方法的总体符合率达95.12%。通过该方法检测广东不同地区养鸡场的临床血清样本,总阳性率达66.34%。成功建立了一种操作简便、有效,且特异性、灵敏性和重复性均良好的aHEV血清学检测方法,可为基层监测、防控aHEV的感染提供一定的技术支持。
关键词
禽戊型肝炎病毒
ORF2蛋白
间接ELISA
血清学检测
流行病学调查
Keywords
Avian hepatitis E virus
ORF2 protein
Indirect ELISA
Serologic detection
Epidemiologic survey
分类号
S858.31 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
实时荧光PCR检测棘球绦虫方法的建立及应用
被引量：
4
3
作者
赵福振
都勇
蒋晓霞
李玉全
周傲白雪
李寒雪
谌升友
罗宝正
机构
拱北海关
技术
中心
天之
泰
生物技术
研究院
(
珠海
)
有限公司
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期29-34,共6页
基金
珠海进出口公共技术服务平台产学研协同创新计划资金(No.IETP202001001)。
文摘
目的为了高效检测棘球绦虫(Echinococcus)。方法针对棘球绦虫的线粒体基因高度同源区域设计特异性引物和探针,建立了一种检测棘球绦虫的荧光PCR检测方法。在优化反应条件并测试灵敏度和特异性之后进行样本检测。结果该方法有较高的灵敏度,检测质粒浓度极限为10 copies/μL;特异性好,未见非特异性扩增;应用该方法对84份犬粪样本进行检测,发现41份样本为阳性。结论本研究所建立的荧光PCR方法可快速、准确地检测棘球绦虫,为棘球蚴病的早期诊断和预防提供了技术支撑。
关键词
棘球蚴病
棘球绦虫
核酸检测
犬粪
病变组织
Keywords
Echinococcosis
Echinococcus
nucleic acid detection
dog feces
pathological tissues
分类号
R383.33 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
禽戊型肝炎病毒CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的生物信息学分析、原核表达及多克隆抗体制备
张玉倩
吕志航
刘春红
廉春杨
张雪莲
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
禽戊型肝炎病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
张玉倩
刘春红
吕志航
廉春杨
张雪莲
《华北农学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
实时荧光PCR检测棘球绦虫方法的建立及应用
赵福振
都勇
蒋晓霞
李玉全
周傲白雪
李寒雪
谌升友
罗宝正
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
4
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职称材料
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