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气升式环流中空纤维膜生物反应器内骨髓间充质干细胞的培养与扩增 被引量：5
1
作者 李香琴 刘天庆 +3 位作者 朱琳 宋克东 马学虎 崔占峰 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期985-991,共7页
骨髓间充质干细胞(MSCs)具有多向分化的潜能,是重要的组织工程"种子细胞"和理想的基因治疗靶细胞,但在骨髓中的含量非常少,需体外扩增才能满足临床需求。今将第四代MSCs与Ⅰ型胶原溶液混合后接种于中空纤维膜(HFMs)内,置37℃... 骨髓间充质干细胞(MSCs)具有多向分化的潜能,是重要的组织工程"种子细胞"和理想的基因治疗靶细胞,但在骨髓中的含量非常少,需体外扩增才能满足临床需求。今将第四代MSCs与Ⅰ型胶原溶液混合后接种于中空纤维膜(HFMs)内,置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱内1h后形成凝胶,然后将此HFMs接种至气升式环流生物反应器(ALB)内,进行MSCs的三维动态培养与扩增。实验过程中每24h取样测吸光度、计细胞数、绘制细胞生长曲线,测定细胞代谢参数,并对扩增的细胞进行流式细胞仪分析及多向诱导分化检测。结果表明:在气升式环流中空纤维膜生物反应器(ALHFMB)内,O2含量基本保持恒定;细胞代谢旺盛,MSCs扩增倍数明显增加,7d后扩增近16倍;扩增的细胞仍保持MSCs表型并具有较强的成骨、成软骨及成脂肪的多向分化能力。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞(MSCs) 中空纤维膜(HFMs) 气升式环流生物反应器(ALB)凝胶 扩增
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骨髓间充质干细胞对海藻酸钙胶珠内神经干细胞增殖与分化的作用 被引量：1
2
作者 李香琴 刘天庆 +2 位作者 宋克东 葛丹 马学虎 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第2期228-235,共8页
神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植治疗神经损伤被认为是具有潜在应用价值的手段,但其来源困难;骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)以其所具有的诸多优点,为神经损伤的治疗提供了一个新的思路。而BMSCs... 神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植治疗神经损伤被认为是具有潜在应用价值的手段,但其来源困难;骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)以其所具有的诸多优点,为神经损伤的治疗提供了一个新的思路。而BMSCs是否是通过作用于内源性的NSCs来促进神经修复,仍存在着争议。今采用海藻酸钙胶珠将NSCs包囊培养至一定大小的神经球后,再与BMSCs进行共培养,考察BMSCs对生长在海藻酸钙胶珠内的NSCs增殖与分化的作用,探讨BMSCs移植治疗神经疾病与损伤的作用机理。共培养过程中观察神经球结构的变化;共培养结束后计算NSCs的增殖倍数,对增殖条件下共培养的NSCs表型和多向分化潜能进行免疫荧光染色鉴定;对分化条件下共培养的NSCs向不同神经细胞分化的能力进行流式细胞仪检测。结果表明,BMSCs可使生长于支架内的NSCs迁出细胞球,对NSCs的增殖没有明显影响;但能够明显影响NSCs的分化,使其向少突胶质细胞分化的能力增加3倍,向星形胶质细胞分化的能力减弱1倍,而向神经元细胞分化的能力没有明显变化。BMSCs有可能是通过分泌某些因子增加了NSCs迁移及向少突胶质细胞分化的能力,从而促进神经损伤的修复。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 神经干细胞 海藻酸钙胶珠 增殖 分化 共培养
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PVDF-g-PNIPAAm温敏膜用于Hela细胞黏附生长与脱附 被引量：2
3
作者 李香琴 刘天庆 刘小红 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第1期112-120,共9页
传统的酶解法用于细胞收获容易导致细胞膜蛋白损伤,致使细胞功能缺失,而具有温敏特性的材料表面用于细胞培养时,可采用降温脱附法收获细胞,从而有效维护细胞的功能。研究将Hela细胞分别接种于常规空白培养板、PVDF膜以及四种不同PVDF-g-... 传统的酶解法用于细胞收获容易导致细胞膜蛋白损伤,致使细胞功能缺失,而具有温敏特性的材料表面用于细胞培养时,可采用降温脱附法收获细胞,从而有效维护细胞的功能。研究将Hela细胞分别接种于常规空白培养板、PVDF膜以及四种不同PVDF-g-PNIPAAm温敏膜上,考察Hela细胞的黏附生长与降温脱附行为。培养过程中,观察细胞生长形态,检测细胞生长活率;收获时,观察细胞在从不同基底表面降温脱附行为,并对降温脱附法和胰酶消化法收获的细胞分别进行死活染色,计算细胞活率。结果表明,Hela细胞在不同基底表面均能正常黏附、铺展与生长;在四种不同PVDF-g-PNIPAAm温敏膜(M21,M32,M11,M23)上,M32与M11较更适宜细胞黏附与生长;当温度降低时Hela细胞不能从常规空白培养板及PVDF膜上自动脱附,但均能从四种温敏膜上自动脱附,脱附速率为M11>M32>M21>M23;降温脱附法比胰酶消化法收获的细胞活率更高,分别为(95±3.47)%与(81±2.26)%。PVDF-g-PNIPAAm温敏膜用于Hela细胞培养与收获的研究,为下一步采用温敏性PVDF-g-PNIPAAm中空纤维膜生物反应器大规模扩增并无损伤收获细胞奠定了基础。 展开更多
关键词 聚N-异丙基丙烯酰胺 聚偏氟乙烯 温敏表面 细胞培养 降温脱附
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海藻酸钙胶珠传质模型的研究 被引量：6
4
作者 姚立松 刘天庆 +3 位作者 李香琴 葛丹 崔占峰 马学虎 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期345-350,共6页
近些年来,海藻酸钙微胶珠在生物工程领域得到了越来越广泛的应用。为了采用海藻酸钙胶珠培养动物细胞,并给细胞提供最佳的生长环境,需要确定海藻酸钙胶珠内部的扩散系数(D)及适宜直径。今以海藻酸钙胶珠为研究对象,建立了胶珠内部的扩... 近些年来,海藻酸钙微胶珠在生物工程领域得到了越来越广泛的应用。为了采用海藻酸钙胶珠培养动物细胞,并给细胞提供最佳的生长环境,需要确定海藻酸钙胶珠内部的扩散系数(D)及适宜直径。今以海藻酸钙胶珠为研究对象,建立了胶珠内部的扩散传质模型,并研究胶珠尺寸或其内部孔隙结构对其扩散系数的影响。通过制作不同直径的胶珠进行葡萄糖的扩散实验,得到各种直径条件下胶珠内部的扩散数据,再通过传质模型,并结合相应的扩散数据进行计算,从而得出不同直径胶珠的内部扩散系数。实验及关联结果表明:随着所制备的胶珠直径的增加,形成海藻酸钙凝胶时钙离子置换钠离子的传质阻力在增加,因此胶珠内部钙离子含量减少,致使胶珠内部的孔道直径增大,从而使其内部扩散系数增加。在选择高扩散系数的前提下,结合动物细胞培养的要求,我们认为适用于动物细胞培养的海藻酸钙胶珠的适宜直径为2mm左右。 展开更多
关键词 海藻酸钙 胶珠 扩散系数 传质 数学模型
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壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素复合支架的制备及性能评价 被引量：4
5
作者 林小敏 关水 +3 位作者 葛丹 刘天庆 马学虎 崔占峰 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期265-271,共7页
采用冷冻干燥法制备一种新型三维壳聚精-明胶一透明质酸-硫酸肝素（chitosan·gelatin-hyaluronate—heparansulfate，C．G．Ha．HS）复合支架，分别测定支架的孔径、孔隙率、吸水率和降解率等物理性质，同时以壳聚糖一明胶（chito... 采用冷冻干燥法制备一种新型三维壳聚精-明胶一透明质酸-硫酸肝素（chitosan·gelatin-hyaluronate—heparansulfate，C．G．Ha．HS）复合支架，分别测定支架的孔径、孔隙率、吸水率和降解率等物理性质，同时以壳聚糖一明胶（chitosan．gelatin，C．G）支架作为对照组，考察了神经干／祖细胞（neuralstem／progenitorcells，NS／PCs）在该支架上的粘附率、生长状态以及细胞生存力等生物相容性指标。扫描电镜观察及CCK-8分析表明，C-G-Ha—HS支架孔径主要分布于90．130um，孔隙率明显增大，吸水率大于95％且能够体外降解；c．G．Ha．HS支架明显改善了NS／PCs的粘附性及生存力，细胞在支架内相互交织成网状，C．G．Ha．HS支架（5：5）上的细胞粘附率提高至对照的（2008±8．0）％，培养6天以后，细胞的存活率增加至对照的（357．7±8．9）％。这些结果初步显示。C-G—Ha—HS支架可以用于构建体外NS／PCs的三维培养，为进一步应用于神经组织工程和药物筛选提供了实验依据。 展开更多
关键词 壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素 支架 神经干/祖细胞 细胞粘附率 增殖
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可降解导电PEDOT/PLLA复合材料的制备及其性能的研究 被引量：2
6
作者 王树萍 关水 +3 位作者 徐超 张晓庆 刘天庆 马学虎 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期592-599,共8页
采用化学聚合方法制备透明质酸(HA)掺杂的聚3,4-乙撑二氧噻吩(PEDOT)导电材料,通过正交实验优化反应条件(掺杂剂、氧化剂、反应时间)提高其电导率,将其与聚左乳酸(PLLA)结合,制得一种导电性良好且可生物降解的PEDOT/PLLA复合材料,考察了... 采用化学聚合方法制备透明质酸(HA)掺杂的聚3,4-乙撑二氧噻吩(PEDOT)导电材料,通过正交实验优化反应条件(掺杂剂、氧化剂、反应时间)提高其电导率,将其与聚左乳酸(PLLA)结合,制得一种导电性良好且可生物降解的PEDOT/PLLA复合材料,考察了PC12细胞在PEDOT/PLLA膜上的粘附生长等生物相容性指标。四探针电导率仪检测表明,当HA为0.05 g,过硫酸铵(APS)为0.015 mol,反应时间为24 h,制备的PEDOT电导率可达0.36 S?cm-1;通过傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、能谱(EDS)分析掺杂所得PEDOT纳米材料成分,以及扫描电镜(SEM)观察PEDOT颗粒和PEDOT/PLLA复合薄膜的表面形态,表明HA已成功掺杂到PEDOT,且制得的PEDOT/PLLA复合薄膜中PEDOT分散性较好;荧光显微镜、金相显微镜观察及CCK-8分析表明,PEDOT颗粒有利于PC12细胞的粘附及突触伸长,且在包被层粘连蛋白(LN)的PEDOT/PLLA膜(质量浓度为30%(wt))培养72 h后,细胞存活率增加至对照的(116.6±3.2)%。以上结果初步表明,PEDOT/PLLA膜具有较好的生物相容性,且利于PC12细胞突触的伸长,这为进一步神经组织工程导电生物支架的研究制备提供了实验支持。 展开更多
关键词 PEDOT PLLA复合膜 导电性 可降解性 PC12细胞 生物相容性
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C-G-Ha-HS支架改性协同原儿茶酸对NS/PCs粘附及定向分化的影响 被引量：1
7
作者 张晓庆 关水 +3 位作者 葛丹 王树萍 刘天庆 马学虎 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1051-1058,共8页
通过层粘连蛋白（LN）对壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素（C-G-Ha-HS）复合支架进行修饰,提高支架粘附率,优化神经干/祖细胞（NS/PCs）三维培养体系,同时考察了原儿茶酸（PCA）对三维条件下NS/PCs分化为多巴胺（DA）能神经元的影响。扫... 通过层粘连蛋白（LN）对壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素（C-G-Ha-HS）复合支架进行修饰,提高支架粘附率,优化神经干/祖细胞（NS/PCs）三维培养体系,同时考察了原儿茶酸（PCA）对三维条件下NS/PCs分化为多巴胺（DA）能神经元的影响。扫描电镜观察及CCK-8分析表明,C-G-Ha-HS复合支架孔径为90~130μm,孔隙内的NS/PCs伸出类似神经样的突触使支架与细胞相互连接形成网状结构;培养4 h后,LN修饰的C-G-Ha-HS（5：5）支架细胞粘附率增加至未修饰组的（113.53±4.32）%;培养96 h后,细胞活率增加至未修饰组的（120.30±6.65）%;免疫细胞化学鉴定表明,1%胎牛血清（FBS）和0.06 mmol·L-1 PCA协同作用,明显提高了NS/PCs向DA能神经元分化率,TH阳性细胞分化率达到（16.53±0.65）%,增加至空支架组的（172.72±6.79）%;Nurr1阳性细胞分化率达到（15.93±0.91）%,增加至空支架组的（181.23±1.04）%;研究结果为PCA应用于NS/PCs移植治疗PD提供了实验依据。 展开更多
关键词 壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素支架 层粘连蛋白 神经干/祖细胞 原儿茶酸 分化
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Cs/Gel/HA/MWCNTs支架的制备及其生物相容性评价 被引量：1
8
作者 朱智博 关水 +3 位作者 王树萍 王先犇 刘天庆 马学虎 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1143-1149,共7页
引入多壁碳纳米管(multi-walled carbon nanotubes,MWCNTs)对壳聚糖/明胶/透明质酸(chitosan/gelatin/hyaluronic acid,Cs/Gel/HA)复合支架性能进行优化。采用冷冻干燥法制备出MWCNTs含量为2%、6%以及10%的Cs/Gel/HA/MWCNTs导电支架,对... 引入多壁碳纳米管(multi-walled carbon nanotubes,MWCNTs)对壳聚糖/明胶/透明质酸(chitosan/gelatin/hyaluronic acid,Cs/Gel/HA)复合支架性能进行优化。采用冷冻干燥法制备出MWCNTs含量为2%、6%以及10%的Cs/Gel/HA/MWCNTs导电支架,对支架的理化性能及生物相容性进行评价。导电支架孔径为90~130μm,孔隙率为83%~96%;扫描电镜(SEM)及接触角测量结果显示,MWCNTs增加了孔壁粗糙度,提高了支架疏水性;支架电导率随MWCNTs含量的增加而增大,最大可增加至对照组的133.82%;MWCNTs含量为6%的支架细胞活力可增加至对照组的111.07%,且具有更高的细胞粘附率。研究初步表明,制备的Cs/Gel/HA/MWCNTs导电支架具有更好的生物相容性,可进一步应用于神经组织工程研究。 展开更多
关键词 多壁碳纳米管 PC12细胞 导电支架 生物相容性
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