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刺参肠道及养殖池塘菌群组成的PCR-DGGE指纹图谱分析 被引量：27
1
作者 王轶南 朱世伟 常亚青 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期119-122,共4页
采用基于16S rDNA的PCR-DGGE指纹图谱技术对黄海北部刺参养殖池塘(底泥、海水)及刺参肠道的菌群组成进行了初步分析。结果显示,从刺参肠道、底泥及海水样品分别获得41、31及41条扩增条带,其中优势条带分别为12、9及10条;三者具20条共有... 采用基于16S rDNA的PCR-DGGE指纹图谱技术对黄海北部刺参养殖池塘(底泥、海水)及刺参肠道的菌群组成进行了初步分析。结果显示,从刺参肠道、底泥及海水样品分别获得41、31及41条扩增条带,其中优势条带分别为12、9及10条;三者具20条共有条带,其中4条为各样品的优势条带,共有条带在各样品中的丰度不同;三者分别具5、2及13条特异条带,其中肠道中的第34、42条带以及海水中的第25、46条带丰度均较高;肠道与底泥的菌群组成相似性系数(戴斯系数)为77.8%,二者与海水菌群组成的相似性系数分别为65.9%和55.6%。 展开更多
关键词 刺参Apostichopus JAPONICUS 肠道 养殖池塘 菌群 PCR-DGGE指纹图谱
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几种中草药对海水养殖中常见病原菌的抗菌作用 被引量：18
2
作者 李华 李强 付雷 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期6-11,共6页
采用水煎煮法、微波乙醇提取法和微波水提取法对补骨脂、肉桂、黄连、五倍子、石榴皮、大黄、黄芩、苦参、乌梅、白头翁10种中草药进行提取,并用其提取液对海水养殖中7种常见致病菌(灿烂弧菌Vibriosplendidus、黄海希瓦氏菌Shewanella m... 采用水煎煮法、微波乙醇提取法和微波水提取法对补骨脂、肉桂、黄连、五倍子、石榴皮、大黄、黄芩、苦参、乌梅、白头翁10种中草药进行提取,并用其提取液对海水养殖中7种常见致病菌(灿烂弧菌Vibriosplendidus、黄海希瓦氏菌Shewanella marisflavi、哈维氏弧菌Vibrio harveryi、副溶血弧菌Vibrio parahaemolytic-us、迟钝爱德华氏菌Edwardsiellosis tarda、海豚链球菌Streptococcus iniae、杀鲑气单胞菌Aeromonas salmonici-da)的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)进行了测定,同时进行联合药敏试验,研究了几种中草药对海水养殖中常见病原菌的抗菌作用。结果表明:五倍子和石榴皮的抑菌杀菌效果最好,五倍子的MIC分别为0.78～1.56 mg/mL(水煎煮法、微波水提取法)、0.39～1.56 mg/mL(微波乙醇提取法),石榴皮的MIC分别为1.56～3.13 mg/mL(水煎煮法)、0.78～1.56 mg/mL(微波乙醇提取法)、0.78～3.13mg/mL(微波水提取法);五倍子的MBC分别为3.13～6.25 mg/mL(水煎煮法)、1.56～3.13 mg/mL(微波乙醇提取法、微波水提取法),石榴皮的MBC分别为6.25～25 mg/mL(水煎煮法)、3.13～6.25 mg/mL(微波乙醇提取法、微波水提取法)。其次是黄连、黄芩和乌梅,而大黄、补骨脂、肉桂、苦参、白头翁的抑菌、杀菌效果一般或者较弱。用3种方法提取的中草药对7种病原菌的抗菌作用依次为:微波乙醇提取法提取液≥微波水提取法提取液≥水煎煮法提取液。联合药敏试验结果表明,复方五倍子与乌梅、五倍子与甘草对灿烂弧菌,黄芩与甘草对迟钝爱德华氏菌,石榴皮与乌梅对海豚链球菌,五倍子与石榴皮、五倍子与黄芩对黄海希瓦氏菌的抑制分别有协同作用,该结果可为水产养殖临床用药提供参考资料。 展开更多
关键词 中草药 抑菌 杀菌 联合药敏
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鲶爱德华氏菌间接酶联免疫快速检测法的建立 被引量：10
3
作者 李重实 李强 +2 位作者 刘海燕 叶仕根 李华 《广东海洋大学学报》 CAS 2010年第4期17-21,共5页
用鲶爱德华氏菌兔抗血清作为一抗,碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗兔IgG作为酶标二抗,建立黄颡鱼"红头病"病原菌—鲶爱德华氏菌的间接酶联免疫(ELISA)快速检测法,并优化检测条件。抗原最佳包被浓度为107/mL,一抗工作的最佳稀释度为1... 用鲶爱德华氏菌兔抗血清作为一抗,碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗兔IgG作为酶标二抗,建立黄颡鱼"红头病"病原菌—鲶爱德华氏菌的间接酶联免疫(ELISA)快速检测法,并优化检测条件。抗原最佳包被浓度为107/mL,一抗工作的最佳稀释度为1∶211,病原菌的检测灵敏度为105/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,与迟钝爱德华氏菌、弧菌等13种标准菌株无交叉。应用上述技术对人工感染发病鱼中分离的优势菌进行检测,结果表明阳性检出率为80%;对自然发病黄颡鱼体内分离获得的20株优势菌检测结果表明,12株菌为鲶爱德华氏菌。 展开更多
关键词 鲶爱德华氏菌 酶联免疫吸附实验(ELISA) 黄颡鱼 “红头病” 多克隆抗体
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抗鲶爱德华氏菌多克隆抗体的制备及特性分析 被引量：5
4
作者 李华 李重实 +2 位作者 李明 李强 叶仕根 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期29-32,共4页
利用2株黄颡鱼"红头病"病原菌——鲶爱德华氏菌的灭活疫苗作为免疫原,免疫新西兰大白兔,制备了高效价的多克隆抗体。通过间接酶联免疫、间接免疫荧光和免疫印迹等技术对多克隆抗体特性进行了分析。测定获得多抗效价分别为1∶... 利用2株黄颡鱼"红头病"病原菌——鲶爱德华氏菌的灭活疫苗作为免疫原,免疫新西兰大白兔,制备了高效价的多克隆抗体。通过间接酶联免疫、间接免疫荧光和免疫印迹等技术对多克隆抗体特性进行了分析。测定获得多抗效价分别为1∶215和1∶214,2株病原菌之间存在很强的交叉反应,且2种多抗均与鲶爱德华氏菌、迟钝爱德华氏菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、火神弧菌、河流弧菌、创伤弧菌标准菌株存在交叉反应,与粪肠球菌、大肠杆菌、酿脓链球菌、海豚链球菌、杀鲑气单胞菌、嗜水气单胞菌、类产碱假单胞菌标准菌株均无交叉反应。免疫印迹实验结果表明,2株病原菌的主要抗原决定簇相同,分子量分别为61.1,46.6,41.3,28.8和19 kDa。本实验得到了黄颡鱼"红头病"致病菌高效价的多克隆抗体,可以作为初步筛选"红头病"病原菌的工具,为建立快速有效的疾病监测方法和进一步的免疫学防病研究提供了依据,奠定了基础。 展开更多
关键词 黄颡鱼 红头病 鲶爱德华氏菌 多克隆抗体
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黄海希瓦氏菌单抗介导间接ELISA快速检测技术的建立 被引量：9
5
作者 景宏丽 李强 +1 位作者 吴秋仙 李华 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期547-550,共4页
应用农业部海洋水产增养殖学重点实验室制备的特异性抗黄海希瓦氏菌Shewanella smarisflavi AP629单克隆抗体3D9作为一抗,以碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗鼠Ig作为酶标二抗,建立了仿刺参Apostichopusjaponicus"化皮病"病原菌——... 应用农业部海洋水产增养殖学重点实验室制备的特异性抗黄海希瓦氏菌Shewanella smarisflavi AP629单克隆抗体3D9作为一抗,以碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗鼠Ig作为酶标二抗,建立了仿刺参Apostichopusjaponicus"化皮病"病原菌——黄海希瓦氏菌AP629的间接ELISA快速检测方法,并进行了条件优化。结果表明:抗原的最佳包被浓度为107个/mL,一抗工作的最佳稀释度为1∶32,病原菌的检测灵敏度为5×105个/mL。该方法特异性强,与希瓦氏菌属其它种类、弧菌和气单胞菌等均无交叉反应。该方法的建立有助于快速准确地诊断由黄海希瓦氏菌AP629引起的仿刺参疾病。 展开更多
关键词 仿刺参 黄海希瓦氏菌 单克隆抗体 间接ELISA
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皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肠道潜在益生菌的筛选及对幼鲍生长的影响 被引量：6
6
作者 姜海峰 刘小林 +3 位作者 常亚青 冷晓飞 李丹 王高学 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期482-487,共6页
采用体外实验筛选益生菌结合16SrDNA序列分析法,从124株不具有溶血作用的皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肠道细菌中筛选得到5株潜在益生菌并进行了分子鉴定,进一步对5株潜在益生菌进行了安全性实验及体内饲喂实验。结果表明,2株具有... 采用体外实验筛选益生菌结合16SrDNA序列分析法,从124株不具有溶血作用的皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肠道细菌中筛选得到5株潜在益生菌并进行了分子鉴定,进一步对5株潜在益生菌进行了安全性实验及体内饲喂实验。结果表明,2株具有拮抗哈维弧菌和灿烂弧菌能力的潜在益生菌分别被鉴定为Shewanella sp.(WA64)和Shewanella sp.(WA65),一株产海藻酸酶和淀粉酶的潜在益生菌被鉴定为Vibrio sp.(WA51),产蛋白酶潜在益生菌被鉴定为Bacillus sp.(FA12),产琼脂酶潜在益生菌被鉴定为Tamlana sp.(FA86);安全性实验表明5株潜在益生菌在107cfu/ml下对皱纹盘鲍没有明显的毒害作用;通过体内饲喂实验发现,潜在益生菌WA64、WA65的复合作用能够显著提高幼鲍增重率和存活率(P<0.05),并在生产条件下能够明显降低幼鲍的死亡量。经抗生素敏感性实验,WA64菌株对15种抗生素均敏感或中度敏感,WA65菌株仅对庆大霉素和链霉素2种抗生素产生耐药。 展开更多
关键词 幼鲍 益生菌 筛选 生长
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仿刺参体腔细胞单克隆抗体的制备及特性分析 被引量：2
7
作者 李强 迟刚 +1 位作者 李莹 李华 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期542-546,共5页
应用杂交瘤技术制备了4株稳定分泌抗仿刺参Apostichopus japonicus体腔细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其单克隆抗体的特性进行了分析。结果表明:单抗1C7和1H7主要结合淋巴样细胞,单抗2E8可与所有体腔细胞结合,单抗4E9主要结合球形细... 应用杂交瘤技术制备了4株稳定分泌抗仿刺参Apostichopus japonicus体腔细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其单克隆抗体的特性进行了分析。结果表明:单抗1C7和1H7主要结合淋巴样细胞,单抗2E8可与所有体腔细胞结合,单抗4E9主要结合球形细胞;单抗2E8、4E9与仿刺参体腔液具有明显的交叉反应,单抗1C7和1H7则与体腔液无交叉反应;单抗1C7和4E9属于IgG1,2E8属于IgG2a,1H7属于IgM亚型;单抗1C7和1H7均可识别相对分子质量为37 000的蛋白,单抗2E8可同时识别相对分子质量为37 000和61 000两种蛋白,单抗4E9可识别相对分子质量为108 000的蛋白。该单抗的制备为进一步研究仿刺参体腔细胞和体腔液之间的关系,体腔细胞的分类、分布、发生、分化及功能提供了新的工具。 展开更多
关键词 仿刺参 体腔细胞 单克隆抗体
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皱纹盘鲍肠道菌群组成及PCR-DGGE指纹图谱分析 被引量：7
8
作者 冷晓飞 姜海峰 +4 位作者 刘小林 王高学 张艳 高洪涛 常亚青 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期10-14,共5页
对养殖和野生皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)不同个体间肠道菌群数量和种类组成进行了研究,并采用PCR-DGGE指纹技术对比分析了二者肠道优势菌群的差异。研究结果表明,养殖和野生皱纹盘鲍肠道好氧及兼性厌氧菌总数分别为(3.50... 对养殖和野生皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)不同个体间肠道菌群数量和种类组成进行了研究,并采用PCR-DGGE指纹技术对比分析了二者肠道优势菌群的差异。研究结果表明,养殖和野生皱纹盘鲍肠道好氧及兼性厌氧菌总数分别为(3.50±0.85)×106个/g,(3.03±1.10)×106个/g;两组鲍鱼肠道优势菌基本相同,均为弧菌属(Vibrio),次优势菌均为玫瑰杆菌属(Roseobacter)和希瓦氏菌属(Shewanella),在养殖组中检测到芽孢杆菌属(Bacillus),表明皱纹盘鲍对肠道细菌具有特异选择性。此外,PCR-DGGE指纹图谱结果表明,从养殖和野生皱纹盘鲍肠道样品分别获得14条和12条扩增条带,其中人工组中有2条特异性条带;二者相似性系数(戴斯系数)为92.31%。 展开更多
关键词 皱纹盘鲍(Haliotis DISCUS HANNAI Ino) 肠道 菌群 PCR—DGGE
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