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乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位与结构预测
被引量：
4
1
作者
伦永志
雷莎
+5 位作者
成军
王毓婧
王琦
沈立婷
蒋海辉
张尧
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期280-282,共3页
目的利用真核细胞绿色荧光表达系统分析乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位,并用生物信息学方法对其结构进行分析。方法将HBVDNAPTP1基因片段插入pEGFP-C1载体中,分别转染HepG2细胞与COS7细胞,在荧光倒置显微镜...
目的利用真核细胞绿色荧光表达系统分析乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位,并用生物信息学方法对其结构进行分析。方法将HBVDNAPTP1基因片段插入pEGFP-C1载体中,分别转染HepG2细胞与COS7细胞,在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光融合蛋白的细胞内定位,并应用生物信息学技术分析HBVDNAPTP1的结构特征。结果经RT-PCR扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,成功构建HBVDNAPTP1基因的绿色荧光表达载体,转染细胞后,48～72h内细胞质出现明显的绿色荧光信号。结构预测结果表明HBVDNAPTP1无卷曲螺旋区域,有6个疏水区;无特殊二级结构,有2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、4个N端豆蔻酰基化位点和3个蛋白激酶C磷酸化位点;不具有跨膜螺旋结构,无信号肽。结论HBVDNAPTP1的亚细胞定位结果与生物信息学分析相符,为进一步研究其生物学功能及其在乙型肝炎、肝细胞癌中的作用机制奠定了基础。
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关键词
肝炎病毒
乙型
DNA聚合酶
亚细胞定位
计算生物学
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职称材料
乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1相互作用蛋白的筛选与鉴定
被引量：
1
2
作者
伦永志
成军
+3 位作者
武会娟
于增国
王琦
王芳
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期973-975,共3页
目的筛选并鉴定与乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶反式调节蛋白(HBVDNAPTP1)相互作用的蛋白。方法将HBVDNAPTP1基因片段插入酵母细胞表达载体pGBKT7中,转化AH109酵母菌株并获得表达,与含有白细胞文库质粒的Y187酵母菌株配合,利用营养缺陷型...
目的筛选并鉴定与乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶反式调节蛋白(HBVDNAPTP1)相互作用的蛋白。方法将HBVDNAPTP1基因片段插入酵母细胞表达载体pGBKT7中,转化AH109酵母菌株并获得表达,与含有白细胞文库质粒的Y187酵母菌株配合,利用营养缺陷型培养基筛选阳性克隆。提取单个阳性文库质粒进行酶切鉴定,测序后回复验证其在酵母中的相互作用。利用免疫共沉淀方法进一步验证HBVDNAPTP1与成对免疫球蛋白受体α(PILRα)在体外的相互作用。结果经RT-PCR扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,成功构建HBVDNAPTP1基因的酵母细胞"诱饵"表达质粒,获得了与HBVDNAPTP1具有相互作用的已知功能蛋白4种,分别为PILRα、酶原颗粒蛋白16、羧酸脂酶1、β转导素样蛋白2。免疫共沉淀结果表明HBVDNAPTP1与PILRα在体外存在相互作用。结论获得了4种可与HBVDNAPTP1相互作用的候选蛋白,HBVDNAPTP1可能参与了肝细胞的增殖分化、信息传递和生长代谢。
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关键词
肝炎病毒
乙型
DNA聚合酶
反式激活因子类
双杂交系统技术
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职称材料
大鼠电压依赖性阴离子通道1的基因克隆与序列分析
3
作者
伦永志
李达
+3 位作者
赵益敏
肖付诚
孙武平
周士胜
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期998-1000,共3页
目的克隆大鼠电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法以提取的大鼠心肌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得VDAC1基因片段,连接到pMD19-T克隆载体并测序鉴定。应用生物信息学方法分析VDAC1基因的序列同源性...
目的克隆大鼠电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法以提取的大鼠心肌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得VDAC1基因片段,连接到pMD19-T克隆载体并测序鉴定。应用生物信息学方法分析VDAC1基因的序列同源性与结构特征。结果成功克隆了大鼠VDAC1基因,与人、牛、小鼠、兔和猪的VDAC1基因具有高度同源性,同源性分别为90.0%、90.6%、96.0%、91.1%和91.0%。VDAC1在体外哺乳动物网状细胞中的半寿期为30h,无卷曲螺旋结构,但有6个亲水区,在225～247aa具有真核细胞线粒体外膜孔道蛋白家族特征性模序结构。结论成功克隆了大鼠VDAC1基因,并应用生物信息学技术进行序列分析,为进一步研究其生物学功能及其在2型糖尿病发病机制中的作用提供了依据和线索。
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关键词
电压依赖性阴离子通道1
2型糖尿病
基因克隆
生物信息学
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职称材料
题名
乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位与结构预测
被引量：
4
1
作者
伦永志
雷莎
成军
王毓婧
王琦
沈立婷
蒋海辉
张尧
机构
大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室
北京地坛医院传染病研究所
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期280-282,共3页
文摘
目的利用真核细胞绿色荧光表达系统分析乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位,并用生物信息学方法对其结构进行分析。方法将HBVDNAPTP1基因片段插入pEGFP-C1载体中,分别转染HepG2细胞与COS7细胞,在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光融合蛋白的细胞内定位,并应用生物信息学技术分析HBVDNAPTP1的结构特征。结果经RT-PCR扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,成功构建HBVDNAPTP1基因的绿色荧光表达载体,转染细胞后,48～72h内细胞质出现明显的绿色荧光信号。结构预测结果表明HBVDNAPTP1无卷曲螺旋区域,有6个疏水区;无特殊二级结构,有2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、4个N端豆蔻酰基化位点和3个蛋白激酶C磷酸化位点;不具有跨膜螺旋结构,无信号肽。结论HBVDNAPTP1的亚细胞定位结果与生物信息学分析相符,为进一步研究其生物学功能及其在乙型肝炎、肝细胞癌中的作用机制奠定了基础。
关键词
肝炎病毒
乙型
DNA聚合酶
亚细胞定位
计算生物学
Keywords
hepatitis B virus
DNA polymerase
subcellular localization
computational biology
分类号
R373.21 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1相互作用蛋白的筛选与鉴定
被引量：
1
2
作者
伦永志
成军
武会娟
于增国
王琦
王芳
机构
大连大学
医学院
、
辽宁省
高校
生物
物理学
重点
实验室
北京地坛医院传染病研究所
北京市理化分析测试中心
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期973-975,共3页
文摘
目的筛选并鉴定与乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶反式调节蛋白(HBVDNAPTP1)相互作用的蛋白。方法将HBVDNAPTP1基因片段插入酵母细胞表达载体pGBKT7中,转化AH109酵母菌株并获得表达,与含有白细胞文库质粒的Y187酵母菌株配合,利用营养缺陷型培养基筛选阳性克隆。提取单个阳性文库质粒进行酶切鉴定,测序后回复验证其在酵母中的相互作用。利用免疫共沉淀方法进一步验证HBVDNAPTP1与成对免疫球蛋白受体α(PILRα)在体外的相互作用。结果经RT-PCR扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,成功构建HBVDNAPTP1基因的酵母细胞"诱饵"表达质粒,获得了与HBVDNAPTP1具有相互作用的已知功能蛋白4种,分别为PILRα、酶原颗粒蛋白16、羧酸脂酶1、β转导素样蛋白2。免疫共沉淀结果表明HBVDNAPTP1与PILRα在体外存在相互作用。结论获得了4种可与HBVDNAPTP1相互作用的候选蛋白,HBVDNAPTP1可能参与了肝细胞的增殖分化、信息传递和生长代谢。
关键词
肝炎病毒
乙型
DNA聚合酶
反式激活因子类
双杂交系统技术
Keywords
hepatitis B virus
DNA polymerase
trans-activators
two-hybrid system techniques
分类号
R446.61 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
大鼠电压依赖性阴离子通道1的基因克隆与序列分析
3
作者
伦永志
李达
赵益敏
肖付诚
孙武平
周士胜
机构
大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期998-1000,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30570665)
文摘
目的克隆大鼠电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法以提取的大鼠心肌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得VDAC1基因片段,连接到pMD19-T克隆载体并测序鉴定。应用生物信息学方法分析VDAC1基因的序列同源性与结构特征。结果成功克隆了大鼠VDAC1基因,与人、牛、小鼠、兔和猪的VDAC1基因具有高度同源性,同源性分别为90.0%、90.6%、96.0%、91.1%和91.0%。VDAC1在体外哺乳动物网状细胞中的半寿期为30h,无卷曲螺旋结构,但有6个亲水区,在225～247aa具有真核细胞线粒体外膜孔道蛋白家族特征性模序结构。结论成功克隆了大鼠VDAC1基因,并应用生物信息学技术进行序列分析,为进一步研究其生物学功能及其在2型糖尿病发病机制中的作用提供了依据和线索。
关键词
电压依赖性阴离子通道1
2型糖尿病
基因克隆
生物信息学
Keywords
voltage-dependent anion channel 1
type 2 diabetes mellitus
gene cloning
computational biology
分类号
R979.1 [医药卫生—药品]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位与结构预测
伦永志
雷莎
成军
王毓婧
王琦
沈立婷
蒋海辉
张尧
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1相互作用蛋白的筛选与鉴定
伦永志
成军
武会娟
于增国
王琦
王芳
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
大鼠电压依赖性阴离子通道1的基因克隆与序列分析
伦永志
李达
赵益敏
肖付诚
孙武平
周士胜
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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