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人ClC-2基因小分子干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定
被引量：
4
1
作者
杨翔云
张勇
+4 位作者
赖小刚
裴建明
杨安钢
胡玉珍
周士胜
《医学研究生学报》
CAS
2006年第6期487-491,i0011,共6页
目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2...
目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2基因片段。将该片段连接至经BglⅡ和HindⅢ双酶切的真核细胞表达载体pSUPER.puro的多克隆位点,转化扩增提取质粒;对重组质粒进行EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定。脂质体L ipofectam ineTM2000介导瞬时转染,通过RT-PCR检测人胶质瘤细胞系BT-325细胞中C lC-2mRNA表达。结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与真核细胞表达载体pSUPER.puro连接正确。转染两重组质粒细胞的C lC-2 mRNA表达明显降低。结论:成功构建人C lC-2基因干扰真核表达载体2个,分别命名为pSUPER.puro-siC lC-21和pSUPER.puro-siC lC-22,可用于进一步研究C lC-2基因对人胶质瘤侵袭和迁移活动的影响。
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关键词
ClC-2基因
人胶质瘤
RNA干扰
重组载体
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职称材料
干扰ClC-2基因表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响
被引量：
3
2
作者
杨翔云
赖小刚
+3 位作者
张勇
裴建明
杨安钢
周士胜
《中国康复理论与实践》
CSCD
2006年第5期378-380,共3页
目的观察抑制容积调控氯通道ClC-2基因的表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响。方法设计和构建两个针对ClC2基因的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒和两个重组质粒分别转染入BT-325细胞(...
目的观察抑制容积调控氯通道ClC-2基因的表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响。方法设计和构建两个针对ClC2基因的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒和两个重组质粒分别转染入BT-325细胞(依次为对照组、PP1组和PP2组);通过RTPCR检测ClC2基因mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期。结果与对照组相比较,干扰组ClC2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期。结论干扰胶质瘤细胞系BT-325细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的生长,提示ClC2基因可能成为控制胶质瘤恶性生长的新靶点。
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关键词
ClC-2基因
胶质瘤
RNA干扰(RNAI)
BT-325细胞
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职称材料
题名
人ClC-2基因小分子干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定
被引量：
4
1
作者
杨翔云
张勇
赖小刚
裴建明
杨安钢
胡玉珍
周士胜
机构
第四军医
大学
生理学
教研室
第四军医
大学
免疫学
教研室
解放军第二
大连大学医学院生理学教研室
出处
《医学研究生学报》
CAS
2006年第6期487-491,i0011,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(批准号:30270602)
文摘
目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2基因片段。将该片段连接至经BglⅡ和HindⅢ双酶切的真核细胞表达载体pSUPER.puro的多克隆位点,转化扩增提取质粒;对重组质粒进行EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定。脂质体L ipofectam ineTM2000介导瞬时转染,通过RT-PCR检测人胶质瘤细胞系BT-325细胞中C lC-2mRNA表达。结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与真核细胞表达载体pSUPER.puro连接正确。转染两重组质粒细胞的C lC-2 mRNA表达明显降低。结论:成功构建人C lC-2基因干扰真核表达载体2个,分别命名为pSUPER.puro-siC lC-21和pSUPER.puro-siC lC-22,可用于进一步研究C lC-2基因对人胶质瘤侵袭和迁移活动的影响。
关键词
ClC-2基因
人胶质瘤
RNA干扰
重组载体
Keywords
ClC-2 gene
Human glioma
RNAi
Recombinant vectors
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
干扰ClC-2基因表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响
被引量：
3
2
作者
杨翔云
赖小刚
张勇
裴建明
杨安钢
周士胜
机构
第四军医
大学
生理学
教研室
解放军第
第四军医
大学
免疫学
教研室
大连大学医学院生理学教研室
出处
《中国康复理论与实践》
CSCD
2006年第5期378-380,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30270602)。
文摘
目的观察抑制容积调控氯通道ClC-2基因的表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响。方法设计和构建两个针对ClC2基因的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒和两个重组质粒分别转染入BT-325细胞(依次为对照组、PP1组和PP2组);通过RTPCR检测ClC2基因mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期。结果与对照组相比较,干扰组ClC2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期。结论干扰胶质瘤细胞系BT-325细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的生长,提示ClC2基因可能成为控制胶质瘤恶性生长的新靶点。
关键词
ClC-2基因
胶质瘤
RNA干扰(RNAI)
BT-325细胞
Keywords
ClC-2 gene
glioma
RNA interference （RNAi）
BT 325 cells
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R739.4 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人ClC-2基因小分子干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定
杨翔云
张勇
赖小刚
裴建明
杨安钢
胡玉珍
周士胜
《医学研究生学报》
CAS
2006
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
干扰ClC-2基因表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响
杨翔云
赖小刚
张勇
裴建明
杨安钢
周士胜
《中国康复理论与实践》
CSCD
2006
3
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职称材料
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