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金属离子对蛇毒蛋白生物活性及结构效应的影响 被引量:2
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作者 刘淑清 郭春梅 +3 位作者 徐跃飞 孙明忠 辛毅 唐建武 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1773-1778,共6页
从旅顺产白眉蝮蛇(Gloydius blomhoffii brevicaudus,GBB)蛇毒中纯化得到了3种电泳和质谱纯蛋白活性组分,其酶解肽段采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI-MS/MS)进行序列测定,与其它同源性蛇毒蛋白氨基酸序列比对发现,3种蛋白为... 从旅顺产白眉蝮蛇(Gloydius blomhoffii brevicaudus,GBB)蛇毒中纯化得到了3种电泳和质谱纯蛋白活性组分,其酶解肽段采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI-MS/MS)进行序列测定,与其它同源性蛇毒蛋白氨基酸序列比对发现,3种蛋白为新的蛇毒磷脂酶A2、类凝血酶和金属蛋白酶,分别将其命名为GBB-bPLA2,GBB-TLE和GBB-MP.电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测得每个GBB-bPLA2和GBB-MP中含有一个Ca2+;每个GBB-TLE中含有2个Zn2+.Ca2+可分别使GBB-bPLA2和GBB-MP的荧光发射波长向短波方向移动2.0和1.6nm,使二者的荧光发射强度提高14.0%和11.0%;Ca2+的存在可显著提高二者的热稳定性,使GBB-bPLA2和GBB-MP的热变性温度分别提高1.5和2.0℃.Zn2+使GBB-TLE的荧光发射强度增高4.3%,但对GBB-TLE的酯酶水解活性、荧光发射波长和热变性温度无显著影响.金属离子的存在能够不同程度地影响蛇毒蛋白结构热稳定性,但对蛇毒蛋白生物活性的作用则不同. 展开更多
关键词 蛇毒蛋白 金属离子 活性
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中波紫外线与化学致癌物诱导下HaCaT细胞的蛋白表达应答 被引量:1
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作者 孙明忠 刘淑清 +4 位作者 吕晓 郭一萌 郭春梅 辛毅 唐建武 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1965-1971,共7页
对角质形成细胞HaCaT分别进行中波紫外线(UVB)照射、2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激及UVB+DNBS(UD)共同刺激,利用二维荧光差异胶内凝胶电泳(2D DIGE)、DeCyder定量分析软件和HPLC-nESI-MS/MS分析技术,对HaCaT细胞产生的差异表达蛋白进行了... 对角质形成细胞HaCaT分别进行中波紫外线(UVB)照射、2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激及UVB+DNBS(UD)共同刺激,利用二维荧光差异胶内凝胶电泳(2D DIGE)、DeCyder定量分析软件和HPLC-nESI-MS/MS分析技术,对HaCaT细胞产生的差异表达蛋白进行了鉴定.有65个蛋白质点发生了明显表达差异(P<0.05),与UVB或DNBS单独处理细胞相比,有41个蛋白点表现为UVB和DNBS的正协同效应,13个蛋白点表现为负协同效应,5个蛋白点与UVB单独处理相近,6个蛋白点与DNBS单独处理相近.HPLC-nESI-MS/MS从65个差异表达蛋白质点中共鉴定出60种单一(Unique)蛋白.采用生物信息学方法对这些鉴定蛋白所涉及的分子功能、参与的生物学过程及信号通路进行了系统分析.实验得到了与紫外辐射和化学诱导损伤的直接相关蛋白,有助于研究不同环境条件下皮肤癌的形成及皮肤疾病的有效防护与治疗. 展开更多
关键词 HaCaT细胞系 中波紫外线 2 4-二硝基苯磺酸 二维荧光差异胶内凝胶电泳
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Ca^(2+)离子对PLA_2结构和功能的影响
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作者 刘淑清 孙明忠 赵宝昌 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期257-262,共6页
摘要从旅顺产白眉蝮蛇(Glyodius blomhoffi Brevicaudaus,GBB)蛇毒(GBBSV)中首次纯化得到了电泳纯和质谱纯磷脂酶A2(GBB-PLA2)。采用电泳、质谱、等离子体发射光谱、紫外、荧光光谱测试技术对GBB-PLA2进行了系统表征。HPLC-ESI-MS法测... 摘要从旅顺产白眉蝮蛇(Glyodius blomhoffi Brevicaudaus,GBB)蛇毒(GBBSV)中首次纯化得到了电泳纯和质谱纯磷脂酶A2(GBB-PLA2)。采用电泳、质谱、等离子体发射光谱、紫外、荧光光谱测试技术对GBB-PLA2进行了系统表征。HPLC-ESI-MS法测得的精确分子量为13 965·07 amu,HPLC-ESI-MS/MS法鉴定GBB-PLA2为江浙蝮蛇和尖吻蝮蛇蛇毒PLA2的同源性蛋白,分别得到4个和1个同源性肽段。凝胶过滤、质谱和SDS-PAGE测试技术结果表明,GBB-PLA2以稳定的单体形式存在。电感耦合等离子体发射光谱分析法(ICP-AES)测得每1个磷脂酶A2含有1个Ca2+离子,Ca2+是PLA2活性所必需的。Ca2+的除去使PLA2活性降低90%,外加Ca2+明显加速PLA2水解底物DPPC的速度。Ca2+起稳定PLA2结构的作用,可使GBB-PLA2的热变性温度提高3℃。 展开更多
关键词 磷脂酶A2 Ca2+离子 结构 功能
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慢性阻塞性肺疾病的气道黏液高分泌及其靶向治疗 被引量:8
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作者 崔力沙 谌望孙 +3 位作者 刘卓 朱发贝 李艳霞 吴大畅 《医药导报》 CAS 2017年第A01期55-57,共3页
气道黏液在先天性免疫应答中发挥重要作用.但是,当气道丧失正常功能时在其近端及远端位置便会出现高黏液分泌状态和分泌物增多的现象,同时将引发相关症状,如咳嗽、咳痰、肺功能下降,气道阻塞,也成为导致慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者病... 气道黏液在先天性免疫应答中发挥重要作用.但是,当气道丧失正常功能时在其近端及远端位置便会出现高黏液分泌状态和分泌物增多的现象,同时将引发相关症状,如咳嗽、咳痰、肺功能下降,气道阻塞,也成为导致慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者病死率增高的重要原因.黏液产生和分泌的细胞及分子机制已在体外人工培养的上皮细胞和动物模型中得到很好验证.烟雾和微生物产物可有效地触发黏液的产生和分泌过程.目前,只有少数药物被证实在降低COPD患者黏液高分泌状态中发挥确切疗效,药物对人体黏液高分泌的作用仍没有得到有效评估. 展开更多
关键词 黏液高分泌 肺疾病 阻塞性 慢性 靶向治疗
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姜黄素增强PTEN野生型三阴性乳腺癌细胞对PARP1抑制剂敏感性的研究 被引量:2
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作者 孙偲丰 王莹 +4 位作者 杨彦琴 玄基泽 张斌 秦元华 茅卫锋 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期28-33,共6页
目的研究姜黄素增强PTEN(磷酸酶和张力蛋白同系物)野生型三阴性乳腺癌细胞对于PARP1抑制剂奥拉帕尼(Olaparib)的敏感性及其潜在的作用机制,从而为PTEN野生型三阴性乳腺癌病人的临床治疗提供新方案。方法使用PTEN缺陷三阴性乳腺癌细胞株B... 目的研究姜黄素增强PTEN(磷酸酶和张力蛋白同系物)野生型三阴性乳腺癌细胞对于PARP1抑制剂奥拉帕尼(Olaparib)的敏感性及其潜在的作用机制,从而为PTEN野生型三阴性乳腺癌病人的临床治疗提供新方案。方法使用PTEN缺陷三阴性乳腺癌细胞株BT549和PTEN野生型细胞株BT549-PTEN进行实验。MTT实验检测两种细胞在奥拉帕尼作用下的存活率。蛋白质印迹实验检测PTEN缺陷型和野生型细胞中同源重组修复关键蛋白RAD51的表达。彗星实验检测姜黄素及姜黄素与奥拉帕尼联合使用后细胞DNA的损伤程度。蛋白质印迹检测姜黄素作用后RAD51变化。结果PTEN可通过增加RAD51的方式促进DNA损伤的修复。与PTEN缺陷型细胞相比,野生型细胞对于奥拉帕尼的作用较不敏感。姜黄素能够通过抑制RAD51的方式抑制PTEN介导的DNA修复,并增强PTEN野生型三阴性乳腺癌对奥拉帕尼的敏感性。结论姜黄素通过抑制PTEN介导的DNA修复使PTEN野生型乳腺癌细胞对PARP1抑制剂奥拉帕尼敏感。 展开更多
关键词 姜黄素 PTEN 三阴性乳腺癌 DNA修复 奥拉帕尼
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Zn^2+对EGCG的结构和抑菌活性的影响 被引量:1
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作者 苗嘉桐 侯兴栋 +4 位作者 夏思远 邓忆美 付维哲 孙铁英 姜涛 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期63-67,共5页
揭示耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2155)和Zn^2+对表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)结构和生物学活性的影响,为开发高活性EGCG制剂奠定基础。首先利用HPLC检测EGCG和耻垢分枝杆菌相互作用后的含... 揭示耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2155)和Zn^2+对表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)结构和生物学活性的影响,为开发高活性EGCG制剂奠定基础。首先利用HPLC检测EGCG和耻垢分枝杆菌相互作用后的含量和结构变化,进而化学合成EGCG-Zn^2+,利用紫外吸收光谱法和HPLC方法鉴定EGCG被Zn^2+修饰前后的结构变化。最后采用纸片琼脂扩散法比较EGCG和EGCG-Zn^2+对耻垢分枝杆菌的抑制作用。EGCG与耻垢分枝杆菌相互作用18 h后,即出现不同的EGCG代谢物,且EGCG自身结构含量比例明显降低。EGCG与特定金属离子Zn^2+结合后,其最大吸收波长和吸收强度均有改变,且EGCG-Zn^2+在紫外吸收光区有明显的酚羟基吸收。HPLC结果表明,EGCG-Zn^2+能引起EGCG结构变化而导致保留时间延长。抑菌实验研究发现,EGCG-Zn^2+对耻垢分枝杆菌的抑菌作用弱于EGCG。研究表明,EGCG结构的稳定性容易受到细菌以及Zn^2+的影响,为EGCG的进一步研究开发提供线索。 展开更多
关键词 EGCG EGCG-Zn^2+ 同分异构体 抑菌作用
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