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肺炎链球菌自溶素LytA小片段免疫活性的研究
被引量：
1
1
作者
邹琴
杨光
+2 位作者
罗红
宫晓红
孙文平
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2014年第3期52-55,共4页
通过对肺炎链球菌（ATCC49619）自溶素lytA全序列基因的克隆和表达，获得部分小片段蛋白，初步研究其免疫活性。根据GenBank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列（FN549899.1）设计合成特异性引物，采用PCR技术从肺炎链球菌（ATCC49619）...
通过对肺炎链球菌（ATCC49619）自溶素lytA全序列基因的克隆和表达，获得部分小片段蛋白，初步研究其免疫活性。根据GenBank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列（FN549899.1）设计合成特异性引物，采用PCR技术从肺炎链球菌（ATCC49619）基因组中扩增lytA全序列片段，构建克隆载体PGM T/lytA, 测序后与M66菌株比对显示，肺炎链球菌ATCC49619株碱基序列内存在新酶切位点BamHⅠ。以BamHⅠ、HindⅢ双酶切后，目的基因出现2个小片度，以约500 bp小片段构建重组表达载体pET32a（＋）/lytA′，经IPTG诱导后等电点洗脱法获取纯化的目的蛋白LytA′。将LytA′免疫小鼠，测定抗体效价，同时进行Western blot鉴定。测序显示肺炎链球菌ATCC49619菌株与M66菌株的lytA全基因序列同源性为98%，具有高度保守性，碱基不同主要位于下游部分，在444～450 bp之间新出现BamHⅠ酶切位点。构建的小片段重组表达质粒pET32a（＋）/lytA′在BL21（DE3）中高效表达，获得纯化蛋白LytA′，免疫BALB/c小鼠产生的抗体效价为1：32，经Western blot证实该蛋白具有较好的抗体结合活性，为进一步应用于疫苗及药物等相关研究奠定基础。
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关键词
肺炎链球菌
自溶素
酶切
免疫活性
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职称材料
肺炎链球菌胆碱结合蛋白A在社区获得性肺炎诊断中的应用
2
作者
邹琴
罗红
+2 位作者
黄进
方容
王威
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第10期1175-1178,共4页
目的:探索以肺炎链球菌胆碱结合蛋白A(pneumococcal choline binding protein A,rCbpA)为抗原的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)反应模型在肺炎球菌性社区获得性肺炎患者(community acquired pneumonia,CAP...
目的:探索以肺炎链球菌胆碱结合蛋白A(pneumococcal choline binding protein A,rCbpA)为抗原的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)反应模型在肺炎球菌性社区获得性肺炎患者(community acquired pneumonia,CAP)检测中的应用价值。方法:设计合成cbpA基因序列引物,通过PCR扩增,构建克隆质粒PGM-T/cbpA和表达质粒。经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl phosphorothioate,IPTG)诱导表达重组蛋白rCbpA;构建ELISA反应模型(rCbpA作为抗原),检测健康组及肺炎球菌性CAP患者组血清中相应的IgM和IgG抗体。并与痰培养、血培养结果相比较。运用卡方检验分析结果差异。结果:成功获得肺炎链球菌重组蛋白rCbpA,建立rCbpA-ELISA模型。以rCbpA-IgM模式检测肺炎球菌性CAP患者组的敏感性为22.5%,与血培养及痰培养法检测的敏感性无统计学差异(χ^(2)=3.529,P=0.060;χ^(2)=0.075,P=0.785);但其特异性为100%,明显高于痰培养(χ^(2)=12.754,P=0.000)。rCbpA-IgG模式检测肺炎球菌性CAP患者组的敏感性为50%,与血培养、痰培养检测的敏感性差异具有统计学意义(χ^(2)=17.635,P=0.000;χ^(2)=7.912,P=0.005)。结论:血清重组蛋白rCbpA对IgM类抗体有高特异性、对IgG类抗体有高敏感性,且该检测方法快,判定结果更准确客观,可以有效提高肺炎球菌感染性肺炎的诊断价值。
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关键词
肺炎链球菌胆碱结合蛋白A
蛋白表达
社区获得性肺炎
酶联免疫吸附测定
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职称材料
题名
肺炎链球菌自溶素LytA小片段免疫活性的研究
被引量：
1
1
作者
邹琴
杨光
罗红
宫晓红
孙文平
机构
大连医科大学临床免疫与微生物教研室
大连
市中医医院
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2014年第3期52-55,共4页
基金
辽宁省自然科学基金(201202053)
文摘
通过对肺炎链球菌（ATCC49619）自溶素lytA全序列基因的克隆和表达，获得部分小片段蛋白，初步研究其免疫活性。根据GenBank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列（FN549899.1）设计合成特异性引物，采用PCR技术从肺炎链球菌（ATCC49619）基因组中扩增lytA全序列片段，构建克隆载体PGM T/lytA, 测序后与M66菌株比对显示，肺炎链球菌ATCC49619株碱基序列内存在新酶切位点BamHⅠ。以BamHⅠ、HindⅢ双酶切后，目的基因出现2个小片度，以约500 bp小片段构建重组表达载体pET32a（＋）/lytA′，经IPTG诱导后等电点洗脱法获取纯化的目的蛋白LytA′。将LytA′免疫小鼠，测定抗体效价，同时进行Western blot鉴定。测序显示肺炎链球菌ATCC49619菌株与M66菌株的lytA全基因序列同源性为98%，具有高度保守性，碱基不同主要位于下游部分，在444～450 bp之间新出现BamHⅠ酶切位点。构建的小片段重组表达质粒pET32a（＋）/lytA′在BL21（DE3）中高效表达，获得纯化蛋白LytA′，免疫BALB/c小鼠产生的抗体效价为1：32，经Western blot证实该蛋白具有较好的抗体结合活性，为进一步应用于疫苗及药物等相关研究奠定基础。
关键词
肺炎链球菌
自溶素
酶切
免疫活性
Keywords
Streptococcus pneumonia
autolysin
enzyme digestion
immune activity
分类号
Q939.91 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
肺炎链球菌胆碱结合蛋白A在社区获得性肺炎诊断中的应用
2
作者
邹琴
罗红
黄进
方容
王威
机构
武汉市第四医院/华中科技
大学
同济医学院附属普爱医院检验科
大连医科大学临床免疫与微生物教研室
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第10期1175-1178,共4页
基金
湖北省武汉市科技局应用基础前沿专项资助项目(编号:2019020701011472)。
文摘
目的:探索以肺炎链球菌胆碱结合蛋白A(pneumococcal choline binding protein A,rCbpA)为抗原的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)反应模型在肺炎球菌性社区获得性肺炎患者(community acquired pneumonia,CAP)检测中的应用价值。方法:设计合成cbpA基因序列引物,通过PCR扩增,构建克隆质粒PGM-T/cbpA和表达质粒。经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl phosphorothioate,IPTG)诱导表达重组蛋白rCbpA;构建ELISA反应模型(rCbpA作为抗原),检测健康组及肺炎球菌性CAP患者组血清中相应的IgM和IgG抗体。并与痰培养、血培养结果相比较。运用卡方检验分析结果差异。结果:成功获得肺炎链球菌重组蛋白rCbpA,建立rCbpA-ELISA模型。以rCbpA-IgM模式检测肺炎球菌性CAP患者组的敏感性为22.5%,与血培养及痰培养法检测的敏感性无统计学差异(χ^(2)=3.529,P=0.060;χ^(2)=0.075,P=0.785);但其特异性为100%,明显高于痰培养(χ^(2)=12.754,P=0.000)。rCbpA-IgG模式检测肺炎球菌性CAP患者组的敏感性为50%,与血培养、痰培养检测的敏感性差异具有统计学意义(χ^(2)=17.635,P=0.000;χ^(2)=7.912,P=0.005)。结论:血清重组蛋白rCbpA对IgM类抗体有高特异性、对IgG类抗体有高敏感性,且该检测方法快,判定结果更准确客观,可以有效提高肺炎球菌感染性肺炎的诊断价值。
关键词
肺炎链球菌胆碱结合蛋白A
蛋白表达
社区获得性肺炎
酶联免疫吸附测定
Keywords
pneumococcal choline binding protein A
protein expression
community-acquired pneumonia
enzyme-linked immunosorbent assay
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肺炎链球菌自溶素LytA小片段免疫活性的研究
邹琴
杨光
罗红
宫晓红
孙文平
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2014
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
肺炎链球菌胆碱结合蛋白A在社区获得性肺炎诊断中的应用
邹琴
罗红
黄进
方容
王威
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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