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miR-207靶向自噬相关蛋白LAMP2调控巨噬细胞与结核分枝杆菌相互作用机制的研究 被引量：1
1
作者 杜文雅 代禹美 +2 位作者 乐林芝 马涛 吴利先 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期97-104,共8页
目的miR-207被发现在自然杀伤(NK)细胞外泌体中表达,参与疾病进展,但暂无与结核病(TB)有关的研究。方法生物信息学方法预测并用双荧光素酶报告实验检测溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)是否与miR-207有靶向关系。使用脂质体转染法将实验分为四... 目的miR-207被发现在自然杀伤(NK)细胞外泌体中表达,参与疾病进展,但暂无与结核病(TB)有关的研究。方法生物信息学方法预测并用双荧光素酶报告实验检测溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)是否与miR-207有靶向关系。使用脂质体转染法将实验分为四组(OP-LAMP2组:共转染miR-207 mimics和LAMP2过表达质粒;EP组:共转染mimics NC和空载质粒;siLAMP2组:转染siLAMP2;siLAMP2-NC组:转染siLAMP2-NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型。结核菌落形成单位计数评估LAMP2对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量PCR检测LAMP2、细胞凋亡基因、焦亡基因及自噬基因相对表达量。Western blot法检测LAMP2蛋白、细胞凋亡、焦亡、自噬蛋白的相对表达量。结果双荧光素酶报告实验检测显示miR-207与LAMP2存在靶向关系,实时荧光定量PCR、Western blot结果统计分析和显微镜下观察证明成功建立感染模型。菌落形成单位计数发现OP-LAMP2组的菌落数低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。流式细胞术检测发现OP-LAMP2组总凋亡率低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。实时荧光定量PCR及Western blot法检测发现对照组凋亡、焦亡相关蛋白和基因相对表达量趋势为OP-LAMP2低于EP组,siLAMP2组高于siLAMP2-NC组。实时荧光定量PCR检测自噬正调节基因微管相关蛋白1轻链3(LC3)和重组人自噬效应蛋白(Beclin1)在OP-LAMP2组相对表达量高于EP组,siLAMP2组低于siLAMP2-NC组,负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。结论miR-207通过靶向自噬相关蛋白LAMP2促进巨噬细胞凋亡、细胞焦亡、抑制自噬,促进结核分枝杆菌(Mtb)的存活,为TB提供新的治疗方向。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(Mtb) miR-207 LAMP2 自噬 凋亡 焦亡
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miR-146a在黏膜免疫中的调控作用 被引量：3
2
作者 李艳丽 申元英 郭乐 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期297-304,共8页
黏膜免疫是机体整个免疫网络的重要组成部分,又是具有独特结构和功能的独特免疫体系,其在抵抗感染方面起着极其重要的作用,是机体抵抗感染的第一道免疫屏障。近年来,越来越多的研究显示,微小RNA(miRNAs)具有强大的免疫调控功能,其中miR-... 黏膜免疫是机体整个免疫网络的重要组成部分,又是具有独特结构和功能的独特免疫体系,其在抵抗感染方面起着极其重要的作用,是机体抵抗感染的第一道免疫屏障。近年来,越来越多的研究显示,微小RNA(miRNAs)具有强大的免疫调控功能,其中miR-146a作为协调免疫反应和炎症信号最重要的miRNAs之一,在包括免疫反应在内的多种生物过程和途径中发挥关键作用。本文综述了miR-146a与黏膜免疫的相关研究进展。 展开更多
关键词 MICRORNAS MIR-146A 黏膜免疫 炎症
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Toll样受体2(TLR2)与结核分枝杆菌感染的相关研究进展 被引量：1
3
作者 陈瑞枫 王瑄 +2 位作者 马枫茜 周鑫沛 吴利先 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期367-372,共6页
Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的T... Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的TLR2都可与其相互作用,释放细胞因子,影响MTB在体内的状态和增殖。在分子层面,TLR2的多态性有待更多探索,目前研究的大部分TLR2的多态性被认为与MTB的易感性无关。文中总结了TLR2与配体、感染后免疫调节活动、多态性与MTB易感性等方面的研究进展。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(MTB) Toll样受体2(TLR2) 细胞因子 多态性 综述
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结核分枝杆菌细胞外囊泡的研究进展 被引量：1
4
作者 马枫茜 邱章华 +3 位作者 杜文雅 代禹美 吴利先 王国富 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1591-1596,共6页
结核病仍然是一个严重威胁全球公共卫生的问题,每年造成数百万人感染。结核分枝杆菌(MTB)是引起结核病的主要病原菌。近年来,MTB细胞外囊泡(MEVs)作为MTB分泌分枝杆菌抗原的重要载体已引起研究者关注。MEVs能够使MTB以集中保护的方式分... 结核病仍然是一个严重威胁全球公共卫生的问题,每年造成数百万人感染。结核分枝杆菌(MTB)是引起结核病的主要病原菌。近年来,MTB细胞外囊泡(MEVs)作为MTB分泌分枝杆菌抗原的重要载体已引起研究者关注。MEVs能够使MTB以集中保护的方式分泌磷脂、核酸、脂多糖和周质成分,并与宿主相互作用。对MEVs部分内容物的研究已取得了一些进展,但对其在宿主感染MTB过程中的生物发生机制、功能以及对机体免疫应答作用的认识仍处于初级阶段。本文综述目前MEVs生物发生机制的进展,在宿主感染MTB过程中,以及在调节免疫应答中的作用,并讨论其在疫苗开发和诊断技术方面的应用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 细胞外囊泡 免疫调节
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miR-207调控结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的机制研究
5
作者 杜文雅 代禹美 +2 位作者 乐林芝 马涛 吴利先 《中国比较医学杂志》 北大核心 2024年第12期41-49,共9页
目的miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。方法将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra... 目的miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。方法将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra并转染miRNA-207 mimics)和mi-NC组(感染H37Ra并转染mimics NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型,使用脂质体转染法将miRNA-207 mimics和mimics NC转入Ana-1细胞。结核菌落形成单位计数评估miR-207对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。采用流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-207、细胞凋亡基因、焦亡基因、炎症基因及自噬基因相对表达量。Western blot检测细胞凋亡蛋白、焦亡蛋白、自噬蛋白的相对表达量。采用荧光显微镜及多功能酶标仪检测细胞内ROS的荧光强度,以及检测细胞内LDH的含量。结果显微镜下观察成功建立感染模型,qPCR检测发现对照组miR-207表达量低于空白组(P<0.01),表明miR-207在空白组和对照组中差异性表达,mi组miR-207表达量显著高于mi-NC组(P<0.0001),表明成功建立转染模型。菌落形成单位计数发现mi组的菌落数高于mi-NC组和对照组(P<0.001)。流式细胞术检测发现mi组总凋亡高于mi-NC组和对照组(P<0.05)。qPCR及Western blot检测发现对照组凋亡基因和凋亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。对照组炎症基因相对表达量高于空白组(P<0.001),mi组高于mi-NC组(P<0.05),对照组焦亡基因和焦亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.01),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。自噬正调节基因LC3和Beclin1在对照组的相对表达量高于空白组(P<0.0001),mi组低于mi-NC组(P<0.05)。负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。ROS荧光强度检测发现对照组的荧光强度高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.001)。LDH检测发现对照组细胞内LDH含量高于空白组(P<0.01),mi组与mi-NC组含量无统计学意义(P>0.05)。结论miR-207过表达促进细胞凋亡、细胞焦亡及炎症、抑制自噬,有利于H37Ra的存活,为结核病的治疗提供新的方向。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 H37RA miR-207 自噬 巨噬细胞 凋亡 焦亡
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结核分枝杆菌Rv3529c蛋白的生信分析及原核表达
6
作者 陈瑞枫 王瑄 +3 位作者 马枫茜 李祥芳 丁寿鹏 吴利先 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期621-628,共8页
目的 通过生物信息学软件预测结核分枝杆菌Rv3529c基因编码蛋白的结构和功能,并对其进行原核表达。方法 利用UniproKB数据库、PredictProtein服务、AlphaFold系统、SWISS-MODEL服务、ProtParam蛋白分析工具、ProtScale、DeepTMHMM服务和... 目的 通过生物信息学软件预测结核分枝杆菌Rv3529c基因编码蛋白的结构和功能,并对其进行原核表达。方法 利用UniproKB数据库、PredictProtein服务、AlphaFold系统、SWISS-MODEL服务、ProtParam蛋白分析工具、ProtScale、DeepTMHMM服务和SignalP-5.0服务、ProtCompB方法、IEDB数据库和STRING数据库等生物信息学预测软件对Rv3529c编码蛋白的二级和三级结构、理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及免疫表位进行分析预测。利用分子克隆技术构建表达质粒载体pET-32a-Rv3529c并进行原核表达,运用UniprotKB数据库的Blast工具对氨基酸序列进行比对,采用MEGA 11软件构建进化树,进行系统进化分析,运用STRING数据库分析蛋白间相互作用。结果 Rv3529c基因全长1 155 bp,共编码384个氨基酸。Rv3529c基因编码蛋白分子量为43.35 kDa,等电点为6.04,二级结构以α-螺旋为主,该蛋白为稳定的亲水性蛋白,无跨膜区、无信号肽,预测该蛋白亚细胞定位在细胞质中或细胞膜上,存在多个抗原抗体表位,与多个蛋白质有相互作用。经克隆、表达、鉴定、纯化后获得浓度和纯度较高的Rv3529c蛋白。结论 成功克隆、表达、纯化结核分枝杆菌Rv3529c蛋白,并初步预测其结构及功能。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv3529c蛋白 原核表达 生物信息学 表位
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结核分枝杆菌PE22/PPE36融合蛋白对耻垢分枝杆菌表型及巨噬细胞功能影响的研究
7
作者 杨雨婷 李玉洁 +1 位作者 余海燕 杨国平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期523-532,共10页
目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达... 目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达获取融合蛋白PE22/PPE36,纯化后免疫6~8周龄小鼠制备多克隆抗体;电击法构建重组菌Ms_PE22/PPE36及Ms_vec,并用所制备的多克隆抗体验证重组融合蛋白在Ms中的表达。将重组菌接种于2×YT培养基中观察其菌落形态及生长曲线;点板法及菌落计数法检测重组菌在H_(2)O_(2)、SDS、溶菌酶、NaNO_(2)、低pH、饥饿等压力条件下的存活情况,以分析PE22/PPE36融合蛋白对Ms表型的影响;重组菌侵染巨噬细胞ANA-1及RAW 264.7后,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡率,ELISA法检测ANA-1细胞TNF-α及IL-6分泌量,Griess法检测ANA-1及RAW 264.7细胞NO分泌量并用通道抑制剂检测所涉及的通路,菌落计数法检测重组菌在ANA-1及RAW 264.7细胞内的存活情况。结果与Ms_vec组相比,Ms_PE22/PPE36的菌落形态、生物膜形成及在溶菌酶、NaNO_(2)、低pH等压力条件下的存活率差异无统计学意义(溶菌酶:t 3 h=0.082,t 6 h=0.174,t 9 h=0.355;NaNO_(2):t 3 h=0.950,t 6 h=1.274;低pH:t 3 h=1.869,t 6 h=1.119,t 9 h=0.091;均P>0.05);在H_(2)O_(2)、SDS压力条件下存活率明显降低(H_(2)O_(2):t 6 h=4.35,t 8 h=4.80;SDS:t 4 h=10.43,t 6 h=2.793;均P<0.05);而稳定期生长速率及在饥饿压力条件下的存活率明显增高(生长速率:t 30 h=5.39,t 36 h=2.55,t 42 h=3.48;饥饿:t=3.323;均P<0.05);与Ms_vec感染组相比,Ms_PE22/PPE36组ANA-1细胞的早期凋亡率及TNF-α分泌量明显增加(早期凋亡:F=4.765;TNF-α:t 24 h=26.642,t_(48)h=7.634;均P<0.05),IL-6分泌量明显减少(t 24 h=5.888,t_(48)h=3.001;均P<0.05),ANA-1及RAW264.7细胞NO分泌量明显增加(ANA-1:F_(12)h=163.267,F_(24)h=111.530,F 48 h=500.328;RAW 264.7:F_(12)h=133.202,F_(24)h=718.436,F 48 h=1434.9;均P<0.05),且可被通道抑制剂Bay 11-7082、U0126及SB203580明显抑制(ANA-1:t NF-κB=32.074;t ERK=11.679;t p38=16.840;RAW 264.7:t NF-κB=119.112;均P<0.001);与Ms_vec相比,Ms_PE22/PPE36在ANA-1细胞内的存活率无明显变化(t_(48)h=0.327,t_(72)h=1.933,均P>0.05),在RAW 264.7细胞内的存活率明显降低(t_(48)h=5.509,t_(72)h=5.417;均P<0.05)。结论重组融合蛋白PE22/PPE36可改变Ms的表型并调控巨噬细胞的免疫应答。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 PE22/PPE36融合蛋白 巨噬细胞
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MicroRNAs在黏膜屏障及炎症反应中的作用
8
作者 谭仕廉 郭乐 申元英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第19期2405-2410,共6页
黏膜屏障是机体直接接触外源性异物的主要界面,同时也是病原体入侵机体的重要位点。因此,黏膜表面需要严格的调节以维持黏膜屏障功能或平衡黏膜炎症反应。近年来研究表明,MicroRNAs(miRNAs)在调节黏膜屏障功能和黏膜炎症反应过程中起到... 黏膜屏障是机体直接接触外源性异物的主要界面,同时也是病原体入侵机体的重要位点。因此,黏膜表面需要严格的调节以维持黏膜屏障功能或平衡黏膜炎症反应。近年来研究表明,MicroRNAs(miRNAs)在调节黏膜屏障功能和黏膜炎症反应过程中起到重要的作用。本文综述了相关miRNAs与黏膜炎症的研究,进一步理解miRNAs参与黏膜生理和炎症过程中的作用,找到具有防治黏膜炎症的新作用靶点。 展开更多
关键词 MICRORNAS 黏膜 炎症 屏障功能
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外泌体的抗感染作用研究进展
9
作者 马枫茜 陈瑞枫 +2 位作者 丁寿鹏 李祥芳 吴利先 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期115-119,共5页
外泌体是由多种细胞分泌的纳米囊泡,能够传递蛋白质、脂质和核酸等生物活性大分子,在细胞间信息传递中起着重要作用。越来越多的研究表明,某些类型细胞如间充质干细胞、NK细胞和中性粒细胞等细胞来源的外泌体具有治疗潜力,参与调节免疫... 外泌体是由多种细胞分泌的纳米囊泡,能够传递蛋白质、脂质和核酸等生物活性大分子,在细胞间信息传递中起着重要作用。越来越多的研究表明,某些类型细胞如间充质干细胞、NK细胞和中性粒细胞等细胞来源的外泌体具有治疗潜力,参与调节免疫系统,能够增强免疫细胞的杀伤能力;另外从感染细胞释放的外泌体也能促进抗原提呈和免疫细胞活化,激活多种细胞免疫因子,介导细胞免疫反应。本文就外泌体在抗病毒感染、细菌感染和真菌感染中的直接或间接作用进行了综述,为临床应用提供依据。 展开更多
关键词 外泌体 病毒 细菌 真菌
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