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trap基因表达在表皮葡萄球菌生物膜形成及附属基因调节(agr)系统活化中的作用 被引量:1
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作者 朱于莉 杨晓梅 +7 位作者 李娜 江娟 陈洁敏 秦智强 李敏 吕元 魏武 瞿涤 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期580-586,共7页
目的研究表皮葡萄球菌trap基因表达与生物膜形成的相关性及其对agr系统的活化作用。方法采用微量板半定量法检测表皮葡萄球菌生物膜表型,二维电泳和高灵敏度的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析比较表皮葡萄球菌标准株蛋白质表达谱,... 目的研究表皮葡萄球菌trap基因表达与生物膜形成的相关性及其对agr系统的活化作用。方法采用微量板半定量法检测表皮葡萄球菌生物膜表型,二维电泳和高灵敏度的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析比较表皮葡萄球菌标准株蛋白质表达谱,实时定量逆转录PCR检测trap基因和RNAⅢ的转录水平,CLUSTAL X对表皮葡萄球菌trap基因与金黄色葡萄球菌序列进行分析,Mega软件构建进化树。结果比较分析形成生物膜的表皮葡萄球菌ATCC 35984株与不形成生物膜的ATCC 12228株生长中期的蛋白质组,发现ATCC 35984株的TRAP蛋白量明显高于ATCC 12228株。转录水平的检测显示ATCC 12228株和生物膜阳性临床SE1457、SE671株的trap基因均低转录,但RNAⅢ的转录水平未降低。SE1457株agr系统突变后,RNAⅢ的转录明显降低,trap基因的转录无变化。RNAⅢ的转录随细菌生长变化而增加,trap基因转录保持不变。trap序列分析显示其在表皮葡萄球菌与金黄色葡萄球菌中较为保守,但存在明显的进化距离。结论在本论文所研究的表皮葡萄球菌菌株中,trap基因的转录和翻译与细菌生物膜的形成不存在直接的调控相关性;并提示TRAP蛋白不是表皮葡萄球菌agr系统活化所必需的细菌产物;表皮葡萄球菌trap基因序列与金黄色葡萄球菌之间存在差异,可能与其功能差异相关。 展开更多
关键词 表皮葡萄球菌 trap基因 附属基因调节系统 RNAⅢ 生物膜
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同源重组构建表皮葡萄球菌附属基因调节子(agr)阴性突变株(摘要)
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作者 李敏 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期46-46,共1页
目的构建表皮葡萄球菌agr阴性突变株,以期得到除agr基因以外相同遗传背景的突变株与野生株。方法首先构建同源重组质粒pBT2-Δagr,后电传入金黄色葡萄球菌RN4220,再转入表皮葡萄球菌3298。通过pBT2载体对温度敏感的特点,含重组质粒... 目的构建表皮葡萄球菌agr阴性突变株,以期得到除agr基因以外相同遗传背景的突变株与野生株。方法首先构建同源重组质粒pBT2-Δagr,后电传入金黄色葡萄球菌RN4220,再转入表皮葡萄球菌3298。通过pBT2载体对温度敏感的特点,含重组质粒的表皮葡萄球菌3298在40℃多次传代,最终筛选出agr阴性的突变株。结果同源重组质粒pBT2-Δagr通过酶切鉴定证明构建成功, 展开更多
关键词 表皮葡萄球菌 阴性 基因调节 质粒 同源重组 突变株 金黄色葡萄球菌 野生株 酶切 r基因
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SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测脑胶质瘤中RASSF1A mRNA 被引量:3
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作者 高云霞 关明 +4 位作者 苏兵 刘维薇 陈宇明 张万忠 吕元 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期575-578,共4页
目的 建立检测RASSF1A(RASassociationdomainfamily 1ARASSF1A)mRNA的SYBRGreenⅠ实时定量PCR的方法 ,了解脑胶质瘤中RASSF1A的表达水平 ,研究RASSF1AmRNA的表达和肿瘤恶性程度的关系。方法 构建克隆载体作为定量模板 ,RocheLightCycl... 目的 建立检测RASSF1A(RASassociationdomainfamily 1ARASSF1A)mRNA的SYBRGreenⅠ实时定量PCR的方法 ,了解脑胶质瘤中RASSF1A的表达水平 ,研究RASSF1AmRNA的表达和肿瘤恶性程度的关系。方法 构建克隆载体作为定量模板 ,RocheLightCycler 定量检测 4 8例不同恶性程度胶质瘤组织和 6例正常脑组织标本。结果  4 8例脑胶质瘤组织中有 5例未检出RASSF1AmRNA。与内参照三磷酸甘油醛脱氢酶基因GAPDH(glyceraldehycle 3 phosphatedehydrogenase,GAPDH)比较后 ,RASSF1AmRNA的表达范围从 0 .0 8~ 1.0 0 /μg ,均值为 (0 .5 0± 0 .0 0 4 ) /μg。 6例正常脑组织标本均有RASSF1AmRNA的表达 ,范围从 0 .70~ 1.80 /μg ,均值为 (1.0 5± 0 .0 8) /μg。各期胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织 ,但胶质瘤不同病理级别组之间的差异无显著意义。结论 胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织。成功地建立了SYBRGreenⅠ实时定量检测RASSF1A基因表达方法 ,为研究RASSF1A表达水平下调的机制、表达水平和肿瘤的恶性程度、转移。 展开更多
关键词 RNA 正常 脑胶质瘤 表达水平 脑组织 实时定量PCR SYBR GAPDH 克隆载体 标本
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反义血管内皮细胞生长因子抑制裸鼠异体接种前列腺癌的生长和转移 被引量:1
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作者 苏伟 王起印 关明 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期583-585,610,i0004,共5页
目的用反义血管内皮细胞生长因子(VEGF)转染前列腺癌LNCaPC42细胞,从体外和体内研究抑制细胞内VEGF的表达后对肿瘤生长、侵袭等生物学行为的影响。方法用3(4,5二甲基噻唑2)2,5二苯基四氮唑盐(MTT)方法测定体外反义VEGF转染的肿瘤细胞增... 目的用反义血管内皮细胞生长因子(VEGF)转染前列腺癌LNCaPC42细胞,从体外和体内研究抑制细胞内VEGF的表达后对肿瘤生长、侵袭等生物学行为的影响。方法用3(4,5二甲基噻唑2)2,5二苯基四氮唑盐(MTT)方法测定体外反义VEGF转染的肿瘤细胞增殖。在体内分析,反义VEGF转染的肿瘤细胞皮下注射入裸鼠。根据公式体积=0.52×(宽)2×(长),计算肿瘤体积[13],以此绘制肿瘤生长曲线。用小鼠抗人CD31单克隆抗体经免疫组化检测肿瘤微血管密度。苏木精伊红(HE)染色检测肺转移结节。结果体外研究显示,反义VEGF显著抑制前列腺癌LNCaPC42细胞的增殖;与对照细胞比较发现,反义VEGF转染的细胞在裸鼠皮下致瘤能力减弱,肿瘤生长明显减慢;肿瘤微血管密度明显降低[(31±3.25):(14.25±3.40),P<0.05],且肿瘤肺转移也显著被抑制。结论体内外研究表明,反义VEGF通过抗肿瘤新生血管形成作用可显著抑制前列腺癌的生长和转移。结果提示抑制VEGF表达对前列腺癌治疗具有潜在价值。 展开更多
关键词 前列腺癌 血管内皮细胞生长因子 治疗
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泌尿生殖道副嗜沫嗜血杆菌感染1例
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作者 艾芙琪 阮斐怡 +1 位作者 蒋晓飞 马逸珉 《中国感染控制杂志》 CAS 2005年第1期86-86,共1页
关键词 副嗜沫嗜血杆菌 泌尿生殖道感染
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p16基因启动子CpG区甲基化与人脑胶质瘤临床病理特征的关系 被引量:1
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作者 罗艺 陈坚 吕元 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期477-480,共4页
目的 研究 p16基因启动子CpG区甲基化的改变与脑胶质瘤发生及其临床病理特征的关系。 方法 采用甲基化特异PCR技术 (MSP法 )研究脑胶质瘤组织p16基因甲基化 ,并分析其与临床病理特征的关系。结果  5 6例脑胶质瘤组织中有 10例 (17.9... 目的 研究 p16基因启动子CpG区甲基化的改变与脑胶质瘤发生及其临床病理特征的关系。 方法 采用甲基化特异PCR技术 (MSP法 )研究脑胶质瘤组织p16基因甲基化 ,并分析其与临床病理特征的关系。结果  5 6例脑胶质瘤组织中有 10例 (17.9% )呈 p16CpG区甲基化阳性。胶质瘤的 p16CpG区甲基化与性别、年龄无关 ,而与肿瘤级别、浸润与否有关。有浸润的脑胶质瘤 p16CpG区甲基化明显高于暂无浸润者。p16CpG区甲基化也多发生于Ⅲ级、Ⅳ级 (即肿瘤恶性程度高 )的病例。 展开更多
关键词 甲基化 人脑胶质瘤 临床病理特征 P16基因 瘤组织 肿瘤 启动子 PCR技术 影响因子
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p16基因异常甲基化与人类肿瘤发病的关系
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作者 罗艺 庞烈文 吕元 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期213-214,共2页
关键词 P16基因 异常甲基化 肿瘤 细胞增殖
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