目的通过软骨细胞体外固态培养研究机械压力和维拉帕米对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞释放单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的影响。方法选择12例膝OA患者行膝关节置换后的胫骨平台软骨,分离软骨细胞...目的通过软骨细胞体外固态培养研究机械压力和维拉帕米对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞释放单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的影响。方法选择12例膝OA患者行膝关节置换后的胫骨平台软骨,分离软骨细胞并扩增,分别加入到低熔点琼脂糖培养基中进行固态培养,制作成软骨细胞-琼脂糖凝胶三维模型。随机分为维拉帕米组(40μmol/L)和空白对照组,每组6例。在15、30、45 kPa的压力下,对照组分别施压0.5、1、2 h,实验组仅施压2h。两组施压后均继续培养24 h,收集模型周围上清液,采用ELISA法检测上清液中MCP-1的浓度,对数据进行析因分析。结果随着机械压力增加和施压时间延长,细胞培养液中MCP-1浓度无显著变化(P=0.88,0.31)。与空白对照组比较,维拉帕米组的MCP-1浓度显著降低(P=0.05)。结论维拉帕米可抑制三维固态培养的OA软骨细胞释放MCP-1,可能为维拉帕米应用于OA的治疗提供理论依据。展开更多
目的通过信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化抑制剂Stattic的应用,探讨STAT3磷酸化在白塞病(Behcet’s disease,BD)发病机制中的作用及其与BD活动的关系。方法采集BD活动期(BD-A...目的通过信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化抑制剂Stattic的应用,探讨STAT3磷酸化在白塞病(Behcet’s disease,BD)发病机制中的作用及其与BD活动的关系。方法采集BD活动期(BD-A)、BD缓解期(BD-R)患者各10例和健康对照(HC)10例的外周血各15 mL,分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。将各组PBMC分为Stattic抑制剂亚组和空白对照亚组。Stattic抑制剂亚组中加入Stattic 2.5μmol/L和1 640培养基共5 mL,空白对照亚组仅加1 640培养基5 mL。使用Western blot和流式细胞术检测PBMC中STAT3及其磷酸化(pSTAT3)蛋白质水平;ELISA和RT-PCR分别检测TNF-α、IFN-γ、IL-17蛋白质和mRNA水平。采用双因素方差分析和Bonferroni post hoc test事后检验分析各项检测结果。结果与健康对照比较,BD患者pSTAT3、STAT3蛋白质水平,TNF-α、IFN-γ、IL-17蛋白质和mRNA水平均升高;与空白对照亚组比较,Stattic抑制剂亚组pSTAT3、STAT3蛋白质水平,TNF-α、IFN-γ、IL-17蛋白质和mRNA水平均降低。BD活动期pSTAT3蛋白质水平,TNF-α、IFN-γ和IL-17蛋白质和mRNA水平均显著高于BD缓解期。结论 STAT3通路激活可能通过介导BD患者TH1、TH17活化而与BD活动性相关。展开更多
