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超抗原SEB活化耐受性NKT细胞亚群的研究 被引量:7
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作者 陈钰 钟江 +4 位作者 徐健 陈中才 郭业磊 金婷 张继慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期943-946,共4页
目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征。方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导,收集体外扩增10d的淋巴细胞为效应细胞,与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3d,测定效应细胞对刺激... 目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征。方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导,收集体外扩增10d的淋巴细胞为效应细胞,与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3d,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力。在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加效应细胞,3d后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激原的应答反应能力。用MTT染色方法记录细胞增殖的A值。以ConA活化的淋巴细胞做参照,用流式细胞术(FCM)解析了耐受性效应细胞中NKT细胞亚群并显示分化来源与功能的相关性。结果:与正常淋巴细胞对抗原应答反应能力相比,SEB活化的效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低,细胞生长的A值从正常组的0.80±0.04、0.60±0.03和0.55±0.07下降到0.60±0.05、0.30±0.05及0.27±0.04(P<0.01,n=3)。效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述抗原的应答反应,尤其抑制ConA活化的T淋巴细胞的应答反应;A值分别由正常值降低到0.26±0.002、0.48±0.04及0.34±0.02(P<0.01,n=3)。效应细胞中CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+/NK1.1+NKT细胞亚群显著增加(P<0.05和P<0.01,n=4)。ConA活化的淋巴细胞是T淋巴细胞并包括CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞。结论:超抗原SEB活化的耐受功能与CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+NK1.1+NKT细胞亚群有关,它们由T细胞分化而来。CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞没有参与耐受性调节。 展开更多
关键词 NKT细胞亚群 超抗原 SEB 免疫耐受
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超抗原SEB活化的NKT细胞亚群形态和分化途径的研究 被引量:4
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作者 陈钰 郭业磊 钟江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期596-599,共4页
目的:以NKT细胞形态和分化途径为焦点,研究超抗原SEB活化的NKT细胞亚群的特征。方法:C57BL/J小鼠脾细胞分别经SEB或者ConA诱导,收集体外扩增10d和5d的淋巴细胞以及获取正常黏附性巨噬细胞。用荧光抗体染色,流式细胞仪测定淋巴细胞和大... 目的:以NKT细胞形态和分化途径为焦点,研究超抗原SEB活化的NKT细胞亚群的特征。方法:C57BL/J小鼠脾细胞分别经SEB或者ConA诱导,收集体外扩增10d和5d的淋巴细胞以及获取正常黏附性巨噬细胞。用荧光抗体染色,流式细胞仪测定淋巴细胞和大淋巴细胞群表面CD69的表达、NKT细胞亚群百分数和不同NKT细胞亚群的分化途径。倒置显微镜400倍下比较大淋巴细胞的形态。结果:SEB活化的淋巴细胞和大淋巴细胞表面CD69分子表达由正常值的0.11%分别提高到55.00%和68.95%。大细胞群中CD8+和TCRVB8+NKT细胞亚群的百分数由原始的0.36%和0.81%分别提高到30.29%和31.48%。这些细胞位于流式细胞图的上部,是大体积细胞群。显微镜下显示SEB活化的大淋巴细胞体积不仅大于ConA活化的T淋巴细胞,而且比正常巨噬细胞大5倍以上,是非黏附性细胞。胞内质粒松散、胞质与核之比>1。SEB活化的CD8+和TCRVβ8+NKT细胞亚群均由T细胞直接分化而来。结论:SEB活化10d的NKT细胞亚群主要是CD8+NK1.1+和TCRVβ8+NK1.1+的NKT细胞。这些细胞是大体积淋巴细胞,应属于T细胞的亚群。 展开更多
关键词 NKT细胞亚群 超抗原 细胞形态 细胞分化
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体外活化CD8^+ NKT细胞的肿瘤杀伤作用 被引量:2
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作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期947-949,共3页
目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的耐受调节性CD8+ NKT细胞对肿瘤细胞K562和A549的杀伤作用。方法:获取体外扩增0、10、20、30 d的耐受调节性效应细胞与K562和A549肿瘤细胞做混合淋巴细胞培养,MTT方法测定效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。... 目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的耐受调节性CD8+ NKT细胞对肿瘤细胞K562和A549的杀伤作用。方法:获取体外扩增0、10、20、30 d的耐受调节性效应细胞与K562和A549肿瘤细胞做混合淋巴细胞培养,MTT方法测定效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。经荧光抗体染色、流式细胞术(FCM)解析效应细胞表面CD69分子的表达率和NKT细胞亚群百分数。结果:在效靶比20∶1时,效应细胞杀伤K562和A549细胞的百分率分别达到75.4%和67.2%(P<0.05,n=3)。效应细胞的上清液未显示杀伤作用。效应细胞表面CD69分子的表达率随培养时间延长而增加,由0 d的0.11%增加到30 d的98.23%(P<0.01,n=3)。效应细胞中CD8+ NKT细胞亚群随扩增时间延长而增加,由正常值(0 d)的0.36%增加到30 d的41.59%(P<0.05,n=3)。结论:耐受调节性CD8+ NKT细胞在杀伤肿瘤细胞中起了重要作用。杀伤肿瘤细胞的作用机制是效应细胞的直接作用,与游离的细胞因子无关。 展开更多
关键词 CD8+ NKT细胞 超抗原 SEB 肿瘤免疫
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耐受性CD8^+ NKT细胞体外增殖能力的鉴定
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作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期170-172,共3页
目的:利用CFSE标记细胞,流式细胞术(FCM)检测法,解析超抗原SEB活化的耐受性CD8+ NKT细胞在体外增殖的情况。方法:利用CFSE标记新鲜分离的C57BL/J鼠脾细胞,分别与ConA和LPS共同培养3d,收集细胞进行荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69分子... 目的:利用CFSE标记细胞,流式细胞术(FCM)检测法,解析超抗原SEB活化的耐受性CD8+ NKT细胞在体外增殖的情况。方法:利用CFSE标记新鲜分离的C57BL/J鼠脾细胞,分别与ConA和LPS共同培养3d,收集细胞进行荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69分子的表达率和增殖能力。CFSE标记的鼠脾细胞与SEB共培养5d和10d后,荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69的百分数和增殖能力。SEB活化的第10天细胞经CFSE标记后在IL-2的协同作用下继续培养10d,荧光染色,FCM解析这群细胞的增殖能力、活性分子CD69的表达率和NKT细胞亚群的变化情况。结果:ConA、LPS和SEB三者均可以刺激小鼠脾细胞增殖。ConA和LPS在3d内可以使细胞增殖3代,且CD69的表达率为74.19%和41.56%;SEB在5d和10d内分别可以使细胞增殖5代和7代,细胞表面CD69的表达率为32.09%和48.66%。SEB活化的10d细胞可以在IL-2的协同下继续传代培养10d,可以增殖7代;这群细胞中CD8+ NKT细胞亚群,由原始的0.36%增加到38.58%;细胞表面CD69分子由正常值的0.11%提高到83.74%。结论:超抗原SEB活化的CD8+ NKT细胞可以在体外进行增殖培养,且这些细胞是活性化的细胞。利用CFSE标记细胞,FCM可以检测耐受性CD8+ NKT细胞在体外的增殖水平。 展开更多
关键词 CD8+ NKT细胞 超抗原 SEB 流式细胞术 CFSE
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耐受调节性CD8^+NKT细胞体外稳定性的研究
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作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期852-855,共4页
目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性。方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究。以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共... 目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性。方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究。以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共同培养72 h,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力。在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加各效应细胞,72 h后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力。体外扩增和冻存的效应细胞与异源鼠脾细胞做混合淋巴细胞培养,MTT法测定细胞的增殖情况。效应细胞用荧光抗体染色,用流式细胞术(FCM)解析NKT细胞亚群。结果:与正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力相比,体外扩增10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞对ConA或LPS的应答反应能力明显降低,细胞增殖的A值分别由正常值0.67和0.61分别下降至0.30和0.31,0.28和0.20,0.26和0.24,以及0.22和0.23(P<0.05,n=3)。效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述刺激剂ConA或LPS的应答反应,分别由正常值0.67和0.61下降至0.33和0.39,0.30和0.43,0.36和0.43,以及0.26和0.29(P<0.05,n=3)。效应细胞与异源鼠脾细胞反应与对照组相比明显的降低,分别由正常值0.70下降至20 d的0.42,30 d的0.42以及冻存效应细胞的0.54(P<0.05,n=3)。在这群效应细胞中,主要是CD8+NKT细胞,由原始的0.36%增加到41.59%(P<0.05,n=3)。结论:耐受调节性CD8+NKT细胞可以在体外进行传代培养,并且这些传代培养细胞的耐受调节功能依然存在。 展开更多
关键词 CD8+NKT细胞 免疫耐受 超抗原 SEB
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