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PKB的PH结构域在原核表达及其纯化和活性
1
作者
施冬云
魏廉
+3 位作者
黄伟达
刘珊林
徐伯赢
申宗侯
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期423-427,共5页
目的 利用原核系统表达原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶B(PKB)的PH结构域 ,为进一步研究其结构和功能奠定基础。方法 我们构建了PKB的PH结构域的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达出PH结构域 ,并利用蛋白N端加入的组氨酸标签进行亲和层析及离子交...
目的 利用原核系统表达原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶B(PKB)的PH结构域 ,为进一步研究其结构和功能奠定基础。方法 我们构建了PKB的PH结构域的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达出PH结构域 ,并利用蛋白N端加入的组氨酸标签进行亲和层析及离子交换层析纯化蛋白。结果 在大肠杆菌中表达的PH结构域以包涵体形式存在 ,经变性和复性后成为具有天然构象的可溶性蛋白 ,经亲和层析和离子交换层析纯化的PH结构域具有与磷脂酰肌醇PI 4 ,5 P2 的结合能力 ,证明其具有生物学活性。结论 本方法成功表达纯化了PKB的PH结构域 ,可用作PH结构域结构和功能的进一步研究。
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关键词
丝苏氨酸蛋白激酶B
PH结构域
原核表达
蛋白纯化
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职称材料
吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的色胺酮类抑制剂筛选及其体外抗肿瘤作用
被引量：
5
2
作者
杨双双
杜丽莎
+1 位作者
李豪男
杨青
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期149-155,共7页
目的评价色胺酮衍生物吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的抑制活性,并研究其作为IDO抑制剂的抗肿瘤作用。方法采用基因工程手段表达、纯化重组人IDO(rhIDO),建立IDO活性检测体系;以色胺酮衍生物作为对象,进行IDO抑...
目的评价色胺酮衍生物吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的抑制活性,并研究其作为IDO抑制剂的抗肿瘤作用。方法采用基因工程手段表达、纯化重组人IDO(rhIDO),建立IDO活性检测体系;以色胺酮衍生物作为对象,进行IDO抑制活性初筛,对抑制类型、半数抑制浓度以及抑制常数进行测定;构建高表达人IDO的pcDNA3.1(+)-hIDO转染HEK 293细胞,评价色胺酮衍生物在细胞水平上的IDO抑制活性;采用MTT比色法考察色胺酮衍生物3对人非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制作用。结果 6个被测色胺酮衍生物均具有IDO抑制活性,且细胞水平上的抑制效力高于酶活水平,抑制效力均优于目前通用的IDO抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)。色胺酮衍生物3作为最强的IDO抑制剂,其Ki值为0.161μmol/L。MTT实验结果显示,色胺酮衍生物3显著抑制A549细胞生长,IC50为8.77μmol/L。结论色胺酮衍生物是一类新型高效的IDO抑制剂,在体外对A549细胞具有较强的抗肿瘤活性。
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关键词
活性检测
色胺酮衍生物
吲哚胺2
3-双加氧酶(IDO)
抗肿瘤作用
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职称材料
题名
PKB的PH结构域在原核表达及其纯化和活性
1
作者
施冬云
魏廉
黄伟达
刘珊林
徐伯赢
申宗侯
机构
复旦大学
医
学院
生化
与分子生物学
系
复旦大学生命科学学院生化系
出处
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期423-427,共5页
基金
上海市教委重点科研项目 (B990 80 6 )
上海市自然科学基金 ( 0 2ZB14 0 19)资助
文摘
目的 利用原核系统表达原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶B(PKB)的PH结构域 ,为进一步研究其结构和功能奠定基础。方法 我们构建了PKB的PH结构域的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达出PH结构域 ,并利用蛋白N端加入的组氨酸标签进行亲和层析及离子交换层析纯化蛋白。结果 在大肠杆菌中表达的PH结构域以包涵体形式存在 ,经变性和复性后成为具有天然构象的可溶性蛋白 ,经亲和层析和离子交换层析纯化的PH结构域具有与磷脂酰肌醇PI 4 ,5 P2 的结合能力 ,证明其具有生物学活性。结论 本方法成功表达纯化了PKB的PH结构域 ,可用作PH结构域结构和功能的进一步研究。
关键词
丝苏氨酸蛋白激酶B
PH结构域
原核表达
蛋白纯化
Keywords
Bioassay
Escherichia coli
Ion exchange
pH
Purification
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的色胺酮类抑制剂筛选及其体外抗肿瘤作用
被引量：
5
2
作者
杨双双
杜丽莎
李豪男
杨青
机构
复旦大学生命科学学院生化系
金日成综合
大学
生命科学
系
平壤
出处
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期149-155,共7页
基金
国家自然科学基金(30873153)~~
文摘
目的评价色胺酮衍生物吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的抑制活性,并研究其作为IDO抑制剂的抗肿瘤作用。方法采用基因工程手段表达、纯化重组人IDO(rhIDO),建立IDO活性检测体系;以色胺酮衍生物作为对象,进行IDO抑制活性初筛,对抑制类型、半数抑制浓度以及抑制常数进行测定;构建高表达人IDO的pcDNA3.1(+)-hIDO转染HEK 293细胞,评价色胺酮衍生物在细胞水平上的IDO抑制活性;采用MTT比色法考察色胺酮衍生物3对人非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制作用。结果 6个被测色胺酮衍生物均具有IDO抑制活性,且细胞水平上的抑制效力高于酶活水平,抑制效力均优于目前通用的IDO抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)。色胺酮衍生物3作为最强的IDO抑制剂,其Ki值为0.161μmol/L。MTT实验结果显示,色胺酮衍生物3显著抑制A549细胞生长,IC50为8.77μmol/L。结论色胺酮衍生物是一类新型高效的IDO抑制剂,在体外对A549细胞具有较强的抗肿瘤活性。
关键词
活性检测
色胺酮衍生物
吲哚胺2
3-双加氧酶(IDO)
抗肿瘤作用
Keywords
activity assay
tryptanthrin derivatives
indoleamine 2,3-dioxygenase （IDO）
antitumor activity
分类号
Q331 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PKB的PH结构域在原核表达及其纯化和活性
施冬云
魏廉
黄伟达
刘珊林
徐伯赢
申宗侯
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2002
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的色胺酮类抑制剂筛选及其体外抗肿瘤作用
杨双双
杜丽莎
李豪男
杨青
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014
5
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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