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一种高效的葡萄球菌基因敲除方法的建立与应用
被引量：
1
1
作者
朱涛
段芹
+1 位作者
李朝品
瞿涤
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期1098-1102,共5页
目的建立一种高效构建葡萄球菌基因敲除突变株的方法。方法通过融合PCR将vraSR操纵子上、下游同源片段连接起来;通过基于位点特异性重组的Gateway克隆技术将融合PCR产物连接入温度敏感型穿梭质粒pKOR1,转化修饰缺陷型大肠杆菌DC10B,获...
目的建立一种高效构建葡萄球菌基因敲除突变株的方法。方法通过融合PCR将vraSR操纵子上、下游同源片段连接起来;通过基于位点特异性重组的Gateway克隆技术将融合PCR产物连接入温度敏感型穿梭质粒pKOR1,转化修饰缺陷型大肠杆菌DC10B,获得同源重组质粒pKOR1-vraSR;电转化表皮葡萄球菌RP62A株;在高温和氯霉素双重选择压力下,质粒通过第1次同源重组整合到表皮葡萄球菌染色体上;转移到无抗生素的培养基中继续培养,发生第2次同源重组;将菌液涂布于含1μg/mL脱水四环素的培养基上进行反向筛选,那些未发生重组的整合菌株因表达必需基因secY的反义RNA而无法生存,最后,挑取菌落通过PCR进行鉴定。结果成功构建了难以转化的表皮葡萄球菌RP62A株的vraSR基因敲除突变株。结论利用大肠杆菌DC10B和穿梭质粒pKOR1对葡萄球菌进行基因敲除的方法简便高效,适用的范围更广泛。
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关键词
基因敲除
葡萄球菌
反向选择
限制修饰系统
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职称材料
题名
一种高效的葡萄球菌基因敲除方法的建立与应用
被引量：
1
1
作者
朱涛
段芹
李朝品
瞿涤
机构
皖南
医学
院
医学
寄生虫学教研室
皖南
医学
院口腔
医学
院
复旦大学教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期1098-1102,共5页
基金
教育部医学分子病毒学重点实验室开放课题(No.201406)
安徽省重点实验室自助研究课题(No.LAB201408)
+1 种基金
安徽省教育厅自然科学研究重点项目(No.KJ2015A218)
省级大学生创新创业训练计划(No.AH201310368111)~~
文摘
目的建立一种高效构建葡萄球菌基因敲除突变株的方法。方法通过融合PCR将vraSR操纵子上、下游同源片段连接起来;通过基于位点特异性重组的Gateway克隆技术将融合PCR产物连接入温度敏感型穿梭质粒pKOR1,转化修饰缺陷型大肠杆菌DC10B,获得同源重组质粒pKOR1-vraSR;电转化表皮葡萄球菌RP62A株;在高温和氯霉素双重选择压力下,质粒通过第1次同源重组整合到表皮葡萄球菌染色体上;转移到无抗生素的培养基中继续培养,发生第2次同源重组;将菌液涂布于含1μg/mL脱水四环素的培养基上进行反向筛选,那些未发生重组的整合菌株因表达必需基因secY的反义RNA而无法生存,最后,挑取菌落通过PCR进行鉴定。结果成功构建了难以转化的表皮葡萄球菌RP62A株的vraSR基因敲除突变株。结论利用大肠杆菌DC10B和穿梭质粒pKOR1对葡萄球菌进行基因敲除的方法简便高效,适用的范围更广泛。
关键词
基因敲除
葡萄球菌
反向选择
限制修饰系统
Keywords
gene knockout
Staphylococci
counter selection
restriction modification system
分类号
R378.11 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种高效的葡萄球菌基因敲除方法的建立与应用
朱涛
段芹
李朝品
瞿涤
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
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