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人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定: 1; 作者窦金民郭莉莉 +4 位作者刘宏磊陈接根黄海燕宋后燕汤其群《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期419-422,426,共5页; 目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋... 展开更多; 关键词人睫状神经营养因子生物活性鉴定纯化克隆 WESTERN印迹背根神经节神经元大肠埃希菌 CNTF 原核表达载体重组表达质粒离子交换层析重组蛋白生物学活性 PCR方法神经元细胞结构基因实验观察细胞存活菌体蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性: 2; 作者张宇清侯敏 +3 位作者王霞孙兴会李平朱运松《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期313-316,共4页; 目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细... 展开更多; 关键词 PAI-2 突变体 TNF-Α 肿瘤坏死因子-Α 细胞凋亡纤溶酶原激活剂抑制物2型; 在线阅读下载PDF 职称材料

PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性: 3; 作者张宇清侯敏 +3 位作者王霞孙兴会李平朱运松《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期531-533,536,共4页; 目的为了进一步了解纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在细胞内的定位对其抗凋亡活性的影响。方法构建绿色荧光蛋白质(EGFP)与PAI-2入核突变体融合蛋白质的表达质粒;转染HeLa细胞,荧光显微镜下比较野生型PAI-2与PAI-2的入核突变体在HeL... 展开更多; 关键词 PAI-2 抗凋亡活性纤溶酶原激活剂抑制物2型肿瘤坏死因子-Α 细胞凋亡; 在线阅读下载PDF 职称材料

肺癌细胞高、低转移株中uPA基因启动子的序列和活性被引量：1: 4; 作者王丽石李平 +1 位作者谭理朱运松《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期243-246,共4页; 目的　分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法　用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basi... 展开更多; 关键词肺癌转移株 UPA基因启动子序列活性癌细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架被引量：1: 5; 作者钟贞杨健 +3 位作者李平谭理应其龙宋后燕《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期335-339,共5页; 目的探索胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞,并用于构建内皮化血管支架,为临床心血管疾病治疗提供实验基础。方法采用改良后单层分化体系,血管内皮生长因子(VEGF)作为独立诱导因子定向诱导胚胎干细胞分化为血管内皮细胞,用RT-PCR法检测... 展开更多; 关键词胚胎干细胞分化内皮化血管支架; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定: 1; 作者窦金民郭莉莉刘宏磊陈接根黄海燕宋后燕汤其群; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期419-422,426,共5页; 文摘目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。; 关键词人睫状神经营养因子生物活性鉴定纯化克隆 WESTERN印迹背根神经节神经元大肠埃希菌 CNTF 原核表达载体重组表达质粒离子交换层析重组蛋白生物学活性 PCR方法神经元细胞结构基因实验观察细胞存活菌体蛋白; Keywords human ciliary neurotrophic factor recombinant protein expression and purification dorsal root ganglion; 分类号 R394.8 [医药卫生—医学遗传学] R927 [医药卫生—药学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性: 2; 作者张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期313-316,共4页; 基金国家自然科学基金(30070412)资助项目; 文摘目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株。用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化。结果突变体PAI-2M能抑制TNF-α诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能。PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2D CD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化。结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73～76)无关。; 关键词 PAI-2 突变体 TNF-Α 肿瘤坏死因子-Α 细胞凋亡纤溶酶原激活剂抑制物2型; Keywords Cells Cloning Computer aided analysis; 分类号 Q513.2 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性: 3; 作者张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期531-533,536,共4页; 基金国家自然科学基金(30070412)资助项目; 文摘目的为了进一步了解纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在细胞内的定位对其抗凋亡活性的影响。方法构建绿色荧光蛋白质(EGFP)与PAI-2入核突变体融合蛋白质的表达质粒;转染HeLa细胞,荧光显微镜下比较野生型PAI-2与PAI-2的入核突变体在HeLa细胞内分布的差异;用MTT法检测PAI-2入核突变体抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡的活性。结果在核定位序列的引导下,几乎所有的PAI-2都进入了细胞核,而野生型PAI-2则弥散分布于HeLa细胞内。MTT法检测发现,当PAI-2被定位于细胞核内时,丧失其抗凋亡的功能。结论 PAI-2在细胞内的定位能影响其抗凋亡的活性,并且当用TNF-α诱导HeLa细胞凋亡时,野生型PAI-2在细胞内的分布没有发生明显的改变。; 关键词 PAI-2 抗凋亡活性纤溶酶原激活剂抑制物2型肿瘤坏死因子-Α 细胞凋亡; Keywords Assays Cells Cloning DNA Microscopic examination; 分类号 Q55 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名肺癌细胞高、低转移株中uPA基因启动子的序列和活性被引量：1: 4; 作者王丽石李平谭理朱运松; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期243-246,共4页; 基金国家自然科学基金 ( 3 0 170 3 98)资助项目; 文摘目的　分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法　用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basic载体上 ,转染 95D或 95C细胞 ,分析启动子活性。结果　 95D与 95C细胞uPA基因启动子序列中有 3个位点碱基的差别 ,95D分别是 - 1933bp为“T” ,- 4 2 4bp为“C” ,- 96bp为“G” ,而 95C分别为“C”、“T”、“T”。这些不同对启动子活性的影响未见差别。在 - 2 14 3/ - 182 4之间存在uPA基因启动子的增强子序列 ,在 - 182 4 / - 4 0 8之间存在uPA启动子的负性调控序列。结论　uPA在 95D与 95C细胞中表达的差别不是直接由于启动子序列差别引起的。; 关键词肺癌转移株 UPA基因启动子序列活性癌细胞; Keywords urokinase-type plasminogen activator high and low metastatic human lung cancer cell strains promoter sequence tumor invasion and metastasis; 分类号 R734.2 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架被引量：1: 5; 作者钟贞杨健李平谭理应其龙宋后燕; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室英国爱丁堡大学干细胞研究中心; 出处《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期335-339,共5页; 文摘目的探索胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞,并用于构建内皮化血管支架,为临床心血管疾病治疗提供实验基础。方法采用改良后单层分化体系,血管内皮生长因子(VEGF)作为独立诱导因子定向诱导胚胎干细胞分化为血管内皮细胞,用RT-PCR法检测分化时程各时间点内皮特异性标志的表达,用免疫荧光法检测分化体系中的内皮细胞蛋白标志。将分化成熟的内皮细胞种植于支架表面,构建内皮化血管支架。结果胚胎干细胞全能性分子标志Oct3／4,早期内皮标志Flk-1,Tie-2,PECAM-1,以及成熟内皮标志VE-cadherin在胚胎干细胞分化体系中呈现一定的转录时序性;免疫荧光结果显示分化细胞Flk-1,VE-cadheiin阳性,血管支架被表达VE-cadherin的内皮细胞覆盖。结论我们改良了胚胎干细胞分化为血管内皮细胞的方法,并用于探索内皮化血管支架的构建。; 关键词胚胎干细胞分化内皮化血管支架; Keywords Embryonic stem cell differentiation endothelialization stent; 分类号 R362 [医药卫生—病理学] Q813.7 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定	窦金民郭莉莉刘宏磊陈接根黄海燕宋后燕汤其群	《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2005	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性	张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松	《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2003	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性	张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松	《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2003	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	肺癌细胞高、低转移株中uPA基因启动子的序列和活性	王丽石李平谭理朱运松	《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2004	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架	钟贞杨健李平谭理应其龙宋后燕	《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2007	1	在线阅读下载PDF 职称材料