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系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析
被引量：
3
1
作者
周志刚
朱美华
+8 位作者
梁中锟
陈振瑞
贺微
李长征
谭万龙
姜世勃
刘叔文
周烨
周辰
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期1082-1087,共6页
目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链...
目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,将抗体基因库转染293T细胞,流式细胞仪分析抗体在293T细胞表面的表达。结果以0.8μg总RNA为模板,用6套引物成功扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,构建获得的重链基因库容量为9.4×104,轻链基因库容量为8.4×104。随机挑选的10个重链克隆有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,10个轻链克隆7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析挑选的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在293T细胞表面的表达,理论上抗体库中可表达的抗体多样性可以达到109。结论以0.8μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建SLE儿童特异性全长人抗体基因库,并在293T细胞表面成功展示SLE儿童个体抗体库中的全长抗体,为进一步研究SLE儿童自身抗体的特点及自身抗体在SLE发病机制中的作用及临床应用打下良好基础。
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关键词
系统性红斑狼疮
儿童
哺乳动物细胞表面展示
全长人源抗体库
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职称材料
题名
系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析
被引量：
3
1
作者
周志刚
朱美华
梁中锟
陈振瑞
贺微
李长征
谭万龙
姜世勃
刘叔文
周烨
周辰
机构
广州
医学院
第二附属医院儿科
南方医科
大学
南方医院
南方医科
大学
药
学院
南方医科
大学
中医药
学院
复旦大学上海医学院分子病毒学教育部//卫生部重点实验室
南方医科
大学
基因工程研究所
香港Dgen生物技术有限公司
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期1082-1087,共6页
基金
国家自然科学基金(31100661)
香港Dgen Biotech Ltd科研基金(DGB12012008)
+2 种基金
十二五科技重大专项(2011ZX09506-004)
高等学校博士学科点专项科研基金(20114433120019)
广东省自然科学基金(S2011040002748)~~
文摘
目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,将抗体基因库转染293T细胞,流式细胞仪分析抗体在293T细胞表面的表达。结果以0.8μg总RNA为模板,用6套引物成功扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,构建获得的重链基因库容量为9.4×104,轻链基因库容量为8.4×104。随机挑选的10个重链克隆有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,10个轻链克隆7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析挑选的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在293T细胞表面的表达,理论上抗体库中可表达的抗体多样性可以达到109。结论以0.8μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建SLE儿童特异性全长人抗体基因库,并在293T细胞表面成功展示SLE儿童个体抗体库中的全长抗体,为进一步研究SLE儿童自身抗体的特点及自身抗体在SLE发病机制中的作用及临床应用打下良好基础。
关键词
系统性红斑狼疮
儿童
哺乳动物细胞表面展示
全长人源抗体库
Keywords
systemic lupus erythematosus
children
mammalian display
full-length fully human antibody library
分类号
R725.9 [医药卫生—儿科]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析
周志刚
朱美华
梁中锟
陈振瑞
贺微
李长征
谭万龙
姜世勃
刘叔文
周烨
周辰
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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