新的高血压相关基因-Slc7a8的实验研究 被引量：6

1

作者 洪承吕 陈长曦 +4 位作者 杨德业 余祖善 张怀勤 黄晓燕 宋后燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2122-2125,共4页

目的:探讨高血压致病相关基因。方法:提取13周龄SHR和WKY的2、3级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用含10000个基因大鼠表达谱芯片检测2组2、3级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,并用定量RT-PCR的方法排除假阳性候选基因。结果:芯... 目的:探讨高血压致病相关基因。方法:提取13周龄SHR和WKY的2、3级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用含10000个基因大鼠表达谱芯片检测2组2、3级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,并用定量RT-PCR的方法排除假阳性候选基因。结果:芯片发现19个基因在SHR中上调,其中涉及分子伴侣、离子通道和小分子转运、生长因子、细胞信号转导的蛋白和核转录因子、脂蛋白等基因。用定量RT-PCR验证示Slc7a8基因的表达水平在SHR组中比WKY组上调9.3倍。结论:Slc7a8可能与高血压的形成有关,深入研究Slc7a8基因及其功能将为进一步了解高血压病的分子机制提供新的思路和线索。 展开更多

关键词 高血压 基因 Slc7a8 大鼠

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室间隔缺损新的相关基因-蛋白酪氨酸激酶的实验研究 被引量：4

2

作者 杨德业 张怀勤 +2 位作者 黄伟剑 黄晓燕 宋后燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期117-119,共3页

目的 :了解蛋白酪氨酸激酶在心脏发育中的作用 ,探索室间隔缺损的特异相关基因及其信号转导途径。方法 :使用基因芯片 (microarray)的方法筛选ALK3下游基因 ,并用RT -PCR和定量RT -PCR的方法排除假阳性候选基因。结果 :在心脏特异的ALK... 目的 :了解蛋白酪氨酸激酶在心脏发育中的作用 ,探索室间隔缺损的特异相关基因及其信号转导途径。方法 :使用基因芯片 (microarray)的方法筛选ALK3下游基因 ,并用RT -PCR和定量RT -PCR的方法排除假阳性候选基因。结果 :在心脏特异的ALK3基因敲除下 ,11 5d小鼠胚胎心脏中 ,蛋白酪氨酸激酶 (PTK)基因的表达水平比正常对照组高 3 7倍。结论 :蛋白酪氨酸激酶基因是骨形态形成蛋白信号途径的调控因子 ,并与室间隔缺损的形成有关。 展开更多

关键词 室间隔缺损 蛋白质酪氨酸激酶 先天性心脏病 发病机理 骨形态形成蛋白受体IA 蛋白酪氨酸激酶基因

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hand2基因对斑马鱼胚胎发育影响的实验研究 被引量：3

3

作者 孙淑娜 桂永浩 +2 位作者 宋后燕 蒋璆 王跃祥 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期325-329,共5页

目的观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况,验证显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(Morpholi-no oligonucleotides,MO)使hand2表达下调的有效性。观察hand2表达下调后斑马鱼胚胎发育的异常表型,初步探讨hand2在斑马鱼胚胎发育中的作用,为... 目的观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况,验证显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(Morpholi-no oligonucleotides,MO)使hand2表达下调的有效性。观察hand2表达下调后斑马鱼胚胎发育的异常表型,初步探讨hand2在斑马鱼胚胎发育中的作用,为利用斑马鱼开展hand2的功能研究提供线索。方法采用胚胎整体原位杂交的方法观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况。利用向斑马鱼受精卵显微注射MO的方法使hand2表达下调,并进行hand2表达下调的效率验证。将斑马鱼单细胞受精卵分为4组进行显微注射,即对照MO(Con MO)注射组、hand2MO注射组、hand2-GFP mRNA注射组和hand2-GFP mRNA+hand2MO注射组。在荧光显微镜下观察hand2-GFP mRNA注射组和hand2-GFP mRNA+hand2MO注射组的荧光表达情况以验证hand2表达下调的效率。在显微镜下观察hand2MO注射组斑马鱼胚胎的各器官发育情况并进行评定。结果hand2在斑马鱼胚胎的侧板中胚层、咽弓、心脏和鳍有较强表达。hand2-GFP mRNA注射组在8hpf(hours post fertilization)时胚胎有较强的荧光表达,而hand2-GFP mRNA+hand2MO注射组胚胎几乎无荧光表达。与Con MO注射组相比,hand2MO注射组斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节有明显的发育异常。结论向斑马鱼受精卵显微注射hand2MO的方法可有效的使hand2表达下调。hand2在斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节的发育过程中有重要作用。 展开更多

关键词 hand2 斑马鱼 胚胎发育 吗啡啉修饰的反义核苷酸

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胰岛素样生长因子结合蛋白-2参与斑马鱼胚胎心血管系统发育的实验研究

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作者 高珊 王薇 +3 位作者 梁进涛 桂永浩 蒋璆 宋后燕 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期43-51,共9页

目的通过显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸制作斑马鱼IGFBP-2基因表达下调的动物模型,观察IGFBP-2表达下调导致斑马鱼胚胎心脏血管发育的异常表型及其对心脏发育相关基因表达的影响。方法胚胎整体原位杂交验证IGFBP-2基因在斑马鱼胚胎... 目的通过显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸制作斑马鱼IGFBP-2基因表达下调的动物模型,观察IGFBP-2表达下调导致斑马鱼胚胎心脏血管发育的异常表型及其对心脏发育相关基因表达的影响。方法胚胎整体原位杂交验证IGFBP-2基因在斑马鱼胚胎发育早期的时空表达谱。特异抑制IGFBP-2基因启动子的吗啡啉(morpholino,MO)和标准对照吗啡啉(Con-MO)由Gene-Tools公司设计合成。设置0.05、0.10、0.25和1.0 mmol/L 4个不同浓度梯度的IGFBP-2 MO注射组,观察不同注射浓度对斑马鱼胚胎心脏异常表型发生率和死亡率的影响,并与Con-MO注射组以及野生型(Wild type,Wt)对照组比较。详细记录0.25 mmol/L浓度IGFBP-2 MO注射组不同发育时段斑马鱼胚胎心脏发育的异常表型。荧光显微镜下观察IGFBP-2 EGFP重组质粒单独以及与IGFBP-2 MO或Con-MO共注射后12hpf胚胎的绿色荧光表达。原位杂交比较IGFBP-2 MO注射组与Wt组斑马鱼心房标记基因Amhc的表达情况;观察IGFBP-2基因下调的Vmhc-EGFP转基因斑马鱼心室特异性绿色荧光的变化;显微血管荧光造影显示IGFBP-2 MO注射组与Wt组胚胎外周血管发育的差异。结果斑马鱼胚胎早期的发育过程中,IGFBP-2基因在眼球、中脑和肝脏先后表达。0.25 mmol/L浓度MO注射组12hpf存活的胚胎在48hpf有59.6%发生心脏发育的异常表型,包括心管搏动无力、心包水肿和房室环化障碍,部分胚胎发生心房扩大、房室反流伴循环瘀滞,且畸形随发育时间推移加重。接受单独显微注射IGFBP-2EGFP重组质粒和与Con-MO共同注射的Wt胚胎12hpf出现明显的绿色荧光表达,而重组质粒与IGFBP-2MO共同注射的胚胎几乎无荧光表达,证实MO下调斑马鱼胚胎IGFBP-2基因的有效性。48hpf胚胎整体原位杂交显示IGFBP-2 MO注射组心房特异标记基因Amhc的表达下调;48hpf IGFBP-2基因下调的Vmhc-EGFP转基因斑马鱼心室特异绿色荧光蛋白的表达减弱;60hpf IGFBP-2 MO注射组显微血管荧光造影显示体节间血管显影稀疏紊乱。结论显微注射IGFBP-2 MO能够有效实现斑马鱼胚胎的IGFBP-2基因下调。IGFBP-2基因下调导致斑马鱼胚胎心脏血管的异常表型,并抑制心脏发生基因Amhc和Vmhc的表达。IGFBP-2在斑马鱼胚胎心血管系统的正常发育过程中起到重要作用。 展开更多

关键词 IGFBP-2 斑马鱼 胚胎 心血管发育

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尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)基因对小鼠实验性肺气肿的影响及其机制

5

作者 胡华 萧瑶 +1 位作者 陶贤梅 宋后燕 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期7-10,共4页

目的研究尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)基因对小鼠实验性老年性肺气肿样改变的影响及其机制。方法取15d及4月龄野生型小鼠和u-PA基因敲除小鼠肺组织,HE、Weigert弹力纤维染色比较不同基因型小鼠肺组织形态,Image Pro Plus软件分析u-PA... 目的研究尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)基因对小鼠实验性老年性肺气肿样改变的影响及其机制。方法取15d及4月龄野生型小鼠和u-PA基因敲除小鼠肺组织,HE、Weigert弹力纤维染色比较不同基因型小鼠肺组织形态,Image Pro Plus软件分析u-PA基因缺失对肺组织弹力纤维蛋白含量的影响,并采用Real-time PCR检测肺组织间质成份表达水平。结果15d鼠龄u-PA基因缺失小鼠相比野生型(WT)小鼠肺组织形态无明显差异;弹力纤维含量、弹力蛋白基因表达、MMP-12基因表达无显著差异;4月龄u-PA基因缺失小鼠肺泡壁结构较野生型小鼠完整,肺泡腔无明显增大;肺泡弹力纤维含量、肺组织弹力蛋白基因表达及TIMP-1基因的表达显著高于野生型小鼠,MMP-12基因表达也略有增高。结论u-PA基因缺失能够减轻小鼠实验性老年性肺气肿样改变,其分子机制可能是u-PA基因缺失后,弹力蛋白和TIMP-1基因的表达增加,导致肺组织弹力纤维含量增加。 展开更多

关键词 尿激酶型纤溶酶原激活物 实验性肺气肿 老年性肺气肿

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芹菜素改善D-半乳糖衰老模型小鼠衰老指征的研究 被引量：7

6

作者 周鸣鸣 谢焕松 +1 位作者 张洁 张谦 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期452-453,共2页

目的:观察芹菜素对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的影响。方法:建立D-半乳糖致小鼠衰老模型,以Y型电迷宫检测其学习记忆能力．分别采用黄嘌呤氧化酶法、TBA比色法测定大脑超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,观察小鼠服用不同剂量... 目的:观察芹菜素对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的影响。方法:建立D-半乳糖致小鼠衰老模型,以Y型电迷宫检测其学习记忆能力．分别采用黄嘌呤氧化酶法、TBA比色法测定大脑超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,观察小鼠服用不同剂量芹菜素后上述指标的变化。结果:芹菜素低、中、高剂量均可显著提高衰老模型小鼠的学习记忆能力(P<0．05或P<0．01),显著增加D-半乳糖所致衰老模型小鼠大脑SOD活性、降低MDA含量(P<0．05或P<0．01)。结论:芹菜素能改善D-半乳糖所致衰老小鼠的多项体征。 展开更多

关键词 芹菜素 半乳糖 衰老 学习障碍 记忆障碍

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Hippo/YAP和Wnt/β-catenin通路的对话 被引量：12

7

作者 许飞 张进 马端 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期95-102,共8页

Hippo/YAP通路和Wnt/β-catenin通路是在细胞的生长分化、组织器官形成以及成体干细胞的维持等方面都起着重要作用的两条信号通路。在哺乳动物细胞中,Wnt/β-catenin通路通过一系列胞质蛋白的相互作用,使β-catenin蛋白在胞质内累积,进... Hippo/YAP通路和Wnt/β-catenin通路是在细胞的生长分化、组织器官形成以及成体干细胞的维持等方面都起着重要作用的两条信号通路。在哺乳动物细胞中,Wnt/β-catenin通路通过一系列胞质蛋白的相互作用,使β-catenin蛋白在胞质内累积,进而入核传递生长刺激信号。Hippo/YAP通路通过激酶级联反应磷酸化YAP/TAZ,使其滞留在细胞质中,抑制了YAP/TAZ的转录活性,从而限制细胞的生长增殖,诱导细胞凋亡。这两条通路的异常调控往往会导致肿瘤的发生。近年来越来越多的研究证实,Hippo/YAP和Wnt/β-catenin在很多方面相互影响,共同参与组织生长和胚胎发育的调控。研究这两个通路在肿瘤发生过程中的转导和调控以及它们相互作用的机制,有助于为肿瘤的防治提供新的思路与策略。文章对这两条通路的协同作用及其分子机制进行了综述。 展开更多

关键词 HIPPO YAP通路 WNT β-catenin通路 交互作用 肿瘤

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内皮祖细胞在体外培养成血管样结构的初步观察 被引量：10

8

作者 杨德业 张怀勤 +3 位作者 季亢挺 黄晓燕 徐力辛 宋后燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1970-1974,共5页

目的:探索体外培养脐血、外周血内皮祖细胞(EPCs)的方法,观察其形成血管样结构的可能性及条件。方法:采用贴壁选择法培养人脐血及兔外周血内皮祖细胞,光镜下观察细胞形态,用荧光显微镜、流式细胞仪分析贴壁细胞CD34、VEGFR-2、AC133、... 目的:探索体外培养脐血、外周血内皮祖细胞(EPCs)的方法,观察其形成血管样结构的可能性及条件。方法:采用贴壁选择法培养人脐血及兔外周血内皮祖细胞,光镜下观察细胞形态,用荧光显微镜、流式细胞仪分析贴壁细胞CD34、VEGFR-2、AC133、血管内皮钙粘素(VE-cadherin)的表达,D iI-ac-LDL吞噬试验及Ⅷ因子免疫组化证实细胞属性。结果:体外成功培养出人脐血及兔外周血内皮祖细胞,形成条索状、管状结构,兔外周血EPCs分化较成熟,形成典型铺路石形状及血管样结构。结论:脐血、兔外周血内皮祖细胞可在体外培养成功并表现成血管倾向,可能是血管组织工程的潜在资源。 展开更多

关键词 内皮祖细胞 细胞培养 组织工程

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人组织因子在毕赤酵母中的表达和纯化 被引量：4

9

作者 王羽雄 于敏 +1 位作者 顾银良 宋后燕 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期811-814,共4页

目的制备具有凝血活性的重组人组织因子（recombinant tissue factor,r-TF）用于构建PT试剂盒。方法将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastorisGS115,转化子经G41... 目的制备具有凝血活性的重组人组织因子（recombinant tissue factor,r-TF）用于构建PT试剂盒。方法将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastorisGS115,转化子经G418抗性筛选后,获得高表达克隆。工程菌在摇瓶中经甲醇诱导,表达r-TF,表达产物经纯化后,鉴定生物活性。结果SDS-PAGE证实表达产物的分子量为37 000～45 000,Western blot证明其为人组织因子衍生物,纯化后,r-TF经脂化后,具有促凝血活性,为研制凝血活酶时间测定试剂盒及研究TF的构效关系创造条件。结论用毕赤酵母高效表达具有活性的rTF,表达量达到182 mg/L。纯化工艺简便易行,蛋白回收率高,纯化后的rTF可用于组装PT测定试剂盒。 展开更多

关键词 组织因子 外源性凝血 毕赤酵母 凝血酶原时间

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非小细胞肺癌患者化疗前后免疫功能的改变 被引量：3

10

作者 郑惠如 金美玲 +2 位作者 任涛 张镭 储以微 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期696-700,共5页

目的比较非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血CD3+T细胞、CD4+CD25high调节性T细胞(regulatory T cell,Treg cell)、γ-干扰素(interferonγ,IFN-γ)和白介素-12(interleukin-12,IL-12)与健康人的差异,并分析化... 目的比较非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血CD3+T细胞、CD4+CD25high调节性T细胞(regulatory T cell,Treg cell)、γ-干扰素(interferonγ,IFN-γ)和白介素-12(interleukin-12,IL-12)与健康人的差异,并分析化疗前后CD4+CD25highTreg细胞、IFN-γ和IL-12的改变,探讨肺癌患者化疗前后免疫功能的改变。方法选取NSCLC患者20例,健康志愿者20例为对照。分别抽取患者化疗前、化疗后3 d及7 d外周血3 mL,分离其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),以流式细胞仪检测CD3+T细胞比例、CD4+CD25highTreg细胞比例(%),并取上清液检测IFN-γ和IL-12。结果健康组CD3+T细胞比例为(61.52±13.46)%,肺癌组化疗前CD3+T细胞比例为(55.15±20.11)%,化疗后3 d、7 d分别为(57.73±14.08)%和(62.79±7.80)%。肺癌组化疗前与化疗后3 d、7 d比较,差异无统计学意义(P>0.05)。健康组CD4+CD25highTreg细胞的比例为(2.14±0.85)%;肺癌组CD4+CD25highTreg细胞的比例在化疗前为(2.76±0.53)%,较健康人明显升高(P<0.05);肺癌组CD4+CD25highTreg细胞的比例在化疗后3 d7、d分别为(2.54±0.57)%(、2.72±0.29)%,较化疗前减少,而在3 d减少较7 d明显,各组比较,P<0.05。健康组IFN-γ和IL-12分别为(34.36±4.38)和(33.24±4.36)pg/mL;肺癌组IFN-γ和IL-12在化疗前分别为(38.47±5.04)和(34.82±5.30)pg/mL,与健康组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肺癌组IFN-γ在化疗后3 d、7 d分别为(40.42±5.66)和(39.27±6.07)pg/mL,较化疗前有所增加,化疗后3 d和化疗前比较,P<0.05,但化疗后7 d和化疗前比较,P>0.05。肺癌组IL-12在化疗后3 d、7 d分别为(35.51±5.03)和(38.62±6.44)pg/mL,较化疗前有所增加,化疗后3 d和化疗前比较,P>0.05,化疗后7 d和化疗前比较,P<0.05。结论化疗对肺癌患者机体的免疫环境可能具有优化作用,从而增强机体的抗肿瘤免疫应答。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 外周血单核细胞 调节性T细胞 IFN-Γ IL-12

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傅里叶变换红外光谱法研究PLGA微球中葡激酶突变体(K35R)的二级结构 被引量：6

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作者 贺进田 王改珍 宋后燕 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1209-1212,共4页

用复乳溶剂挥发法制备了葡激酶突变体(K35R,DGR)的PLGA微球,并用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)定量研究了PLGA微球内DGR的二级结构。将可增强分辨率的傅里叶去卷积技术与高斯曲线拟合技术共同用于对微球内DGR酰胺Ⅰ带的定量分析,发现DGR... 用复乳溶剂挥发法制备了葡激酶突变体(K35R,DGR)的PLGA微球,并用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)定量研究了PLGA微球内DGR的二级结构。将可增强分辨率的傅里叶去卷积技术与高斯曲线拟合技术共同用于对微球内DGR酰胺Ⅰ带的定量分析,发现DGR酰胺Ⅰ带共包含9个红外吸收峰,并对各组份进行了归属。此外,还对微球内DGR结构稳定性相关的1 623和1 650 cm-1吸收峰进行了讨论。 展开更多

关键词 葡激酶 微球 傅里叶变换红外光谱

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生长激素相关基因突变与原发闭经的关系 被引量：2

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作者 刘学飞 杨真荣 +3 位作者 王慧 周波 陈燕 唐艳平 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期472-474,共3页

目的探讨生长激素相关基因突变与原发闭经的关系。方法对130例确诊为原发闭经的患者和30名健康女性个体进行核型分析,并采用单链构象多态性分析(SSCP)等方法,对原发闭经患者的生长激素释放激素受体基因(GHRHR)进行检测。结果有33例原发... 目的探讨生长激素相关基因突变与原发闭经的关系。方法对130例确诊为原发闭经的患者和30名健康女性个体进行核型分析,并采用单链构象多态性分析(SSCP)等方法,对原发闭经患者的生长激素释放激素受体基因(GHRHR)进行检测。结果有33例原发闭经患者出现染色体核型异常,1例出现GHRHR基因点突变,且该突变位点在第7个外显子中。结论GHRHR基因第7个外显子的点突变可能是原发闭经的病因之一。 展开更多

关键词 原发闭经 单链构象多态性分析 生长激素 生长激素释放激素受体

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二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用 被引量：4

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作者 孙淑娜 桂永浩 +2 位作者 蒋璆 钱林溪 宋后燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第2期127-130,I0006,I0007,共6页

目的观察二氢叶酸还原酶基因(DHFR)功能阻抑斑马鱼胚胎的颅脑部发育情况,初步探讨二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用。方法采用显微注射吗啡啉修饰的反义核苷酸(MO)的方法进行DHFR表达阻抑。胚胎发育至受精后48hpf观... 目的观察二氢叶酸还原酶基因(DHFR)功能阻抑斑马鱼胚胎的颅脑部发育情况,初步探讨二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用。方法采用显微注射吗啡啉修饰的反义核苷酸(MO)的方法进行DHFR表达阻抑。胚胎发育至受精后48hpf观察胚胎的颅部发育情况,在60hpf时经石蜡切片进一步观察胚胎的脑发育状况。利用胚胎整体原位杂交的方法检测影响神经系统发育的关键因子ngn1和huc的表达情况。结果显微注射MO可成功的进行DHFR表达阻抑。DHFR表达阻抑组胚胎存在颅脑部发育明显异常和ngn1、huc的表达强度明显减弱,且与显微注射的MO剂量呈正相关。结论DHFR在斑马鱼颅脑发育中有重要作用;其功能阻抑可导致胚胎颅脑部发育异常,其机理与ngn1和huc的的表达减弱有关。 展开更多

关键词 二氢叶酸还原酶基因 神经系统 斑马鱼

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外源性视黄酸对斑马鱼心血管系统发育的影响 被引量：7

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作者 张立凤 钟涛 桂永浩 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2006年第2期84-88,I0002,I0003,共7页

目的 观察不同浓度外源性视黄酸对斑马鱼早期胚胎和心血管系统发育的影响，为进一步研究视黄酸影响斑马鱼心脏前后轴（A-P轴）发育的分子机制提供形态学依据。方法 选择斑马鱼胚胎孵育的3，6，9．5，12h四个时间点，用不同浓度视黄酸（1... 目的 观察不同浓度外源性视黄酸对斑马鱼早期胚胎和心血管系统发育的影响，为进一步研究视黄酸影响斑马鱼心脏前后轴（A-P轴）发育的分子机制提供形态学依据。方法 选择斑马鱼胚胎孵育的3，6，9．5，12h四个时间点，用不同浓度视黄酸（1×10^-6，1×10^-7，4×10^-8，1×10^-8mol／L）处理斑马鱼胚胎，在解剖显微镜下实时观察斑马鱼胚胎心脏发育的全过程和视黄酸对斑马鱼心脏发育的影响。并采用胚胎整体原位杂交技术观察flk-1mRNA在斑马鱼胚胎的表达。结果 1×10^-6mol／L视黄酸可导致斑马鱼胚胎表现出多系统的严重畸形，胚胎很快死亡。在胚胎孵育的9．5、12h给与10^-7～10^-8mol／L浓度的视黄酸，胚胎只表现出心血管系统的畸形，其他系统无明显异常。胚胎整体原位杂交显示视黄酸对flk-1mRNA在斑马鱼胚胎血管的表达没有影响。结论 视黄酸影响斑马鱼胚胎心脏发育有剂量依赖性和严格的时间窗，视黄酸影响心脏前后轴发育的关键时间是原肠胚晚期。视黄酸处理组胚胎的循环缺陷主要为心脏发育异常所致。10^-7～10^-8mol／L浓度视黄酸在9．5、12h处理斑马鱼胚胎可以作为研究心脏发育调控机制的动物模型。 展开更多

关键词 视黄酸 斑马鱼 心血管系统

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组蛋白赖氨酸甲基化修饰与先天性心脏病研究进展 被引量：6

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作者 盛伟 马端 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期650-655,共6页

组蛋白修饰是表观遗传调控的一个重要组成部分,它通过改变染色质的结构以及与其他调控蛋白相互作用,调节真核基因的表达。组蛋白修饰异常可能导致多种疾病的发生,同时,组蛋白修饰的可逆性为疾病的治疗提供了新的思路。文章主要对组蛋白... 组蛋白修饰是表观遗传调控的一个重要组成部分,它通过改变染色质的结构以及与其他调控蛋白相互作用,调节真核基因的表达。组蛋白修饰异常可能导致多种疾病的发生,同时,组蛋白修饰的可逆性为疾病的治疗提供了新的思路。文章主要对组蛋白赖氨酸甲基化修饰与先天性心脏病发生的有关机制进行了综述,以期能够为从事该领域研究的科研人员提供有价值的参考。 展开更多

关键词 表观遗传调控 组蛋白甲基化 先天性心脏病

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TNF-α和IFN-γ刺激的人脐静脉内皮细胞上IgG受体的表达 被引量：2

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作者 潘銮凤 吴春根 +1 位作者 裴鹏 朱运松 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期683-686,共4页

目的:检测IgG受体(FcγR)在炎症细胞因子刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上的表达。方法:采用ELISA、免疫组化染色法、免疫荧光法和RT-PCR等方法,检测FcγRII及其表达。结果:未经细胞因子刺激的正常HU-VEC可表达低水平的FcγRIIa;经2... 目的:检测IgG受体(FcγR)在炎症细胞因子刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上的表达。方法:采用ELISA、免疫组化染色法、免疫荧光法和RT-PCR等方法,检测FcγRII及其表达。结果:未经细胞因子刺激的正常HU-VEC可表达低水平的FcγRIIa;经2×105U/L TNF-α和1×105U/L IFN-γ联合刺激3d后,FcγRIIa的表达提高16倍(P<0.01)。免疫荧光法检测显示,TNF-α和IFN-γ诱导的FcγRIIa表达于HUVEC表面。RT-PCR结果显示,FcγRIIamRNA表达量在TNF-α和IFN-γ刺激24h后有明显提高。结论:TNF-α和IFN-γ可通过调节FcγRIIa的转录和翻译,增强其在HUVEC上的表达。FcγRIIa的表达可能与血管炎条件下,免疫复合物在血管上的特异性定位有关。 展开更多

关键词 IgG受体 人脐静脉内皮细胞 TNF—α IFN-Γ 表达

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视黄酸缺乏对斑马鱼心脏房室分化的影响 被引量：3

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作者 侯佳 桂永浩 +3 位作者 张立凤 王跃祥 刘东 宋后燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第5期365-368,I0002,共5页

目的通过化学遗传学方法建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,探讨视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏前后轴发育即房室分化的影响。方法在斑马鱼胚胎孵育的5 hpf,用不同浓度梯度的视黄醛脱氢酶2抑制剂DEAB(1×10-6、5×10-6、10×10-6、25... 目的通过化学遗传学方法建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,探讨视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏前后轴发育即房室分化的影响。方法在斑马鱼胚胎孵育的5 hpf,用不同浓度梯度的视黄醛脱氢酶2抑制剂DEAB(1×10-6、5×10-6、10×10-6、25×10-6mol/L)处理斑马鱼胚胎,实时观察斑马鱼胚胎发育的全过程。通过给予斑马鱼胚胎外源性视黄酸,观察其对DEAB的拮抗作用。应用胚胎整体原位杂交观察视黄酸缺乏对心脏特异基因vmhc和amhc表达的影响。结果斑马鱼胚胎的生存率随着DEAB处理浓度的增加而降低,当DEAB浓度≥5×10-6mol/L时,斑马鱼的畸胎率达100%。5×10-6mol/L DEAB的致畸作用能够被1×10-9mol/L外源性视黄酸所拮抗。整体原位杂交结果显示视黄酸缺乏会导致斑马鱼胚胎心脏房室分化异常,表现为vmhc表达细胞的范围增大,amhc表达细胞的范围缩小。结论通过外源性DEAB处理能有效地建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,DEAB影响胚胎发育存在剂量依赖性。视黄酸在斑马鱼心脏前后轴发育过程中起重要调控作用,心脏发育早期视黄酸缺乏会抑制心房的发育而支持心室的发育,出现房室分化异常。 展开更多

关键词 视黄酸缺乏 斑马鱼 心脏发育 整体原位杂交

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表观遗传学--耳聋研究的新视野 被引量：2

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作者 许飞 王慧君 马端 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期253-259,共7页

耳聋是一种常见的人类感觉系统缺陷,新生儿发病率可达1/1000～3/1000。耳蜗感觉神经上皮毛细胞的结构或功能异常可导致耳聋,遗传因素在其中起重要作用。虽然一些与遗传性耳聋相关的基因及染色体位点已经被定位或克隆,仍有很多耳聋的病... 耳聋是一种常见的人类感觉系统缺陷,新生儿发病率可达1/1000～3/1000。耳蜗感觉神经上皮毛细胞的结构或功能异常可导致耳聋,遗传因素在其中起重要作用。虽然一些与遗传性耳聋相关的基因及染色体位点已经被定位或克隆,仍有很多耳聋的病因尚不清楚。人们发现,除了常见的热点基因突变(GJB2、SLC26A4、线粒体DNA C1494T和A1555G等)外,一些表观遗传学的改变也在耳聋的发生中起重要作用。例如,miR-96突变会导致人和小鼠的渐进性失聪,异常的CpG岛甲基化与一些耳聋综合征的发生有关等。文章着重对表观遗传学在耳聋领域的研究现状和进展进行了综述。 展开更多

关键词 遗传性耳聋 表观遗传学 MICRORNA DNA甲基化 组蛋白修饰

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叶酸缺乏对斑马鱼背主动脉发育的影响 被引量：2

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作者 孙淑娜 桂永浩 +3 位作者 钱林溪 王跃祥 蒋璆 宋后燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第5期321-324,F0002,共5页

目的观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的背主动脉(DA)发育情况,初步探讨叶酸缺乏后胚胎DA发育异常的机理。方法采用将二氢叶酸还原酶(DHFR)功能阻断的方法构建叶酸缺乏斑马鱼模型,分别应用DHFR抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及DHFR基因knock-down技术处... 目的观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的背主动脉(DA)发育情况,初步探讨叶酸缺乏后胚胎DA发育异常的机理。方法采用将二氢叶酸还原酶(DHFR)功能阻断的方法构建叶酸缺乏斑马鱼模型,分别应用DHFR抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及DHFR基因knock-down技术处理斑马鱼胚胎。在胚胎发育至48 hpf时在显微镜下观察胚胎的整体发育情况,在60 hpf时应用荧光显微造影的方法观察胚胎的背主动脉发育状况。利用胚胎整体原位杂交和real-time PCR的方法检测影响DA发育的关键因子ephrinB2、Ang-1和Radar的表达情况,利用TUNEL法检测胚胎底索的凋亡情况。结果MTX处理组胚胎以及DHFR knock-down组胚胎有相似的胚胎发育异常表型。荧光显微造影显示叶酸缺乏组胚胎的DA发育异常。叶酸缺乏组胚胎的ephrinB2、Ang-1和Radar表达减弱,底索凋亡增加。结论叶酸缺乏可导致斑马鱼胚胎背主动脉发育异常,其机理与ephrinB2、Ang-1和Radar的表达减弱以及底索凋亡增加有关。 展开更多

关键词 叶酸 二氢叶酸还原酶 斑马鱼 背主动脉 细胞凋亡

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纤溶酶Kringle区缺失突变体对兔眼玻璃体视网膜界面的作用 被引量：2

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作者 陈武 黄欣 +2 位作者 莫炜 王文吉 宋后燕 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第3期231-235,共5页

目的研究纤溶酶Kringle区缺失突变体(Plm△K)对兔眼玻璃体视网膜界面的作用。方法Plm△K由毕赤酵母表达的纤溶酶原Kringle区缺失突变体(Plg△K)经组织纤溶酶原激活剂(tPA)激活产生,并通过发色底物S2403测定其蛋白水解活性。0.5、1.0、1.... 目的研究纤溶酶Kringle区缺失突变体(Plm△K)对兔眼玻璃体视网膜界面的作用。方法Plm△K由毕赤酵母表达的纤溶酶原Kringle区缺失突变体(Plg△K)经组织纤溶酶原激活剂(tPA)激活产生,并通过发色底物S2403测定其蛋白水解活性。0.5、1.0、1.5μmol/min Plm△K100μL分别注入16只新西兰白兔的玻璃体腔内,注射后1d、7d在光镜下和扫描电镜下检查,并行大体检查、眼部B型超声和光学相干断层扫描(OCT)检查,观察玻璃体视网膜界面情况。结果还原性SDS-PAGE凝胶成像分析证实,Plg△K被激活后产生相对分子质量约26000和5000的2条肽链,且具有纤溶酶活性。4种检测结果均显示Plm△K诱导玻璃体皮质与视网膜的分离。视网膜内表面皮质残留量与Plm△K的剂量呈负相关(r=-0.9516,P=0.048),完全性分离可产生光滑的视网膜内表面。Plm△K注射眼与对照眼的视网膜外层结构均未发现明显的差异。视网膜内表面皮质残留量与药物作用时间有一定的关系,但差异无统计学意义(r=-0.720,P=0.470)。对照组和Plm△K处理组间视网膜外层的形态学无明显不同。Plm△K玻璃体注射后未发现视网膜发生药物相关的不良反应。结论玻璃体腔单独注射Plm△K可有效诱导玻璃体与视网膜的完全性分离,而对外层视网膜结构无明显影响。 展开更多

关键词 玻璃体视网膜界面 纤溶酶 Kringle区 缺失突变

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