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可降解淀粉酿酒酵母基因工程菌的构建及其生产应用 被引量：1
1
作者 程少菊 张添元 +1 位作者 罗进贤 吴群悦 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期128-130,共3页
将酿酒酵母的rDNA片段,黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因表达盒及G418抗性基因表达盒重组进经过改造的质粒pSP72,构建酿酒酵母整合型质粒YIp4RGAn及YIp19RGAn,转化酿酒酵母实验室菌株GRF18、生产菌株JL108、SD和JM,获得能高效表达葡萄糖淀粉酶和... 将酿酒酵母的rDNA片段,黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因表达盒及G418抗性基因表达盒重组进经过改造的质粒pSP72,构建酿酒酵母整合型质粒YIp4RGAn及YIp19RGAn,转化酿酒酵母实验室菌株GRF18、生产菌株JL108、SD和JM,获得能高效表达葡萄糖淀粉酶和分解淀粉的酿酒酵母基因工菌。Southern印迹分析证明,葡萄糖淀粉酶基因已整合进工程菌染色体。这些工程菌在含有20%淀粉的培养基中培养,产酒率都在11%以上。 展开更多
关键词 降解淀粉 酿酒酵母工程菌 酒精生产 重组DNA技术
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影响根癌农杆菌介导的香蕉基因转化早期的主要因素 被引量：20
2
作者 黄霞 黄学林 +2 位作者 李哲 陈云凤 李筱菊 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期68-72,共5页
用含质粒载体pCAMBIA2 30 1的根癌农杆菌 (Agrobacteriuminoculation)转化“6 4 1”香蕉 (MusaAAACavendishsubgroupcv.6 4 - 1)的薄片外植体 ,通过测定GUS基因瞬时表达率 ,对转化早期的主要影响因素进行了研究。结果表明 :农杆菌EHA10 ... 用含质粒载体pCAMBIA2 30 1的根癌农杆菌 (Agrobacteriuminoculation)转化“6 4 1”香蕉 (MusaAAACavendishsubgroupcv.6 4 - 1)的薄片外植体 ,通过测定GUS基因瞬时表达率 ,对转化早期的主要影响因素进行了研究。结果表明 :农杆菌EHA10 5较适合于介导转化。将薄片置于固体高渗培养基上培养 4h后 ,通过真空减压法使农杆菌接种于其上 ,获得了较高的瞬时表达率 (41 6 7% ) ,是对照 (8 33% )的 5倍 ,农杆菌悬液稀释 5倍用于转化较好 ,共培养 3d为宜。薄片外植体越靠近根部 ,瞬时表达率越高。而外植体预培养会降低瞬时表达率。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 香蕉 基因转化 瞬时表达 转基因植物 影响因素
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抗草甘膦基因aroAM12及抗虫基因Bts1m的转基因棉株 被引量：40
3
作者 赵福永 谢龙旭 +1 位作者 田颖川 徐培林 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期108-113,共6页
构建了一种新的植物高效表达载体pAM12 s1m ,其上携带有通过基因优化 (geneshuffling)技术获得的抗草甘膦突变基因 (aroAM12 )和抗虫人工合成重组Bt基因 (Bts1m)。aroAM12基因表达由CaMV35S启动子控制 ,Bts1m基因表达由2E 35S启动子和... 构建了一种新的植物高效表达载体pAM12 s1m ,其上携带有通过基因优化 (geneshuffling)技术获得的抗草甘膦突变基因 (aroAM12 )和抗虫人工合成重组Bt基因 (Bts1m)。aroAM12基因表达由CaMV35S启动子控制 ,Bts1m基因表达由2E 35S启动子和Ω因子控制。以棉花无菌苗下胚轴为外植体 ,采用农杆菌介导法将aroAM12和Bts1m基因导入棉花品种石远 32 1中 ,以aroAM12基因作为选择标记 ,草甘膦为选择剂直接筛选获得 5 2棵再生植株。PCR和Southernblot分析表明再生植株均整合有aroAM12基因 ,其中 38棵植株同时整合有aroAM12和Bts1m基因。Northernblot、Westernblot分析进一步证明整合到植株中的两个基因在转录和翻译水平上进行了有效表达。离体叶片草甘膦抗性和虫试实验证明 ,获得的转基因棉花对草甘膦和棉铃虫具有较强的抗性。 展开更多
关键词 转基因棉花 草甘膦 aroAM12基因 Bts1m基因 选择标记
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转基因番木瓜的抗病性及分子鉴定 被引量：19
4
作者 叶长明 魏祥东 +2 位作者 陈东红 蓝崇钰 朱利民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期181-184,共4页
对T1代转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶(RP)突变体基因的两个番木瓜株系,进行了抗病性和分子生物学分析。结果表明,转基因番木瓜对PRV抗性达到高抗或免疫,目的基因RP遗传至转基因后代并在RNA水平表达,PCR可检测到CaMV35S启动子序列、标记基... 对T1代转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶(RP)突变体基因的两个番木瓜株系,进行了抗病性和分子生物学分析。结果表明,转基因番木瓜对PRV抗性达到高抗或免疫,目的基因RP遗传至转基因后代并在RNA水平表达,PCR可检测到CaMV35S启动子序列、标记基因NPTII。 展开更多
关键词 转基因番木瓜 抗病性 检测 分子鉴定
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“传统”垃圾填埋场渗滤液中古细菌16S rRNA基因的RFLP分析 被引量：8
5
作者 黄立南 周惠 +3 位作者 陈月琴 罗硕 蓝崇钰 屈良鹄 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期87-91,共5页
“传统”垃圾填埋场渗滤液中古细菌群落的多样性通过不依赖于培养的分析而获得。将渗滤液中古细菌的16S rRNA基因片断(16S rDNA)选择性地扩增出来并用于构建16S rDNA克隆文库。文库内古细菌16S rDNA的遗传变异性通过RFLP分析(限制性内切... “传统”垃圾填埋场渗滤液中古细菌群落的多样性通过不依赖于培养的分析而获得。将渗滤液中古细菌的16S rRNA基因片断(16S rDNA)选择性地扩增出来并用于构建16S rDNA克隆文库。文库内古细菌16S rDNA的遗传变异性通过RFLP分析(限制性内切酶Hha Ⅰ和HaeⅢ)而得到。80个随机选出的古细菌rDNA克隆子被划分为29个不同的RFLP型(组),其中最大的5个型共占所有被分析克隆子的53％左右,而其余24个型的丰度均处于相对较低的水平,其中16个型更仅含有1个克隆子。有关结果表明,对克隆16S rDNA片断的RFLP分析是评估复杂厌氧系统中微生物群落多样性的有力工具。 展开更多
关键词 “传统”垃圾填埋场 古细菌 16S RRNA基因 RFLP
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胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆及其在E.coli中的表达 被引量：9
6
作者 范云 刘兵 +2 位作者 王宏斌 王树启 王金发 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期52-55,共4页
对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析 ,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在相对分子质量 36 0 0 0附近有一条蛋白带的差别。由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中有抗冻蛋白 (AFP)表达。根据相关... 对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析 ,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在相对分子质量 36 0 0 0附近有一条蛋白带的差别。由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中有抗冻蛋白 (AFP)表达。根据相关的研究结果设计引物 ,以胡萝卜幼苗基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增得到了长 10 99bp的抗冻蛋白基因。测序结果表明其与GenBank公布的afp序列仅有 3个碱基的差别。将此抗冻蛋白基因克隆进大肠杆菌表达载体pGEX4T1,在IPTG的诱导下表达出了含有AFP的约 6 0 0 0 0的融合蛋白 。 展开更多
关键词 胡萝卜 冷诱导 抗冻蛋白基因 AFP基因 基因克隆 基因表达 大肠杆菌 植物抗寒性
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利用微波炉和煮沸法快速制备大肠杆菌基因组DNA PCR模板 被引量：12
7
作者 赫然 张颖 +5 位作者 王强 李刚 王智学 崔亮 刘秋云 李宝健 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第S1期80-81,共2页
利用微波炉和煮沸法可以简单、快速、有效地制备大肠杆菌基因组DNAPCR模板。用该模板做PCR具有很高的效率和良好的特异性。
关键词 微波炉 煮沸法 基因组DNA PCR模板
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根癌农杆菌介导苜蓿体胚转化及转基因植株再生 被引量：10
8
作者 黎茵 黄学林 +2 位作者 肖洁凝 黄霞 李筱菊 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期79-81,85,共4页
用含质粒载体pCAMBIA2301(带有受CaMV35S启动子调控的GUS基因和nptⅡ基因)的根癌农杆菌Agrobacteriumtumefaciens转化晋南苜蓿MedicagosativaL cv Jinnan的体胚组织,发现负压处理有利于提高转化频率(可达35%),3批共158个体胚切块的转化... 用含质粒载体pCAMBIA2301(带有受CaMV35S启动子调控的GUS基因和nptⅡ基因)的根癌农杆菌Agrobacteriumtumefaciens转化晋南苜蓿MedicagosativaL cv Jinnan的体胚组织,发现负压处理有利于提高转化频率(可达35%),3批共158个体胚切块的转化实验共获得具有卡那霉素抗性的再生植株15株,经组织化学染色和分子检测,证实GUS基因已整合到转化植株基因组中,在芽、叶片、叶柄和根等组织中均有表达,并在土壤栽培过程中保持稳定的表达。 展开更多
关键词 苜蓿Medicago SALIVA L 转化 农杆菌 体胚
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通过cDNARDA法分离和识别盐藻(Dunaliella salina)盐胁迫相关基因 被引量：10
9
作者 方孝东 黄薇 +2 位作者 林栖凤 李冠一 屈良鹄 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期67-72,共6页
采用cDNA代表性差异分析 (RDA)技术 ,对盐藻在盐胁迫时差异表达的基因进行了分离鉴定 .在分离到的 10个基因中 ,有 5个与已知基因同源 (包括叶绿素a b结合蛋白基因、蛋白磷酸酶I催化亚基基因和 3个核糖体蛋白基因 ) ,还有 5个未知功能... 采用cDNA代表性差异分析 (RDA)技术 ,对盐藻在盐胁迫时差异表达的基因进行了分离鉴定 .在分离到的 10个基因中 ,有 5个与已知基因同源 (包括叶绿素a b结合蛋白基因、蛋白磷酸酶I催化亚基基因和 3个核糖体蛋白基因 ) ,还有 5个未知功能基因则是首次在盐藻中被分离 .值得注意的是 ,所有这 5个已知基因的功能都与细胞分裂或盐胁迫有关 .结果表明 :取样时盐藻细胞仍处于恢复阶段 ,所分离到的基因对于盐藻耐盐可能具有重要意义 ;蛋白磷酸酶I的下调表达可能是盐藻调节离子平衡的一个重要过程和细胞分裂受阻的原因所在 ;盐藻减缓细胞分裂速度可能是为了减少能量消耗 ,以留出足够的能量来应对盐胁迫 ;其它 5个未知基因可能也与盐藻适应盐胁迫机制有关 . 展开更多
关键词 盐藻 盐胁迫 差异表达 基因分离鉴定 代表性差异分析
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aroA基因的克隆和优化 被引量：12
10
作者 何鸣 曾海燕 +1 位作者 徐培林 叶长明 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期76-79,共4页
除草剂草甘膦 (glyphosate ,N_phosphonomethylglycine )的靶标酶是由aroA基因编码的EPSP (5_烯醇式丙酮酰莽草酸_3_磷酸 ,5_enolpyruvylshikimate_3_phosphate)合成酶。采用先进的基因优化技术 ,以鼠伤寒沙门氏杆菌和大肠杆菌的EPSP合... 除草剂草甘膦 (glyphosate ,N_phosphonomethylglycine )的靶标酶是由aroA基因编码的EPSP (5_烯醇式丙酮酰莽草酸_3_磷酸 ,5_enolpyruvylshikimate_3_phosphate)合成酶。采用先进的基因优化技术 ,以鼠伤寒沙门氏杆菌和大肠杆菌的EPSP合成酶基因为模板 ,通过随机结合 ,交错延伸的PCR扩增过程 ,克服定点突变的局限性 ,使基因获得多位点突变 ,并使之在大肠杆菌中得到表达。对纯化后的表达产物的酶动力学性质的测定结果表明 ,获得了与作为模板的野生型相比 ,具有高得多的酶活力 (降低的Km (PEP) )和大大增强的草甘膦抗性 (升高的Ki(glyphosate) ) 展开更多
关键词 5-稀醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸 EPSP合成酶 草甘膦 除草剂 基因克隆 基因优化 转基因作物 aroA基因 酶活力
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人纤溶酶原K1-3区基因在大肠杆菌中的表达 被引量：5
11
作者 陆幸妍 盛节 +1 位作者 张添元 罗进贤 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期63-65,共3页
将人纤溶酶原kringle 1- 3 (K1- 3)基因插入融合表达载体pET - 17b ,获得重组质粒pET -K13 ,转化E coliBL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下 ,人纤溶酶原K1- 3基因在E coliBL2 1(DE3,pET -K13)中获得高效融合表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4% ,表... 将人纤溶酶原kringle 1- 3 (K1- 3)基因插入融合表达载体pET - 17b ,获得重组质粒pET -K13 ,转化E coliBL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下 ,人纤溶酶原K1- 3基因在E coliBL2 1(DE3,pET -K13)中获得高效融合表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4% ,表达产物以包涵体存在 ,Westernblot证明重组蛋白对人纤溶酶原抗血清有特异免疫原性 . 展开更多
关键词 人纤溶酶原K1-3 基因表达 大肠杆菌 WESTERN BLOT 肿瘤 血管生成抑制素
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水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因的序列和表达分析 被引量：13
12
作者 王峰 王宏斌 王金发 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期101-106,共6页
以水稻(Oryza sativa)品种Cpslo17幼穗为材料,通过RT-PCR克隆了长度为698bp的编码水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因(OsCu/Zn-SOD)。序列分析表明其覆盖基因完整编码框,编码由152个氨基酸组成的蛋白,它与玉米(Zea maize)Cu/Zn-SOD基因... 以水稻(Oryza sativa)品种Cpslo17幼穗为材料,通过RT-PCR克隆了长度为698bp的编码水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因(OsCu/Zn-SOD)。序列分析表明其覆盖基因完整编码框,编码由152个氨基酸组成的蛋白,它与玉米(Zea maize)Cu/Zn-SOD基因序列的相似率为88%。TargetP和ChloroP预测编码蛋白N端无信号肽序列,且此编码区段有8个外显子和7个内含子。利用Swiss-Model站点预测OsCu/Zn-SOD三维结构,并分析其铜锌离子结合位点的结构。RT-PCR结果表明OsCu/Zn-SOD在水稻不同品种均有表达,但表达量存在差异,OsCu/Zn-SOD在Cpslo17的分裂旺盛的幼嫩组织如幼穗、开花期花序和未成熟种子中表达量较高,而在叶片中表达量相对较低,在愈伤组织中表达微弱。 展开更多
关键词 水稻 铜锌超氧化物歧化酶 序列分析 基因组结构 RT-PCR
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大蕉苯丙氨酸解氨酶基因的克隆、鉴定和表达分析(英文) 被引量：14
13
作者 陈雅平 陈云凤 +2 位作者 陈启助 黄霞 黄学林 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期421-427,共7页
为了研究苯丙氨酸解氨酶基因与大蕉(Musa ABB cv. Dongguandajiao)抗枯萎病的关系,利用 RT-PCR 和 RACE技术克隆了大蕉苯丙氨酸解氨酶基因全长 cDNA。此 cDNA 长 1 300 bp,包含一个长为 1 191 bp,编码 397 个氨基酸的完整开放阅读框(OR... 为了研究苯丙氨酸解氨酶基因与大蕉(Musa ABB cv. Dongguandajiao)抗枯萎病的关系,利用 RT-PCR 和 RACE技术克隆了大蕉苯丙氨酸解氨酶基因全长 cDNA。此 cDNA 长 1 300 bp,包含一个长为 1 191 bp,编码 397 个氨基酸的完整开放阅读框(ORF),推导的氨基酸序列与水稻 PAL 基因氨基酸序列同源性达 89%,将此基因命名为 M-PAL。Southern杂交结果表明大蕉中存在一个包含 4-5 个 PAL基因的基因家族,将此基因克隆到大肠杆菌表达载体 pET32(a+)中,表达的蛋白质分子量大小与推导的相一致,并且表达的蛋白质表现出 PAL 酶活性。对接种香蕉枯萎病菌 4 号生理小种(Fusarium oxysporumf. sp. cubense (FOC) race 4 )后大蕉叶片中 M-PAL基因的转录谱进行研究表明,在接种枯萎病菌后,M-PAL基因在叶片中的转录水平提高,因此推测 M-PAL基因的表达可能与香蕉枯萎病抗性相关。 展开更多
关键词 大蕉 苯丙氨酸解氨酶 枯萎病
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水稻矮化突变体G蛋白α亚基基因的结构和表达 被引量：3
14
作者 费小雯 邓晓东 +2 位作者 王永胜 刘良式 徐增富 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期70-74,共5页
利用γ-Co60辐射诱发水稻特光矮-2(Oryza sativa L.cv.TGA-2)产生变异,获得一种稳定遗传的新型水稻矮化突变体dwarf69。dwarf69和TGA-2及其杂交后代F1、F2、F3成熟期的株高数据表明矮化表型受一对隐性基因控制。进一步研究发现,虽然dwar... 利用γ-Co60辐射诱发水稻特光矮-2(Oryza sativa L.cv.TGA-2)产生变异,获得一种稳定遗传的新型水稻矮化突变体dwarf69。dwarf69和TGA-2及其杂交后代F1、F2、F3成熟期的株高数据表明矮化表型受一对隐性基因控制。进一步研究发现,虽然dwarf69和TGA-2的G蛋白α亚基基因(Rice G protein alpha-subunit,RGA)编码区核苷酸序列只有一个核苷酸的差异,但RGA在野生型TGA-2中的表达量明显高于在突变体dwarf69中的表达量。对矮化突变体dwarf69和野生型TGA-2的RGA基因5'上游区的序列分析表明,dwarf69 RGA 5'上游区比TGA-2RGA 5'上游区多出1 076 bp。首次报道水稻矮化突变体中的RGA 5'上游区序列与其野生种的RGA 5'上游区序列存在显著的差异。 展开更多
关键词 水稻 矮化突变体 G蛋白α亚基 5’上游区
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灰树花总DNA的制备及基因组文库的构建 被引量：11
15
作者 徐志祥 程度 李宝健 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期711-713,共3页
灰树花是一种珍贵的药用真菌,因为多糖含量较高,较难获得高质量的总DNA,本文提出了一种制备高质量灰树花总DNA及构建灰树花基因组文库的方法。该方法制备的灰树花总DNA,经Sau3AⅠ酶切后,用于构建基因组文库,可得到2×105个转化子/50... 灰树花是一种珍贵的药用真菌,因为多糖含量较高,较难获得高质量的总DNA,本文提出了一种制备高质量灰树花总DNA及构建灰树花基因组文库的方法。该方法制备的灰树花总DNA,经Sau3AⅠ酶切后,用于构建基因组文库,可得到2×105个转化子/50mg,平均插入片段为14kb。为下一步克隆灰树花中的基因以及进行其他分子生物学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 灰树花 DNA提取 基因组文库
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21世纪医学主要进展的预测——以人类后基因组研究为主要特征的医学革命时代 被引量：8
16
作者 李宝健 刘秋云 +1 位作者 李刚 何康泽 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期95-99,共5页
21世纪将是生命科学取得革命性飞跃性进展的时代,同时也是医学上取得伟大进展的时代。这个时代是以功能基因组即后基因组时代为主要特征而发展的,作者从21世纪人类功能基因组将取得的进展;治疗着眼于基因水平;诊断学上的革命;基因治疗... 21世纪将是生命科学取得革命性飞跃性进展的时代,同时也是医学上取得伟大进展的时代。这个时代是以功能基因组即后基因组时代为主要特征而发展的,作者从21世纪人类功能基因组将取得的进展;治疗着眼于基因水平;诊断学上的革命;基因治疗将取得的成功;未来医学将把保健、预防、治疗、康复视为整体加以安排;新型有效药物将大量涌现;中医药将取得现代化的发展;人体报废的组织及器官的修复和更替置换;老年人疾病的预防、治疗和寿命的延长以及其它有关问题等十个方面预测了21世纪医药学发展的方方面面,为未来医药学发展提供了轮廓,指明了方向。 展开更多
关键词 医学科学发展 功能基因组
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论应用多基因转化策略综合改良生物体遗传性研究方向的前景 Ⅱ.多基因转化策略中的规律、前景和问题 被引量：20
17
作者 李宝健 朱华晨 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期79-83,共5页
随着后基因组时代的到来,人类将克隆到越来越多的、生物学意义明确的有用基因应用于基因工程对生物体的遗传改良中。但生物体的绝大多数性状和生理功能都是依靠多基因的协调表达而实现的。因此,多基因转化策略必将成为今后基因工程在基... 随着后基因组时代的到来,人类将克隆到越来越多的、生物学意义明确的有用基因应用于基因工程对生物体的遗传改良中。但生物体的绝大多数性状和生理功能都是依靠多基因的协调表达而实现的。因此,多基因转化策略必将成为今后基因工程在基础理论与实际应用研究中的主流方向。综述了近年来中山大学生物工程研究中心//基因工程教育部重点实验室在多基因改良农作物方面的研究工作和进展,分析了多基因转化中的基本规律和存在的问题,最后对多基因转化策略在未来的应用前景作出了简要的展望。 展开更多
关键词 多基因转化策略 基因工程 后基因组 遗传改良
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展望21世纪的农业生物技术——后基因组时代的农业生物技术 被引量：10
18
作者 李宝健 朱华晨 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期56-61,共6页
概括地论述了20世纪农业生物技术发展所依托的理论和技术,并对上世纪在较短时间内建立和发展起来的农业生物技术进行了综合评述。作者认为:21世纪的农业生物技术将以后基因组时代为特征而获得巨大的发展;作者还全面展望了在后基因组时... 概括地论述了20世纪农业生物技术发展所依托的理论和技术,并对上世纪在较短时间内建立和发展起来的农业生物技术进行了综合评述。作者认为:21世纪的农业生物技术将以后基因组时代为特征而获得巨大的发展;作者还全面展望了在后基因组时代的新世纪中,农业生物技术将取得的革命性的成就、应注意的问题和应创建和具备的条件。 展开更多
关键词 农业生物技术 后基因组时代 20世纪 21世纪 展望
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内皮细胞抑制素酵母工程菌的高密度发酵及产物纯化和活性分析 被引量：2
19
作者 吴江雪 符武钊 +2 位作者 张添元 罗进贤 吴群悦 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期224-228,共5页
用 30升发酵罐研究了内皮细胞抑制素 (EDN)酵母工程菌P .pastorisGS115 (pPIC9K EDN)的高密度发酵工艺 ,摸索出发酵培养基 ,pH ,诱导时间等对菌体生长和基因表达的影响 .根据所确定的最适条件进行发酵 ,通过补料和甲醇诱导 4 8h后 ,工程... 用 30升发酵罐研究了内皮细胞抑制素 (EDN)酵母工程菌P .pastorisGS115 (pPIC9K EDN)的高密度发酵工艺 ,摸索出发酵培养基 ,pH ,诱导时间等对菌体生长和基因表达的影响 .根据所确定的最适条件进行发酵 ,通过补料和甲醇诱导 4 8h后 ,工程菌GS115 (pPIC9K EDN)生物量的A60 0 值达到 2 5 0 ,分泌量为 15 0mg L .发酵液经StreamlineSP ,SepharoseSPFF离子交换柱和Sepharose HeparinHiTrap亲和柱纯化 ,产物纯度达 97%以上 ,回收率为 6 0 % .Western印迹结果表明 ,酵母工程菌GS115 (pPIC9K EDN)表达的重组人内皮细胞抑制素具有天然EDN的免疫原性 .MTT法和抑癌实验结果显示 :纯化产物能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖并能抑制移植于小鼠的黑色素瘤的生长 ,其平均抑瘤率是 94 2 % . 展开更多
关键词 内皮细胞抑制素 酵母工程菌 发酵 产物 纯化 毕赤酵母 生物活性
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人血管抑制素基因克隆、表达和生物活性分析 被引量：3
20
作者 张爱联 罗进贤 +1 位作者 张添元 罗学斌 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期56-59,共4页
应用PCR技术从人胎肝cDNA文库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GS115 ,经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GS115 (pPIC9KA3)... 应用PCR技术从人胎肝cDNA文库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GS115 ,经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GS115 (pPIC9KA3)。再用G418筛选法 ,在含不同浓度的G418平板上筛选高拷贝整合的转化子。对高拷贝整合的转化子进行发酵培养和诱导表达。SDS_PAGE及Western印迹分析显示 :表达产物约占胞外蛋白的 43% ,相当于 94mg L ,并具有免疫活性。并能抑制bFGF诱导的鸡胚尿囊膜新生血管的生成。还对用G418筛选高拷贝整合转化子的方法做了探索。 展开更多
关键词 人血管抑制素 基因表达 毕节酵母 G418 血管生成
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