不同猪瘟疫苗免疫方案的免疫效果评估

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作者 郑良益 冯钊 +9 位作者 王治江 万佳 柏娇 张敏 沈海峰 陈武卫 周平 刘项羽 谢红玲 孙文 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第10期71-76,共6页

为评估猪瘟兔化弱毒疫苗(简称C株疫苗)和猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗(简称E2疫苗)的免疫效果以及母源抗体水平对仔猪猪瘟疫苗免疫效果的影响,本试验将65头25~30日龄仔猪分为6个免疫组(A~F组,10头/组)和1个空白对照组(G组,5头)。... 为评估猪瘟兔化弱毒疫苗(简称C株疫苗)和猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗(简称E2疫苗)的免疫效果以及母源抗体水平对仔猪猪瘟疫苗免疫效果的影响,本试验将65头25~30日龄仔猪分为6个免疫组(A~F组,10头/组)和1个空白对照组(G组,5头)。A组在母源抗体转阴时(60日龄)单次接种C株疫苗;B、C、D、E、F组实施2次免疫,其中B组全程使用C株疫苗;C组采用C株疫苗与自制E2疫苗混合免疫(含30μg E2蛋白);D组首免C株疫苗,二免自制E2疫苗;E组全程使用自制E2疫苗(含30μg E2蛋白);F组接种商品化E2疫苗(含50μg E2蛋白);G组注射生理盐水作为对照。结果显示,A组在接种后42~150 d抗体阳性率维持100%;B组(25~30日龄首免)受母源抗体干扰,最高阳性率仅40%;C组二免后122 d抗体阳性率为50%;D组和E组分别在二免后32~152 d和首免后28 d~二免后152 d抗体阳性率维持100%;F组在二免后152 d抗体阳性率下降至66.67%;所有试验组免疫效果均显著优于空白对照组(G组试验期内抗体阳性率均为0)。结果表明,母源抗体显著影响免疫效果,而组合免疫策略效果较好。母源抗体阳性时,推荐50~60日龄单次接种C株疫苗;若需25~30日龄首免,应采用C株疫苗首免、E2疫苗加强的免疫程序,其保护期可达180 d;商品化E2疫苗单独使用保护期可达150 d。 展开更多

关键词 猪瘟活疫苗 E2蛋白 猪瘟抗体 免疫程序 免疫效果评估

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猪瘟病毒E2蛋白夹心ELISA抗原检测方法的建立及初步应用

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作者 李建 孙文 +9 位作者 喻亚雄 张飞雁 张敏 周玉双 王璐瑶 王碧群 于义娟 牟林琳 张栋梁 刘项羽 《中国兽药杂志》 2025年第6期1-8,共8页

以纯化的兔多抗作为包被用抗体,辣根过氧化物酶标记鼠单抗作为检测用抗体,以大肠杆菌表达的猪瘟病毒E2蛋白作为标准品,建立了猪瘟病毒E2蛋白夹心ELISA抗原定量方法。结果表明,兔多抗最佳包被浓度为4μg/mL,最佳封闭液为含1%牛血清白蛋... 以纯化的兔多抗作为包被用抗体,辣根过氧化物酶标记鼠单抗作为检测用抗体,以大肠杆菌表达的猪瘟病毒E2蛋白作为标准品,建立了猪瘟病毒E2蛋白夹心ELISA抗原定量方法。结果表明,兔多抗最佳包被浓度为4μg/mL,最佳封闭液为含1%牛血清白蛋白的磷酸盐溶液,最佳反应时间为60 min,最佳二抗稀释度为1∶3200,最佳反应时间为60 min。研究建立的ELISA检测方法最低检出限为39 ng/mL,与猪其他病原无交叉反应,可用于猪瘟病毒相关产品的批量检测。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 ELISA 检测

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猪繁殖与呼吸综合征病毒的持续感染和传播特点及防控出路 被引量：4

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作者 蔡雪辉 徐敏 汤艳东 《猪业科学》 2024年第4期28-31,6,共5页

1PRRS简述。1987年,美国首次暴发猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),随后在世界各国陆续暴发该病,截至目前PRRS已遍布世界主要的养猪业国家,成为各国养猪业最为严重的疫病之一,每年给全球养猪业造成数十亿甚至上百亿美元的经济损失。

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 养猪业 持续感染 传播特点 PRRS 疫病 暴发 经济损失

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实验用猪非洲猪瘟综合防控 被引量：2

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作者 张治中 姜鲲 +5 位作者 周平 张振中 鲁凡 陈洁 王文杰 鲜巧阳 《中国动物保健》 2024年第10期10-13,共4页

近年来,非洲猪瘟疫情在世界范围内流行,严重影响生猪生产供应,不仅给我国生猪养殖业产生严重的负面影响,而且严重影响用于科学实验的实验用猪的质量和实验动物生物安全。本文通过归纳非洲猪瘟病毒防控中存在的难点,结合实验动物管理要求... 近年来,非洲猪瘟疫情在世界范围内流行,严重影响生猪生产供应,不仅给我国生猪养殖业产生严重的负面影响,而且严重影响用于科学实验的实验用猪的质量和实验动物生物安全。本文通过归纳非洲猪瘟病毒防控中存在的难点,结合实验动物管理要求,分别从政策执行、硬件优化、猪源控制、人员管理、物资管理、环境控制、饲喂管理、疫病监测、应急预案等方面进行了总结,可以作为实验用猪非洲猪瘟综合防控体系建设的参考建议。 展开更多

关键词 实验用猪 非洲猪瘟 综合防控

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猪肺炎支原体p46蛋白定量检测双抗夹心ELISA方法的建立 被引量：2

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作者 张飞雁 秦涛 +4 位作者 谢红玲 朱薇 李建 郑佳 冯钊 《动物医学进展》 北大核心 2024年第11期64-69,共6页

为建立快速检测猪肺炎支原体灭活疫苗抗原含量的双抗夹心ELISA方法,以抗猪肺炎支原体p46蛋白多抗为包被抗体,HRP标记的抗猪肺炎支原体p46蛋白单抗(HRP-P46单抗)为检测抗体,进行反应条件优化,建立了猪肺炎支原体定量检测双抗夹心ELISA方... 为建立快速检测猪肺炎支原体灭活疫苗抗原含量的双抗夹心ELISA方法,以抗猪肺炎支原体p46蛋白多抗为包被抗体,HRP标记的抗猪肺炎支原体p46蛋白单抗(HRP-P46单抗)为检测抗体,进行反应条件优化,建立了猪肺炎支原体定量检测双抗夹心ELISA方法。结果表明,抗猪肺炎支原体p46蛋白多抗包被浓度为4000 ng/mL,HRP-P46单抗浓度为50 ng/mL,封闭液为5%脱脂牛奶粉条件最优,该方法在检测范围为5.69~7.80(Log 10 CCU/mL)时,R 2为0.9879。该方法特异性好,与6种猪源病原均无交叉反应,且该ELISA方法批内重复变异系数和批间重复变异系数均小于5%。使用该ELISA方法和活菌计数方法同时测定20批抗原活菌数,两种方法差值小于101.0 CCU/mL,猪肺炎支原体JM株和RM48株均可用此方法进行检测。该方法具有良好的敏感性、精确性、特异性,可用于猪肺炎支原体灭活疫苗的抗原检测。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 酶联免疫吸附试验 定量检测 疫苗

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血凝试验和反向间接血凝试验定量检测PCV2 Cap抗原的研究 被引量：2

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作者 李晶梅 谢红玲 +8 位作者 薛霜 李文静 黄涛 王焕君 刘项羽 张飞雁 朱薇 李婷婷 石宝兰 《中国兽药杂志》 2024年第1期1-5,共5页

为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血... 为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血凝效价(RIHA效价)。结果显示,用猪、鸡、绵羊红细胞在不同稀释液条件下测得的同一批次PCV2Cap抗原凝集效价为3log2~9log2,说明PCV2Cap抗原可凝集猪、鸡、绵羊红细胞,但红细胞不同、稀释液不同,测得的PCV2Cap抗原凝集效价也不同。使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,测得的PCV2Cap抗原RIHA效价为14log2,且纯化后和未纯化的PCV2Cap抗原的RIHA效价均与ELISA定量检测结果有平行关系;空杆状病毒、CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、TCEV的RIHA效价均小于1log2。说明反向间接血凝方法可定量检测重组杆状病毒表达的PCV2Cap抗原,该方法敏感、特异,适用于疫苗生产中的PCV2Cap抗原的定量检测。 展开更多

关键词 PCV2 Cap抗原 反向间接血凝 血凝 红细胞

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一株猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的分离鉴定及攻毒模型建立 被引量：1

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作者 王璐瑶 谢红玲 +9 位作者 闵娟娟 李晶梅 刘项羽 王明哲 王碧群 李婷婷 冯钊 石宝兰 漆世华 张栋梁 《中国兽药杂志》 2024年第2期4-9,共6页

从一只临床表现为流脓涕、打喷嚏的猫身上分离出一株猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus typeⅠ,FHV-1),使用F81细胞进行分离,并通过PCR、透射电镜和糖蛋白D(gD)基因序列分析来鉴定病毒。通过PCR方法从猫的鼻分泌物中扩增出1125 bp的gD... 从一只临床表现为流脓涕、打喷嚏的猫身上分离出一株猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus typeⅠ,FHV-1),使用F81细胞进行分离,并通过PCR、透射电镜和糖蛋白D(gD)基因序列分析来鉴定病毒。通过PCR方法从猫的鼻分泌物中扩增出1125 bp的gD基因。序列分析表明,该分离株与从GenBank获得的其他FHV-1毒株属于同一家族。随后在接种猫鼻分泌物的F81细胞的培养上清中观察到有包膜和直径约120 nm左右的疱疹样病毒颗粒。将分离获得的FHV-1病毒感染2~3月龄蓝猫,成功建立动物实验模型,感染后的猫出现脓性的眼鼻分泌物,打喷嚏等临床症状,且一周内持续排毒。该分离株为FHV-1的病原学研究提供了重要的数据,也为猫鼻气管炎疫苗候选株的筛选和疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒 GD基因 分离 鉴定

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改良的RIHA方法定量检测PCV2 Cap抗原的研究

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作者 谢红玲 李晶梅 +8 位作者 冯钊 雷环城 杨思谊 黄泳芳 刘项羽 程敏华 秦红刚 田丽娜 孙文 《中国兽药杂志》 2024年第10期1-7,共7页

为提高反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination assay,RIHA)定量检测PCV2 Cap抗原的稳定性和精准性,将RIHA方法改良为:1)将被检样品稀释为几个适宜稀释度,分别做RIHA检测;2)检测孔100%、75%、50%、25%、0%凝集分别记录为4... 为提高反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination assay,RIHA)定量检测PCV2 Cap抗原的稳定性和精准性,将RIHA方法改良为:1)将被检样品稀释为几个适宜稀释度,分别做RIHA检测;2)检测孔100%、75%、50%、25%、0%凝集分别记录为4、3、2、1、0分,将几个稀释度的被检样品全部检测孔的分数加和;3)同法检测参照品并将参照品分数加和;4)被检样品与参照品总分数对比计算,获得被检样品抗原含量。改良的RIHA方法进行稳定性评价并与ELISA方法做比较。结果显示,改良RIHA方法的批内差异为6.8%~19.4%、批间差异为11.4%~23.6%、检测同一个样品差异系数为8.5%,均优于常规RIHA方法。改良RIHA方法检测纯化前和纯化后的PCV2 Cap抗原共30份,与ELISA方法检测结果比较相关系数为0.9568。研究结果表明,改良的PCV2 Cap抗原RIHA定量检测方法稳定性良好,且与ELISA方法检测结果有相关性,可在PCV2 Cap抗原生产中做定量检测,也可在毒种筛选、生产工艺优化中快速定量检测PCV2 Cap抗原含量。 展开更多

关键词 PCV2 Cap抗原 改良 反向间接血凝试验(RIHA) ELISA 定量检测

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：7

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作者 杨飞 黄小洁 +4 位作者 刘丹 侯力丹 李建 张敏 郎洪武 《动物医学进展》 北大核心 2020年第3期7-11,共5页

为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行分析与鉴定。用CHO细胞表达的IBRV-gD蛋白作为免疫原免疫8周龄的Balb/c小鼠,无菌取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,经小鼠腹腔注射,待... 为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行分析与鉴定。用CHO细胞表达的IBRV-gD蛋白作为免疫原免疫8周龄的Balb/c小鼠,无菌取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,经小鼠腹腔注射,待小鼠腹腔膨胀后,收集腹水,纯化后进行单克隆抗体浓度、纯度、类及亚类、抗体效价、相对亲和常数、Western blot和间接免疫荧光测定。结果表明,筛选到2株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为4G3D4和9D7A7。4G3D4和9D7A7这2株单抗纯化后的浓度分别为2.6 mg/mL、1.6 mg/mL;亲和常数分别为2.30E+10、1.88E+09;抗体亚类均为IgG1,轻链为kappa链;且均能与IBRV发生特异性反应,与接种IBRV的MDBK细胞发生反应,产生特异性荧光;间接ELISA测定腹水效价分别为1∶204800、1∶12800。利用CHO细胞表达的IBRV-gD蛋白成功制备了2株单克隆抗体,为下一步建立特异性的IBRV检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白 单克隆抗体

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犬瘟热病毒单克隆抗体的研制及胶体金试纸条检测方法的建立 被引量：4

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作者 张敏 李建 +12 位作者 舒金秀 冯超林 石宝兰 郑良益 牟林琳 柏娇 胡玉立 徐松 刘国兴 闵娟娟 石瑛 顾素云 谢红玲 《中国兽药杂志》 2022年第12期16-24,共9页

利用原核表达、纯化的犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)N蛋白免疫BALB/c小鼠,成功筛选到两株分泌CDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、D6。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性、特异性良好,能识别不同来源的CDV株... 利用原核表达、纯化的犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)N蛋白免疫BALB/c小鼠,成功筛选到两株分泌CDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、D6。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性、特异性良好,能识别不同来源的CDV株,单抗亚类均为IgG1。以D3作为金标抗体,D6作为检测抗体,兔抗鼠IgG作为质控线抗体,制备CDV胶体金检测试纸条,检测CDV敏感性为1000 TCID50,能在CDV、犬细小病毒、犬腺病毒2型、狂犬病病毒中有效检测区分出CDV。本研究建立的胶体金试纸条检测方法灵敏度高、特异性强,适用于CDV临床快速诊断。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 N蛋白 单克隆抗体 胶体金试纸条

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猪δ冠状病毒胶体金试纸条检测方法的建立 被引量：5

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作者 张敏 孔冬妮 +8 位作者 李建 于义娟 黄涛 王碧群 石宝兰 朱薇 郑良益 李婷婷 谢红玲 《中国兽药杂志》 2021年第12期1-8,共8页

为建立一种方便、快捷、实用的检测猪δ冠状病毒(PDCoV)方法,原核表达PDCoV N蛋白,以纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术研制2株分泌PDCoV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为E8、A10。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体... 为建立一种方便、快捷、实用的检测猪δ冠状病毒(PDCoV)方法,原核表达PDCoV N蛋白,以纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术研制2株分泌PDCoV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为E8、A10。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性及特异性良好,E8亚类为IgG2a,A10亚类为IgG1。以E8作为金标抗体、A10作为检测抗体、兔抗鼠作为质控线抗体制备PDCoV胶体金检测试纸条,检测PDCoV敏感性为100 TCID50,检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、PDCoV阴性对照均为阴性。本研究建立的胶体金试纸条检测方法敏感性及特异性良好,为PDCoV检测及流行病学调查奠定基础。 展开更多

关键词 猪δ冠状病毒 N蛋白 单克隆抗体 胶体金试纸条

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一种鸡抗猪丁型冠状病毒阳性血清的制备方法 被引量：2

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作者 李晶梅 张飞雁 +10 位作者 王焕君 柏娇 于义娟 王碧群 朱薇 郑良益 李婷婷 冯钊 石宝兰 漆世华 谢红玲 《中国兽药杂志》 2022年第9期22-28,共7页

为研究用鸡制备猪丁型冠状病毒(PDCoV)阳性血清,将PDCoV用二乙烯亚胺(BEI)灭活,加矿物油佐剂乳化制成疫苗,多次免疫SPF鸡,采集血清,检测血清中和效价并用间接免疫荧光法(IFA)检测PDCoV。结果显示,血清中和效价随免疫次数增加逐渐增高,4... 为研究用鸡制备猪丁型冠状病毒(PDCoV)阳性血清,将PDCoV用二乙烯亚胺(BEI)灭活,加矿物油佐剂乳化制成疫苗,多次免疫SPF鸡,采集血清,检测血清中和效价并用间接免疫荧光法(IFA)检测PDCoV。结果显示,血清中和效价随免疫次数增加逐渐增高,4免后14 d的中和效价平均值为1314;制备的阳性血清可用于IFA检测PDCoV,其不与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)反应,特异性良好。本研究用鸡成功制备PDCoV阳性血清,为利用鸡制备其他猪病阳性血清奠定基础。 展开更多

关键词 猪丁型冠状病毒 阳性血清 中和效价 IFA

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稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的BHK细胞系的构建 被引量：1

13

作者 薛霜 徐松 +7 位作者 郑成 徐丹丹 胡玉立 刘国兴 李婷婷 石宝兰 漆世华 谢红玲 《中国兽药杂志》 2022年第8期24-28,共5页

猪瘟病毒(CSFV)的E2蛋白是引起猪体产生针对猪瘟保护性抗体的主要抗原,构建可稳定表达CSFV E2蛋白的细胞系,可为E2蛋白功能研究及基因工程猪瘟疫苗的研制提供物质基础。本研究将CSFV E2基因克隆至慢病毒表达载体,构建重组慢病毒表达质粒... 猪瘟病毒(CSFV)的E2蛋白是引起猪体产生针对猪瘟保护性抗体的主要抗原,构建可稳定表达CSFV E2蛋白的细胞系,可为E2蛋白功能研究及基因工程猪瘟疫苗的研制提供物质基础。本研究将CSFV E2基因克隆至慢病毒表达载体,构建重组慢病毒表达质粒pCDH-E2。将pCDH-E2重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,获得重组慢病毒。将该慢病毒感染BHK-21细胞,经嘌呤霉素抗性筛选结合有限稀释法筛选出可表达CSFV E2蛋白的BHK细胞系。Western blot分析结果显示,所构建的重组细胞系传至第10代仍能稳定表达CSFV E2蛋白。该细胞系的建立为研制猪瘟新型重组疫苗及其生产奠定基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 慢病毒 BHK-21细胞

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微载体悬浮培养ST细胞增殖猪瘟兔化弱毒的工艺研究 被引量：2

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作者 漆世华 秦红刚 +4 位作者 韩兴 李晶梅 熊亮 石宝兰 谢红玲 《中国兽药杂志》 2021年第3期64-68,共5页

从细胞接种密度、病毒接毒量、培养基三个方面进行研究和优化,并进行放大培养,建立了猪瘟病毒的微载体悬浮培养工艺:细胞接种密度为每个微载体15个细胞,病毒接毒量0.05 MOI,采用DMEM/F12培养基进行培养和细胞消化瓶批式消化分散细胞,培... 从细胞接种密度、病毒接毒量、培养基三个方面进行研究和优化,并进行放大培养,建立了猪瘟病毒的微载体悬浮培养工艺:细胞接种密度为每个微载体15个细胞,病毒接毒量0.05 MOI,采用DMEM/F12培养基进行培养和细胞消化瓶批式消化分散细胞,培养的细胞可以完成生物反应器10 L到50 L的放大,培养的病毒含量达到7.6 lgTCID 50/mL、不低于400万RID/mL,工艺稳定可靠,为猪瘟疫苗工业化大规模微载体悬浮培养奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒 微载体悬浮培养 ST细胞

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猪圆环病毒3型荧光定量PCR检测方法的建立及其在猪体中的组织分布研究 被引量：2

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作者 薛霜 石宝兰 +6 位作者 徐松 徐丹丹 顾素云 漆世华 李婷婷 冯钊 谢红玲 《中国兽药杂志》 2021年第11期16-21,共6页

为了解猪圆环病毒3型(PCV3)在猪体中的组织分布情况,针对PCV3 Cap蛋白基因设计筛选出一对特异性引物和探针,通过对荧光PCR引物、探针浓度进行优化,建立了基于TaqMan探针实时荧光定量PCR技术的PCV3检测方法,并应用该方法对人工感染PCV3... 为了解猪圆环病毒3型(PCV3)在猪体中的组织分布情况,针对PCV3 Cap蛋白基因设计筛选出一对特异性引物和探针,通过对荧光PCR引物、探针浓度进行优化,建立了基于TaqMan探针实时荧光定量PCR技术的PCV3检测方法,并应用该方法对人工感染PCV3猪的多种组织器官进行病毒含量检测。结果显示,建立的PCV3实时荧光定量PCR检测方法特异性较好且灵敏度高,可检测低至1 copy/μL的PCV3病毒核酸量,而对其他几种常见猪病毒病原的检测结果均为阴性。PCV3主要存在于肺脏、淋巴结,在扁桃体和脾脏中有少量存在。试验表明,所建立的荧光定量PCR检测方法可用于PCV3的快速定量检测,对PCV3在猪体中的组织分布情况的研究为进一步揭示PCV3的组织嗜性和致病机理提供理论依据。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 荧光定量PCR 组织分布

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ST细胞全悬浮培养的驯化及其培养伪狂犬病毒的工艺研究 被引量：2

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作者 漆世华 韩兴 +8 位作者 秦红刚 李晶梅 熊亮 秦伟 谢红玲 郑良益 石宝兰 冯钊 徐新星 《中国兽药杂志》 2021年第4期51-56,共6页

将Siat7e基因转染ST细胞,筛选,驯化得到一株可悬浮培养的ST细胞株,此株细胞能够稳定连续传代,适应无血清、高密度培养,最高密度可达6×10^(6)/mL,从摇瓶放大至生物反应器,生长稳定;采用驯化的全悬浮ST细胞培养伪狂犬病毒,从接毒时... 将Siat7e基因转染ST细胞,筛选,驯化得到一株可悬浮培养的ST细胞株,此株细胞能够稳定连续传代,适应无血清、高密度培养,最高密度可达6×10^(6)/mL,从摇瓶放大至生物反应器,生长稳定;采用驯化的全悬浮ST细胞培养伪狂犬病毒,从接毒时细胞密度、接毒量、收获时间三个方面优化了伪狂犬病毒的培养参数,确定接毒时细胞密度为2.0×10^(6)/mL~3.0×10^(6)/mL,接毒量为0.1 MOI~1 MOI,收毒时间为接毒后24 h~36 h。经过50 L生物反应器3个批次的工艺验证,培养的病毒含量均不低于109.0TCID50/mL,说明驯化的ST全悬浮细胞适合伪狂犬病毒的培养。 展开更多

关键词 ST细胞 悬浮培养 伪狂犬病毒

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全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究 被引量：1

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作者 秦红刚 韩兴 +7 位作者 秦伟 李晶梅 熊亮 余继钦 谢红玲 漆世华 李凌峰 石宝兰 《中国兽药杂志》 2023年第9期7-13,共7页

通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10^(6)/mL~1×10^(6)/mL接种,细胞密度最高达6×10^(6)/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-... 通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10^(6)/mL~1×10^(6)/mL接种,细胞密度最高达6×10^(6)/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为:接毒时细胞密度2×10^(6)/mL~3×10^(6)/mL、接毒量0.1MOI~1MOI、接毒后48h~72h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^(9.25)TCID_(50)/mL。试验鸡分别免疫0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.3mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 LMH细胞 悬浮培养 FAdV-4

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一例肉鸡新城疫与大肠杆菌混感染案例分析 被引量：5

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作者 徐晨麟 徐玉龙 《畜牧兽医杂志》 2020年第4期85-86,共2页

某肉鸡场2000羽肉鸡15日龄突然发病,症状表现为呼吸困难,精神沉郁,并有黄白色稀粪排出,结合临床症状和剖检病变,经实验室检测,综合诊断该肉鸡群为新城疫和大肠杆菌混合感染。本文针对该鸡场发生新城疫和大肠杆菌混合感染后采用的措施加... 某肉鸡场2000羽肉鸡15日龄突然发病,症状表现为呼吸困难,精神沉郁,并有黄白色稀粪排出,结合临床症状和剖检病变,经实验室检测,综合诊断该肉鸡群为新城疫和大肠杆菌混合感染。本文针对该鸡场发生新城疫和大肠杆菌混合感染后采用的措施加以总结,以期为广大同行提供参考。 展开更多

关键词 肉鸡 新城疫病毒 大肠杆菌病 案例分析

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试论标准物质在兽医生物制品质量控制中的应用 被引量：1

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作者 邓永欢 刘绍蒙 《畜禽业》 2021年第11期57-58,共2页

在药品质量监管中,标准物质是药品检定工作展开的基础,是控制、调节药品质量的重要媒介。随着兽用生物制品监督工作的推进,兽医生物制品中标准物质的作用体现也愈加明显。介绍了兽医生物制品与标准物质的概念,阐述了兽医生物制品的标准... 在药品质量监管中,标准物质是药品检定工作展开的基础,是控制、调节药品质量的重要媒介。随着兽用生物制品监督工作的推进,兽医生物制品中标准物质的作用体现也愈加明显。介绍了兽医生物制品与标准物质的概念,阐述了兽医生物制品的标准物质界定及其在兽医生物制品中的质量控制作用,提出相应的完善策略。 展开更多

关键词 兽医 生物制品 标准物质

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表达H5N1亚型禽流感HA、NA、M1基因的重组杆状病毒的鉴定

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作者 李晶梅 陈鲁杰 +6 位作者 王焕君 李改 朱薇 张飞雁 石宝兰 漆世华 谢红玲 《中国兽药杂志》 2021年第12期9-13,共5页

为证实插入了禽流感HA、NA和M1基因的重组杆状病毒(VLP01株)能表达HA、NA和M1蛋白并自行组装成具有禽流感形态的病毒样颗粒,对VLP01株的细胞培养上清进行离心纯化或透析处理,获得的表达产物用电镜、Western Blot、ELISA进行鉴定。电镜... 为证实插入了禽流感HA、NA和M1基因的重组杆状病毒(VLP01株)能表达HA、NA和M1蛋白并自行组装成具有禽流感形态的病毒样颗粒,对VLP01株的细胞培养上清进行离心纯化或透析处理,获得的表达产物用电镜、Western Blot、ELISA进行鉴定。电镜观察表达产物,可见禽流感病毒样颗粒;以Western Blot方法用HA、NA和M1抗体分别检测表达产物,可见特异性条带;以NA多抗为捕获抗体、HA单抗为检测抗体建立双抗体夹心ELISA方法检测表达产物,结果为阳性,说明表达产物为同时含有HA蛋白和NA蛋白的病毒样颗粒。结果显示,VLP01株能够表达HA、NA和M1蛋白,并自行组装成禽流感病毒样颗粒分泌到细胞培养上清中。 展开更多

关键词 重组杆状病毒 禽流感病毒样颗粒 电镜 Western Blot ELISA

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