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利用线性指数PCR-焦磷酸测序技术快速检测3种海洋弧菌
被引量：
3
1
作者
杨会勇
那广水
+3 位作者
朱术会
邹秉杰
奚涛
周国华
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期460-464,共5页
目的:建立一种基于线性指数聚合酶链式反应(linear-after-the-exponential PCR,LATE-PCR)焦磷酸测序技术快速检测致病性海洋弧菌的方法。方法:首先根据海洋弧菌的16S rRNA基因和外膜蛋白K(OmpK)基因的目的片段设计引物并优化反应条件进...
目的:建立一种基于线性指数聚合酶链式反应(linear-after-the-exponential PCR,LATE-PCR)焦磷酸测序技术快速检测致病性海洋弧菌的方法。方法:首先根据海洋弧菌的16S rRNA基因和外膜蛋白K(OmpK)基因的目的片段设计引物并优化反应条件进行LATE-PCR扩增,其次利用酶促反应处理PCR产物中干扰焦磷酸测序反应的副产物,最后加入退火引物后直接进行焦磷酸测序。结果:成功进行了LATE-PCR扩增,制备出足量单链DNA模板供焦磷酸测序反应;取1~2μL的PCR产物即可获得理想的焦磷酸测序信号。测序结果与Sanger法的结果一致,测得序列与GenBank所报道的相符合。通过对16S rRNA基因片段的检测,可以确认样品是否为海洋弧菌;通过对OmpK基因目的片段的检测可以初步区分弧菌种类,对3种常见弧菌:副溶血弧菌、哈维弧菌和溶藻弧菌成功地进行了检测。结论:本方法结果准确,灵敏度高,操作简便且成本低,可快速检测大量样品,在弧菌快速检测和诊断中具有很好的应用前景。
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关键词
海洋弧菌
LATE-PCR
焦磷酸测序
16S
RRNA基因
外膜蛋白K基因
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职称材料
题名
利用线性指数PCR-焦磷酸测序技术快速检测3种海洋弧菌
被引量：
3
1
作者
杨会勇
那广水
朱术会
邹秉杰
奚涛
周国华
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
华东医学生物技术研究所
国家海洋环境监测中心海域生态环境重点实验室
南京大学医学院
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期460-464,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30470454)
日本日立中央研究所资助项目
江苏省自然科学基金资助项目(No.BK2008067)~~
文摘
目的:建立一种基于线性指数聚合酶链式反应(linear-after-the-exponential PCR,LATE-PCR)焦磷酸测序技术快速检测致病性海洋弧菌的方法。方法:首先根据海洋弧菌的16S rRNA基因和外膜蛋白K(OmpK)基因的目的片段设计引物并优化反应条件进行LATE-PCR扩增,其次利用酶促反应处理PCR产物中干扰焦磷酸测序反应的副产物,最后加入退火引物后直接进行焦磷酸测序。结果:成功进行了LATE-PCR扩增,制备出足量单链DNA模板供焦磷酸测序反应;取1~2μL的PCR产物即可获得理想的焦磷酸测序信号。测序结果与Sanger法的结果一致,测得序列与GenBank所报道的相符合。通过对16S rRNA基因片段的检测,可以确认样品是否为海洋弧菌;通过对OmpK基因目的片段的检测可以初步区分弧菌种类,对3种常见弧菌:副溶血弧菌、哈维弧菌和溶藻弧菌成功地进行了检测。结论:本方法结果准确,灵敏度高,操作简便且成本低,可快速检测大量样品,在弧菌快速检测和诊断中具有很好的应用前景。
关键词
海洋弧菌
LATE-PCR
焦磷酸测序
16S
RRNA基因
外膜蛋白K基因
Keywords
Vibrios
LATE-PCR
pyrosequencing
16S rRNA gene
OmpK gene
分类号
S941 [农业科学—水产养殖]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用线性指数PCR-焦磷酸测序技术快速检测3种海洋弧菌
杨会勇
那广水
朱术会
邹秉杰
奚涛
周国华
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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