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对虾白斑综合症病毒vp15基因的RNA干扰研究
被引量：
6
1
作者
张衡
谷力
杨丰
《台湾海峡》
CAS
CSCD
2012年第1期47-52,共6页
VP15是对虾白斑综合症病毒(WSSV)的一种核衣壳蛋白,以往的研究表明VP15属DNA结合蛋白,具有潜在的浓缩包装病毒基因组的功能.利用RNAi技术将vp15基因沉默,来研究vp15基因沉默后对WSSV增殖及结构的影响.体外合成了vp15基因的特异双链RNA(v...
VP15是对虾白斑综合症病毒(WSSV)的一种核衣壳蛋白,以往的研究表明VP15属DNA结合蛋白,具有潜在的浓缩包装病毒基因组的功能.利用RNAi技术将vp15基因沉默,来研究vp15基因沉默后对WSSV增殖及结构的影响.体外合成了vp15基因的特异双链RNA(vp15-dsRNA)和非特异双链RNA(gfp-dsRNA),分别与WSSV混合共注射淡水原克氏螯虾.在感染后24、36、48 h,每个实验组分别取病虾步足肌肉,样品用Trizol试剂盒提取RNA用于RT-PCR检测、用病毒检测试剂盒提取DNA模板用于荧光定量PCR分析.另外每组随机选取1只虾,取中肠,用于树脂包埋组织超薄切片分析.逆转录PCR分析结果显示vp15-dsRNA能特异性敲除vp15基因转录表达,实时荧光定量PCR分析结果显示vp15-dsRNA干扰vp15基因的表达能有效抑制WSSV病毒粒子的增值.此外,利用树脂包埋组织超薄切片电子显微镜技术观察发现vp15基因被干扰后病毒粒子数量上明显降低并且引起病毒粒子包装异常.通过vp15基因特异dsRNA干扰,有效抑制了WSSV病毒增殖,此外进一步阐明VP15蛋白的功能及其在病毒组装方面的重要作用,对进一步了解病毒组装以及病毒防治具有重要的意义.
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关键词
海洋生物学
对虾白斑综合症
DNA结合蛋白
vp15基因
RNA干扰
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职称材料
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(福建株)基因组的克隆
被引量：
5
2
作者
吴昊
徐丽美
杨丰
《台湾海峡》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期147-151,共5页
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是世界各地养殖和野生对虾的重要病原之一.目前,GenBank已收录了分离自夏威夷、加利福尼亚、泰国、中国台湾等地的IHHNV全长或部分基因组序列.虽然中国大陆在养殖对虾中也普遍检测到了IHHNV,但...
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是世界各地养殖和野生对虾的重要病原之一.目前,GenBank已收录了分离自夏威夷、加利福尼亚、泰国、中国台湾等地的IHHNV全长或部分基因组序列.虽然中国大陆在养殖对虾中也普遍检测到了IHHNV,但未见其基因组序列报道.本文首先利用DNA末端加尾和嵌套PCR克隆了IHHNV基因组两末端序列,并根据测定的末端序列设计引物,PCR扩增出中国福建株IHHNV基因组序列.
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关键词
传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)
嵌套PCR
病毒基因组
5’和3’末端序列
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职称材料
题名
对虾白斑综合症病毒vp15基因的RNA干扰研究
被引量：
6
1
作者
张衡
谷力
杨丰
机构
国家海洋局第三海洋研究所
、
生物
遗传
资源
重点
实验室
出处
《台湾海峡》
CAS
CSCD
2012年第1期47-52,共6页
基金
国家农业部虾现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(nycytx-46)
国家海洋局第三海洋研究所基本科研业务费专项资金资助项目(2009044)
文摘
VP15是对虾白斑综合症病毒(WSSV)的一种核衣壳蛋白,以往的研究表明VP15属DNA结合蛋白,具有潜在的浓缩包装病毒基因组的功能.利用RNAi技术将vp15基因沉默,来研究vp15基因沉默后对WSSV增殖及结构的影响.体外合成了vp15基因的特异双链RNA(vp15-dsRNA)和非特异双链RNA(gfp-dsRNA),分别与WSSV混合共注射淡水原克氏螯虾.在感染后24、36、48 h,每个实验组分别取病虾步足肌肉,样品用Trizol试剂盒提取RNA用于RT-PCR检测、用病毒检测试剂盒提取DNA模板用于荧光定量PCR分析.另外每组随机选取1只虾,取中肠,用于树脂包埋组织超薄切片分析.逆转录PCR分析结果显示vp15-dsRNA能特异性敲除vp15基因转录表达,实时荧光定量PCR分析结果显示vp15-dsRNA干扰vp15基因的表达能有效抑制WSSV病毒粒子的增值.此外,利用树脂包埋组织超薄切片电子显微镜技术观察发现vp15基因被干扰后病毒粒子数量上明显降低并且引起病毒粒子包装异常.通过vp15基因特异dsRNA干扰,有效抑制了WSSV病毒增殖,此外进一步阐明VP15蛋白的功能及其在病毒组装方面的重要作用,对进一步了解病毒组装以及病毒防治具有重要的意义.
关键词
海洋生物学
对虾白斑综合症
DNA结合蛋白
vp15基因
RNA干扰
Keywords
marine biology
shrimp white spot syndrome virus （ WSSV）
DNAbinding protein
vpl5 gene
RNAinterference
分类号
P735 [天文地球—海洋生物学]
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职称材料
题名
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(福建株)基因组的克隆
被引量：
5
2
作者
吴昊
徐丽美
杨丰
机构
国家海洋局第三海洋研究所生物遗传资源重点实验室
出处
《台湾海峡》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期147-151,共5页
基金
福建省科技厅重大专项资助项目(2004NZ03-1)
908专项资助项目(908-02-ZH3)
文摘
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是世界各地养殖和野生对虾的重要病原之一.目前,GenBank已收录了分离自夏威夷、加利福尼亚、泰国、中国台湾等地的IHHNV全长或部分基因组序列.虽然中国大陆在养殖对虾中也普遍检测到了IHHNV,但未见其基因组序列报道.本文首先利用DNA末端加尾和嵌套PCR克隆了IHHNV基因组两末端序列,并根据测定的末端序列设计引物,PCR扩增出中国福建株IHHNV基因组序列.
关键词
传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)
嵌套PCR
病毒基因组
5’和3’末端序列
Keywords
infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus （IHHNV）
nested PCR
viral genome
5＇ and 3＇ ends sequence
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
对虾白斑综合症病毒vp15基因的RNA干扰研究
张衡
谷力
杨丰
《台湾海峡》
CAS
CSCD
2012
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(福建株)基因组的克隆
吴昊
徐丽美
杨丰
《台湾海峡》
CAS
CSCD
北大核心
2008
5
在线阅读
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职称材料
已选择
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参考文献
引证文献
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