海洋产油真菌的简便初筛 被引量：6

1

作者 秦艳红 叶德赞 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期128-134,共7页

选取分离自大洋、深海的28株酵母和143株霉菌,采用在培养基中添加尼罗红比较表观荧光强度的方法来筛选出酵母2株和霉菌7株,但菌体呈红色的酵母(17株)及菌丝为黑色的霉菌(28株)不适用于此法;通过单位OD600荧光强度的高低筛选出1株菌落为... 选取分离自大洋、深海的28株酵母和143株霉菌,采用在培养基中添加尼罗红比较表观荧光强度的方法来筛选出酵母2株和霉菌7株,但菌体呈红色的酵母(17株)及菌丝为黑色的霉菌(28株)不适用于此法;通过单位OD600荧光强度的高低筛选出1株菌落为微红色的酵母,产油性能好于用第一种方法挑选出的2株酵母,且菌体颜色对结果并无影响,但只适合筛选酵母.通过上述2种方法筛选出高油脂菌株,大多来源于深海. 展开更多

关键词 海洋生物学 尼罗红 海洋 油脂真菌 脂肪酸 方法

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温度影响对虾白斑综合症病毒增殖机制的研究 被引量：10

2

作者 李侃 罗淑娅 徐丽美 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2013年第1期61-66,共6页

已有文献报道温度是影响虾类感染对虾白斑综合症病毒(WSSV)的重要因素但并不清楚其机制.在本实验中我们通过定量检测病毒拷贝数后发现环境温度与病毒增殖速度有相关性.当温度在21～30℃之间时病毒增殖速度最快,病虾于感染后6～8 d全部... 已有文献报道温度是影响虾类感染对虾白斑综合症病毒(WSSV)的重要因素但并不清楚其机制.在本实验中我们通过定量检测病毒拷贝数后发现环境温度与病毒增殖速度有相关性.当温度在21～30℃之间时病毒增殖速度最快,病虾于感染后6～8 d全部死亡而高温(33℃)及较低温度(15～18℃)对病毒的增殖均具有一定的抑制作用,虾存活时间超过了14 d;当温度降至12℃或8℃时病毒增殖受到明显抑制,虾存活时间长达40 d.通过激光共聚焦显微镜观察进一步发现病毒进入宿主细胞的能力与温度密切相关,高温(33℃)和低温(12℃)下病毒进入细胞的数量明显比27℃时少;而通过对病毒ie1和vp28基因的转录分析发现与27℃相比,高温(33℃)和低温(12℃)明显改变了病毒基因的转录.本实验结果表明温度影响WSSV基因组的复制、转录及病毒入侵细胞的能力从而导致了病虾死亡时间上的差异. 展开更多

关键词 海洋生物学 对虾白斑综合症病毒 温度 ie1 VP28

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三大洋深海沉积物样品可培养真菌多样性研究 被引量：4

3

作者 徐炜 李广伟 +1 位作者 黄翔玲 骆祝华 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期103-110,共8页

深海真菌是深海微生物的重要组成之一,在深海环境生态系统中起着非常重要的作用,但目前人们对于深海沉积物中的真菌群落多样性关注较少.本研究对来自东太平洋、南大西洋和西南印度洋(三大洋)的15个沉积物样品进行真菌的分离培养,共获得... 深海真菌是深海微生物的重要组成之一,在深海环境生态系统中起着非常重要的作用,但目前人们对于深海沉积物中的真菌群落多样性关注较少.本研究对来自东太平洋、南大西洋和西南印度洋(三大洋)的15个沉积物样品进行真菌的分离培养,共获得175株真菌,包括93株酵母菌和82株丝状真菌.基于形态学观察和ITS序列的系统发育分析显示,93株酵母分别属于红冬孢酵母属(Rhodosporidium)和胶红酵母属(Rhodotorula)的两个种[海洋红酵母(Rhodosporidium paludigenum)和胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)].82株丝状真菌分别属于曲霉属(Aspergillus)、枝孢属(Cladosporium)、青霉属(Penicillium)、链格孢属(Alternaria)、镰刀菌(Fusarium)、支顶孢属(Acremonium)、茎点霉属(Phoma)、麦轴梗霉属(Tritirachium)、毛壳菌属(Chaetomium)、外瓶霉属(Exophiala)、侧齿霉属(Engyodontium)、肉片齿菌属(Sistotrema)、裂褶菌属(Schizophyllum)、腥掷抱菌属(Tilletiopsis)和Hormonema.其中曲霉属为丝状真菌中的优势属,占总菌株的47.6%.上述研究结果表明大洋深海沉积物中存在着较为丰富的真菌资源,有助于加深我们对于不同大洋区域深海环境中真菌群落结构的认识. 展开更多

关键词 海洋生物学 深海沉积物 可培养真菌 多样性 ITS序列

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Taqman-MGB探针荧光定量PCR方法检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的研究 被引量：1

4

作者 徐丽美 李福英 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2013年第1期133-137,共5页

本文根据GenBank中对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)基因组上的保守序列,采用Taqman-MGB荧光定量PCR方法,设计了一组特异性引物和探针.利用阳性标准模板进行了定量PCR条件的优化研究.结果显示,在101～108拷贝范围内标准曲线的... 本文根据GenBank中对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)基因组上的保守序列,采用Taqman-MGB荧光定量PCR方法,设计了一组特异性引物和探针.利用阳性标准模板进行了定量PCR条件的优化研究.结果显示,在101～108拷贝范围内标准曲线的线性关系为R=0.999 4,检测灵敏度达到10拷贝,重复检测的变异系数均小于2%.利用上述建立的方法和条件,测定39份不同来源的对虾样品中IHHNV,检出率为49%.因此所建立的荧光定量PCR具有较高的灵敏度、特异性和重复性,可作为IHHNV快速的定量检测方法. 展开更多

关键词 海洋生物学 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV) 荧光定量PCR TAQMAN-MGB探针

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白斑综合症病毒(WSSV)感染对虾的途径及滴度研究 被引量：4

5

作者 戴俊逸 李文婷 杨丰 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2013年第1期67-72,共6页

本研究利用荧光定量PCR技术,开展了白斑综合征病毒(WSSV)感染途径及染病最低病毒浓度的研究.用病毒分别感染对虾的口腔、鳃、背部甲壳和腹部软壳24 h后,利用qPCR测定血液中的病毒拷贝数,结果显示病毒主要通过口腔和鳃入侵宿主,并通过血... 本研究利用荧光定量PCR技术,开展了白斑综合征病毒(WSSV)感染途径及染病最低病毒浓度的研究.用病毒分别感染对虾的口腔、鳃、背部甲壳和腹部软壳24 h后,利用qPCR测定血液中的病毒拷贝数,结果显示病毒主要通过口腔和鳃入侵宿主,并通过血液循环进行全身感染,但病毒不能穿过对虾的体表引起感染.此外,将对虾分别放在含不同病毒粒子浓度(101、102、103、104、105个/dm3)或含核衣壳的海水中培养,发现当海水中病毒粒子浓度低于102个/dm3时,对虾没有感染病毒,当浓度达到103个/dm3以上时能引起对虾感染.结果暗示103个/dm3是引起对虾感染的最低病毒粒子浓度,而核衣壳则不具有感染性. 展开更多

关键词 海洋生物学 白斑综合症病毒(WSSV) 定量PCR 感染途径

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深海细菌Pseudomonas sp.bIp-2黑色素生成条件研究及其hppD基因的克隆 被引量：2

6

作者 韦海镧 于丽波 +1 位作者 易志伟 汤熙翔 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2014年第4期499-507,共9页

从大西洋深海沉积物中分离得到1株产黑色素细菌b Ip-2,16S rRNA基因序列分析表明该菌隶属于假单胞菌属（Pseudomonas）,与施氏假单胞菌（P.stutzeri）有最高的16S rRNA基因序列相似性（99%）.进一步对该菌的生长及产黑色素条件进行了初... 从大西洋深海沉积物中分离得到1株产黑色素细菌b Ip-2,16S rRNA基因序列分析表明该菌隶属于假单胞菌属（Pseudomonas）,与施氏假单胞菌（P.stutzeri）有最高的16S rRNA基因序列相似性（99%）.进一步对该菌的生长及产黑色素条件进行了初步研究,结果表明b Ip-2在稳定生长期后期才开始大量积累黑色素;b Ip-2可在4～37℃的温度范围下生长,最适生长温度为37℃,在28℃具有最高的黑色素产量;b Ip-2生长的pH范围偏碱性,在p H=7的最适生长条件下黑色素产量最高,同时碱性环境有利于黑色素的快速形成;b Ip-2可以在1%～9%的NaCl浓度范围中生长,在5%的NaCl浓度下具有最高的黑色素产量;低浓度的Fe^2＋（0.05 mmol/dm^3）可以提高黑色素的产量,Fe^2＋浓度≥0.20 mmol/dm^3时明显抑制黑色素的生成,而Fe^2＋浓度为1.00 mmol/dm^3时可完全抑制菌株的生长;低浓度的Cu^2＋（0.1 mmol/dm^3）对黑色素的产量无明显影响,Cu^2＋浓度≥0.5mmol/dm^3时可抑制黑色素的生成,而Cu^2＋浓度超过1.0 mmol/dm^3时可完全抑制菌株的生长.通过PCR扩增获得菌株b Ip-2的对羟苯基丙酮酸双加氧酶（hydroxyphenylpyruvic acid dioxygenase,HPPD）全长基因（1087 bp）,分析发现其编码的HPPD蛋白序列（含361氨基酸）与来自菌株Pseudomonas stutzeri RCH2的HPPD蛋白序列具有最高的同源性（序列相似性为97%）.这些结果为深入研究该细菌所产黑色素的合成,应用及生态作用奠定了基础. 展开更多

关键词 海洋生物学 黑色素 类黑素 对羟苯基丙酮酸双加氧酶 假单胞菌

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白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28单链抗体的酵母表面展示及其抗病毒特性的初步研究 被引量：1

7

作者 施泓 阮灵伟 《台湾海峡》 CAS CSCD 2012年第3期368-374,共7页

白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾养殖业中危害最大的病原微生物之一,对对虾养殖业造成了巨大的经济损失,但目前尚无有效防治手段.本研究从WSSV囊膜蛋白VP28免疫的小鼠细胞中分别扩增到重链可变区基因和轻链可变... 白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾养殖业中危害最大的病原微生物之一,对对虾养殖业造成了巨大的经济损失,但目前尚无有效防治手段.本研究从WSSV囊膜蛋白VP28免疫的小鼠细胞中分别扩增到重链可变区基因和轻链可变区基因,大小为351 bp和342 bp.两基因序列通过Linker序列连接后,构建到酵母表面载体pYD1中,得到重组质粒pYD1-vp28scfv.将该重组质粒在酿酒酵母EBY100中诱导表达,通过免疫荧光实验发现,重组蛋白VP28scFv在酿酒酵母EBY100表面实现展示.进一步通过结合实验表明该展示蛋白具有WSSV的结合活性.本研究在结合酿酒酵母可作为饲料添加剂的特性基础上,对WSSV囊膜蛋白VP28单链抗体的抗病毒特性进行了应用,从而为WSSV的防治提供了新思路. 展开更多

关键词 海洋生物学 白斑综合症病毒(WSSV) VP28 单链抗体(scFv) 酵母细胞表面展示 免疫荧光

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南大西洋深海沉积物中可培养放线菌的多样性 被引量：6

8

作者 张玉便 张改云 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2014年第4期508-515,共8页

探究了南大西洋深海沉积物中可培养放线菌的多样性,筛选药源活性次级代谢产物产生菌,为后续资源开发奠定基础.采用3种预处理方法及8种选择性培养基对南大西洋3个深海沉积物样品中的放线菌菌株进行选择性分离鉴定;利用兼并引物扩增法,选... 探究了南大西洋深海沉积物中可培养放线菌的多样性,筛选药源活性次级代谢产物产生菌,为后续资源开发奠定基础.采用3种预处理方法及8种选择性培养基对南大西洋3个深海沉积物样品中的放线菌菌株进行选择性分离鉴定;利用兼并引物扩增法,选取代表菌株进行聚酮合酶(PKSⅠ、PKSⅡ)基因和非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因的检测;以4株细菌为指示菌检测代表菌株的抑菌活性.共分离得到132株放线菌纯菌株,分布于放线菌亚纲的6个目、13个科、19个属中,其中有5个属为较新或较稀有种属,有2株为潜在新种.34株化合物合成基因检测菌中PKSⅠ基因、PKSⅡ基因呈阳性的比率均为17.64%,NRPS基因呈阳性的则为52.94%.抗枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和抗副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的菌株分别有47.06%和7.82%.南大西洋深海沉积物中放线菌资源丰富,存在较多潜在新分类单元,筛选到的活性菌株可用于后续药源活性次级代谢产物的分离. 展开更多

关键词 海洋生物学 放线菌 深海 多样性 功能基因

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深海热液区管状蠕虫Ridgeia piscesae中Ricin B-lectin型结构域基因的克隆与表达

9

作者 徐海鹏 阮灵伟 崔治中 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2014年第4期525-530,共6页

作为一种重要的模式识别因子,凝集素在多个领域中均有着广泛的应用价值,因此,开发和利用新型凝集素将具有重要意义.本研究以生活在深海热液区极端环境条件下的管状蠕虫Ridgeia piscesae为材料,首次从管状蠕虫中克隆获得Ricin B-lectin基... 作为一种重要的模式识别因子,凝集素在多个领域中均有着广泛的应用价值,因此,开发和利用新型凝集素将具有重要意义.本研究以生活在深海热液区极端环境条件下的管状蠕虫Ridgeia piscesae为材料,首次从管状蠕虫中克隆获得Ricin B-lectin基因rgal.序列分析表明,RGAL与已知序列的相似性较低,其含有2个Ricin B-lectin型结构域,并且该结构域具有该家族所特有的β-三叶草形三维结构.多方面的分析结果显示RGAL可能是一个新颖的凝集素蛋白.对RGAL进行了原核重组表达,并对其复性条件进行了摸索优化,成功获得了其可溶性表达产物,为后续RGAL的生物活性分析奠定了坚实的基础. 展开更多

关键词 海洋生物学 凝集素 RICIN B-lectin结构域 管状蠕虫Ridgeia piscesae 克隆表达

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深海细菌Flammeovirga pacifica降解龙须菜产寡糖反应条件的优化 被引量：7

10

作者 万玮 高超 +1 位作者 产竹华 曾润颖 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2013年第4期584-590,共7页

利用单因素和正交试验对深海细菌太平洋火色杆菌(Flammeovirga pacifica)降解龙须菜产海藻寡糖的发酵条件进行了优化.优化后的发酵条件:龙须菜含量为3.0%(m/m),龙须菜颗粒大小为60目,NaCl含量为1.0%(m/m),接种量为5.0%(V/V),pH值为6.5,... 利用单因素和正交试验对深海细菌太平洋火色杆菌(Flammeovirga pacifica)降解龙须菜产海藻寡糖的发酵条件进行了优化.优化后的发酵条件:龙须菜含量为3.0%(m/m),龙须菜颗粒大小为60目,NaCl含量为1.0%(m/m),接种量为5.0%(V/V),pH值为6.5,温度为37℃,培养时间为42 h.优化后发酵液寡糖含量达到3.83 g/dm3,提高了52.3%,优化效果显著.采用优化后的条件进一步进行5 dm3发酵罐分批发酵,寡糖的含量达到3.53 g/dm3.优化后的发酵条件明显提高了寡糖的产量,由于此发酵条件只需在培养基中添加龙须菜和NaCl等营养物,该条件下生产寡糖比现有工艺具有明显的优势.本文利用深海菌株Flammeovirga pacifica降解龙须菜的机制,为龙须菜寡糖的生产提供了简单低廉的酶解工艺,为海藻寡糖的工业生产奠定了技术基础. 展开更多

关键词 海洋生物学 深海细菌 龙须菜 寡糖 降解 发酵条件优化

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基于16S rDNA和看家基因序列分析技术的鲍鱼养殖水体弧菌种类的鉴定 被引量：4

11

作者 龚婷 骆祝华 +1 位作者 于艳萍 JOST Gunter 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2014年第4期531-538,共8页

采用TCBS选择性培养基从厦门某鲍鱼养殖场的养殖水体中分离到19株细菌.经16S rDNA序列分析,所有菌株均属于弧菌属(Vibrio),且与最近似的弧菌模式种的同源性都在98.99%以上.由于弧菌种间16S rDNA序列相似度极高,无法仅靠16S rDNA序列比... 采用TCBS选择性培养基从厦门某鲍鱼养殖场的养殖水体中分离到19株细菌.经16S rDNA序列分析,所有菌株均属于弧菌属(Vibrio),且与最近似的弧菌模式种的同源性都在98.99%以上.由于弧菌种间16S rDNA序列相似度极高,无法仅靠16S rDNA序列比对来鉴定这些菌株到种的水平.16S rDNA序列的系统发育分析也显示,大多数菌株与弧菌模式种无法归为一簇,表明16S rDNA基因在弧菌种的分类鉴定上分辨率不高.进一步采用基于4种看家基因(rpo A、pyr H、gap A和top A)的多位点序列分析技术(MLSA)对分离到的弧菌菌株进行分类鉴定,结果显示19株海洋弧菌归于溶藻弧菌(Vibrio alginalyticus)与魔鬼弧菌(Vibrio diabolicus)2个种,表明这两种弧菌是该鲍鱼养殖场水体环境中的优势弧菌种,在鲍鱼养殖弧菌病害防治方面需要重点关注.此外,看家基因与16S rDNA基因的多态性分析表明,4种看家基因的多态位点比率均高于16S rDNA.4种看家基因串联后的多态位点比率高达41.1%,远高于16S r DNA基因的13.4%,表明看家基因相较于16S rDNA基因有着更高的分辨率,更适合于海洋弧菌的分类鉴定. 展开更多

关键词 海洋生物学 鲍鱼 海洋弧菌 16S RDNA 看家基因 多位点序列分析

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东太平洋海隆深海热液区沉积物古菌多样性分析 被引量：8

12

作者 刘青 谢运标 +1 位作者 陈逍遥 周梅先 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2014年第4期516-524,共9页

采用PCR-RFLP方法对东太平洋海隆深海热液区3个站位沉积物中的古菌多样性进行了初步研究.结果显示,从古菌16S rRNA基因文库中随机挑取的296个阳性克隆分属奇古菌门(Thaumarchaeota,47.64%)、广古菌门(Euryarchaeota,44.93%)、泉古菌门(C... 采用PCR-RFLP方法对东太平洋海隆深海热液区3个站位沉积物中的古菌多样性进行了初步研究.结果显示,从古菌16S rRNA基因文库中随机挑取的296个阳性克隆分属奇古菌门(Thaumarchaeota,47.64%)、广古菌门(Euryarchaeota,44.93%)、泉古菌门(Crenarchaeota,6.77%)和未分类古菌(0.68%),其中优势菌群为奇古菌门的亚硝化侏儒菌属(Nitrosopumilus,35.47%)和广古菌门的热原体纲(Thermoplasmata,27.03%),DHVE3、DHVE5、DHVE6、MBGB和MBGE类群在沉积物样品中也均有发现.另外,3个站位沉积物中古菌类群组成存在差异,S5-TVG1站位样品文库的97个古菌克隆分属奇古菌门(49.48%)、广古菌门(49.48%)和泉古菌门(1.03%),S14-TVG10站位样品文库的103个古菌克隆由奇古菌门(84.47%)和广古菌门(15.53%)组成,S16-TVG12站位样品文库的96个古菌克隆包括广古菌门(71.88%)、泉古菌门(19.79%)、奇古菌门(6.25%)和未分类古菌(2.08%).研究结果表明,东太平洋海隆深海热液区沉积物中古菌多样性丰富,存在着许多新的古菌菌群;不同站位古菌菌群结构以及多样性存在差异,这与其所处环境的热液活动密切相关. 展开更多

关键词 海洋生物学 东太平洋海隆 深海热液区 沉积物 古菌多样性 PCR-RFLP分析

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大黄鱼过氧化物酶Ⅳ在人胚肾细胞中的表达与抗氧化活性测定

13

作者 王贤慧 母尹楠 +2 位作者 聂品 陈新华 敖敬群 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2014年第4期492-498,共7页

为了研究大黄鱼(Pseudosciana crocea)peroxiredoxin Ⅳ(Lyc-Prx Ⅳ)在细胞内的抗氧化功能,构建了表达大黄鱼Prx Ⅳ的重组质粒p CMV-Lyc-Prx Ⅳ,瞬时转染人胚肾细胞(HEK-293T),利用Western blotting方法检测转染后的细胞样品中Lyc-Prx ... 为了研究大黄鱼(Pseudosciana crocea)peroxiredoxin Ⅳ(Lyc-Prx Ⅳ)在细胞内的抗氧化功能,构建了表达大黄鱼Prx Ⅳ的重组质粒p CMV-Lyc-Prx Ⅳ,瞬时转染人胚肾细胞(HEK-293T),利用Western blotting方法检测转染后的细胞样品中Lyc-Prx Ⅳ的表达情况,并通过测定细胞内过氧化氢浓度来评价Lyc-Prx IV的体内抗氧化作用.结果显示,Lyc-Prx Ⅳ可在转染重组质粒p CMV-Lyc-Prx Ⅳ的HEK-293T细胞中表达,且细胞中A560处的吸光值在转染后6、12、24 h后分别为0.154、0.116以及0.162,而瞬时转染空载体p CMV后细胞样品在A560处的吸光值在转染后一直稳定在0.260左右,说明细胞中过氧化氢的浓度在转染后6、12、24 h时明显低于瞬时转染空载体p CMV细胞中的过氧化氢浓度(p<0.01).表明Lyc-Prx Ⅳ在生物体内可以分解过氧化氢,参与生物体内氧化还原状况的调控. 展开更多

关键词 海洋生物学 大黄鱼 过氧化物酶IV 细胞表达 过氧化氢

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凡纳滨对虾消化道中白斑综合症病毒主要靶器官的鉴定

14

作者 李文婷 戴俊逸 +1 位作者 李钫 杨丰 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期97-102,共6页

白斑综合症病毒（white spot syndrome virus,WSSV）是对虾养殖业中最具破坏力的致病病毒.本实验用含WSSV的克氏原螯虾（Procambarus clarkii）肌肉投喂健康凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）,模拟自然条件下对虾经摄食感染WSSV的过程... 白斑综合症病毒（white spot syndrome virus,WSSV）是对虾养殖业中最具破坏力的致病病毒.本实验用含WSSV的克氏原螯虾（Procambarus clarkii）肌肉投喂健康凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）,模拟自然条件下对虾经摄食感染WSSV的过程.在口服攻毒后不同时间分别取消化系统的不同器官通过荧光定量PCR测定各器官中病毒的拷贝数,发现攻毒后12~24 h病毒在食道或中肠中的病毒量仅增加了3~5倍,而在贲门胃和幽门胃中的病毒量增加了100倍以上.进一步的扫描电镜分析表明,病毒粒子对贲门胃和幽门胃内壁均具有很强的粘附能力,而对食道和中肠内壁的粘附能力很弱,且脱去了囊膜的WSSV核衣壳失去了与对虾消化道粘附的能力.以上结果说明WSSV经摄食后主要入侵的靶器官是胃,且病毒囊膜蛋白在病毒与宿主消化道器官的相互作用中起到了重要的作用. 展开更多

关键词 海洋生物学 白斑综合症病毒(WSSV) 荧光定量PCR 扫描电镜 凡纳滨对虾 靶器官

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