气动生物反应器油松胚性愈伤增殖体系的建立研究 被引量：1

1

作者 李亦轩 赵健 +5 位作者 付双彬 董明亮 杨硕 李珊珊 Kong Lisheng 张金凤 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期37-43,共7页

【目的】大量具有活性的胚性愈伤组织的增殖可为油松体细胞胚胎发生研究和植株再生提供充足的材料,锥形瓶悬浮培养体系下胚性愈伤组织的增殖率低且易酸化坏死,建立气动生物反应器油松胚性愈伤增殖体系可促进油松胚性愈伤组织的增殖。【... 【目的】大量具有活性的胚性愈伤组织的增殖可为油松体细胞胚胎发生研究和植株再生提供充足的材料,锥形瓶悬浮培养体系下胚性愈伤组织的增殖率低且易酸化坏死,建立气动生物反应器油松胚性愈伤增殖体系可促进油松胚性愈伤组织的增殖。【方法】本研究以油松愈伤组织为材料,利用L9(34)正交试验设计,探究了生物反应器中愈伤接种量、新旧培养基的配比和激素浓度3个因素对愈伤组织增殖的影响,建立了增殖体系。而后在相同条件下与锥形瓶悬浮培养进行对比。【结果】结果表明:气动生物反应器中每100 mL液体培养基内接种胚性愈伤10 g,2,4-D 0.2 mg/L,保留20%的旧培养基时能使胚性愈伤增殖率达到最高,可达216.18%;【结论】与锥形瓶悬浮培养体系相比,ALB系统在一周内胚性愈伤生长速度更快,为锥形瓶悬浮培养体系的3.15倍;显微观察显示增殖的胚性愈伤组织稳定且优质。该研究为基于油松体胚体系的大规模扩繁提供技术支持。 展开更多

关键词 油松 生物反应器 胚性愈伤组织

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银杏黄酮苷和萜类内酯含量的季节变化 被引量：23

2

作者 冷平生 王天华 +2 位作者 苏淑钗 蒋湘宁 王沙生 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2001年第3期15-18,共4页

以银杏 (GinkgobilobaL .) 2年生实生苗和大树为试材 ,分析根、茎和叶中银杏黄酮苷及萜类内酯含量的季节变化规律。银杏叶中萜类内酯含量从春季起逐渐增加 ,至夏末秋初达最高值 ,随后逐渐减少 ;根和茎中萜类内酯含量的季节变化与叶中相... 以银杏 (GinkgobilobaL .) 2年生实生苗和大树为试材 ,分析根、茎和叶中银杏黄酮苷及萜类内酯含量的季节变化规律。银杏叶中萜类内酯含量从春季起逐渐增加 ,至夏末秋初达最高值 ,随后逐渐减少 ;根和茎中萜类内酯含量的季节变化与叶中相类似 ,但在冬季休眠期维持较高含量 ,进入春季伴随叶的萌发生长降低到全年的最低点。银杏茎中萜类内酯含量最低 ,相当于叶含量的 1/3和根含量的 1/2。叶中白果内酯含量在总萜类内酯中所占比例较高 ,而在根和茎中所占比例则较低。随着树龄增加 ,银杏叶萜类内酯含量下降 ,这可能与萜类内酯合成能力下降有关。银杏黄酮苷含量在春季幼叶中最高 ,夏季和秋季相对较低且变化不明显 ;长枝叶中槲皮素较多 ,而短枝叶中山柰黄素较多。 展开更多

关键词 黄酮苷 萜类内酯 季节变化 含量变化 叶用银杏

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光强与光质对银杏光合作用及黄酮苷与萜类内酯含量的影响 被引量：85

3

作者 冷平生 苏淑钗 +2 位作者 王天华 蒋湘宁 王沙生 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2002年第1期1-4,共4页

对 2年生银杏 (GinkgobilobaL .)苗进行遮荫和光膜处理 ,测定光合速率及碳水化合物、银杏黄酮苷与萜类内酯的含量。光合速率在自然光下测定时从大到小依次为 :黄膜 >蓝膜和红膜 >绿膜 >紫膜和白膜 ,在光膜下测定时为 :黄膜 >... 对 2年生银杏 (GinkgobilobaL .)苗进行遮荫和光膜处理 ,测定光合速率及碳水化合物、银杏黄酮苷与萜类内酯的含量。光合速率在自然光下测定时从大到小依次为 :黄膜 >蓝膜和红膜 >绿膜 >紫膜和白膜 ,在光膜下测定时为 :黄膜 >红膜 >蓝膜、紫膜和白膜 >绿膜。光强和光质对碳水化合物含量有显著影响。光质对萜类内酯的生物合成和积累有影响 ,紫膜处理的银杏萜类内酯含量最高 ,为 3 89mg/g,比白膜 (对照 )高 85 2 3% ,其次是绿膜 ,为2 80mg/g。覆膜和遮荫显著减少银杏黄酮苷含量 。 展开更多

关键词 银杏 光合作用 黄酮苷 萜类内酯 含量 光照

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胡杨液泡膜微囊的纯化及其质子转运活性 被引量：8

4

作者 刘群录 张旭家 +3 位作者 李义 王沙生 黄有国 蒋湘宁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第3期372-376,共5页

为进一步研究液泡膜及 H+ - ATP酶在胡杨抵御盐胁迫中所起的作用 ,比较了研磨、捣碎和超声破碎三种细胞破碎方法 ,从悬浮培养的胡杨细胞中制备液泡膜微囊的效果 ;并用差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心纯化了胡杨液泡膜微囊 .通过测定 H... 为进一步研究液泡膜及 H+ - ATP酶在胡杨抵御盐胁迫中所起的作用 ,比较了研磨、捣碎和超声破碎三种细胞破碎方法 ,从悬浮培养的胡杨细胞中制备液泡膜微囊的效果 ;并用差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心纯化了胡杨液泡膜微囊 .通过测定 H+ - ATP酶对 NO-3 、VO3-4和 Na N3的敏感性 ,以及焦磷酸酶质子转运活性表明 ,液泡膜微囊主要分布在 0 %～ 2 5%的蔗糖界面上 .捣碎法破碎细胞结合差速离心和蔗糖密度梯度离心可获得正向微囊比例高。 展开更多

关键词 H+-ATP酶 质子泵活性 胡杨 液泡膜微囊 抗盐机理

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741杨生长与木材品质特性 被引量：6

5

作者 田晓明 谢进 +5 位作者 屈龙 刘士畅 李建梅 杜洪双 蒋湘宁 盖颖 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第3期129-135,共7页

对741杨的生长节律、细胞壁化学组成、解剖结构、物理力学性质进行观察和测定。结果表明:741杨生长持续期长,生长速度快,株高、茎粗和单株材积生长量在生长旺季具有速生的特点;在扫描电子显微镜下观察,741杨纤维细胞壁较薄,断面形状多... 对741杨的生长节律、细胞壁化学组成、解剖结构、物理力学性质进行观察和测定。结果表明:741杨生长持续期长,生长速度快,株高、茎粗和单株材积生长量在生长旺季具有速生的特点;在扫描电子显微镜下观察,741杨纤维细胞壁较薄,断面形状多为圆形或多边形,导管多为孔纹型导管,木射线为单列;741杨茎细胞壁中S-木质素含量明显高于G-木质素,随着树龄的增加,S-木质素的含量逐年增加。741杨基本密度小于毛白杨成熟材,体积干缩率在杨属中处于较低水平,抗弯强度与同类型杨树木材相比处于较高水平,冲击韧性按我国主要用材树种冲击韧性大小的分类属中等。741杨可广泛应用于绿化、建筑、家具、胶合板、造纸等行业。 展开更多

关键词 741杨 生长节律 解剖结构 化学组成 物理力学性质

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银杏木质部特异定位表达基因启动子克隆 被引量：6

6

作者 陆海 王沙生 +2 位作者 李义 蒋湘宁 李凤兰 《北京林业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第4期10-12,共3页

用PCR方法成功地从木本植物银杏基因组总DNA中扩增克隆得到木质部细胞特异性表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP1.8)的启动子 ,并克隆到pUC18载体中 .与菜豆的序列比较发现 ,碱基同源性高达 98%以上 .除发现启动子特有的TATAbox序列外 。

关键词 银杏 PCR 富甘氨蛋白基因启动子 木质部 基因克隆

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银杏木质部特异定位表达基因启动子在转基因烟草中的功能研究 被引量：4

7

作者 曾庆银 陆海 +2 位作者 傅学奇 王沙生 蒋湘宁 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期1-4,共4页

为了研究银杏GRP 1 8启动子在木本植物中的调控制特性 ,用从银杏细胞壁形成及纤维素生物合成密切相关的 ,并定位于形成层木质部维管组织细胞表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP 1.8)的启动子与GUS报告基因构建的表达载体转化烟草 ,经过South... 为了研究银杏GRP 1 8启动子在木本植物中的调控制特性 ,用从银杏细胞壁形成及纤维素生物合成密切相关的 ,并定位于形成层木质部维管组织细胞表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP 1.8)的启动子与GUS报告基因构建的表达载体转化烟草 ,经过Southernblotting鉴定 ,得到一批转化再生植株 .经GUS组织化学检测 ,发现转基因烟草的茎木质部呈现GUS染色阳性 ,初步证明银杏GRP 1 8基因启动子确有韧皮部表达特性 。 展开更多

关键词 银杏 富甘氨酸蛋白质基因启动子 GUS报告基因 转基因烟草 木质部 特异性定位表达

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施肥与干旱胁迫对银杏生长及黄酮苷和萜类内酯含量的影响 被引量：25

8

作者 冷平生 苏淑钗 +2 位作者 李月华 王沙生 蒋湘宁 《北京农学院学报》 2001年第1期32-37,共6页

对银杏实生苗接种VAM真菌,叶面喷施N、P肥及干旱胁迫处理,测定银杏生长及黄酮苷和萜类内酯含量的变化,试验结果表明:增施N、P肥能显著改善银杏植株N、P供应,增加银杏苗叶量和干重,显著提高银杏叶萜类内酯含量,而对银杏黄酮苷含量影响较... 对银杏实生苗接种VAM真菌,叶面喷施N、P肥及干旱胁迫处理,测定银杏生长及黄酮苷和萜类内酯含量的变化,试验结果表明:增施N、P肥能显著改善银杏植株N、P供应,增加银杏苗叶量和干重,显著提高银杏叶萜类内酯含量,而对银杏黄酮苷含量影响较小;干旱胁迫降低银杏叶水势和萜类内酯含量,对银杏黄酮苷含量没有影响,接种VAM真菌能减轻干旱胁迫的负影响,显著提高银杏萜类内酯含量。 展开更多

关键词 N、P肥 VAM真菌 干旱胁迫 黄酮苷 萜类内酯 银杏生长

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毛白杨阿魏酸-5-羟基化酶对烟草木质素的影响 被引量：4

9

作者 陈雪 陈雪梅 盖颖 《广东农业科学》 CAS 2015年第11期42-47,F0002,共7页

为了研究阿魏酸-5-羟基化酶(F5H)在木质素合成途径中的调控作用,采用CTAB法提取毛白杨RNA,反转录得到c DNA并克隆出毛白杨F5H基因,将其以正义、反义、干涉的基因形式,使用农杆菌侵染法导入烟草基因组中。将得到的转基因植株茎段进行解... 为了研究阿魏酸-5-羟基化酶(F5H)在木质素合成途径中的调控作用,采用CTAB法提取毛白杨RNA,反转录得到c DNA并克隆出毛白杨F5H基因,将其以正义、反义、干涉的基因形式,使用农杆菌侵染法导入烟草基因组中。将得到的转基因植株茎段进行解剖分析,并测定其木质素细胞壁化学组成。转基因植株的木质素、纤维素总量和木质部解剖分析结果与野生型相比均为未表现出明显差异,植株正常生长。F5H的过量表达和基因沉默均不影响植株木质化和生长,可以说明它是木质素合成途径可供选择的一个很好的调控点。 展开更多

关键词 阿魏酸-5-羟基化酶 转基因烟草 木质素含量 显微解剖结构

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正义、反义、干涉调控肉桂酰辅酶A脱氢酶基因对烟草的影响 被引量：4

10

作者 韩伯涛 盖颖 蒋湘宁 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期140-144,156,共6页

肉桂酰辅酶A还原酶(Cinnamoyl-CoA reductase,CCR)是在木质素合成途径中起到关键作用的酶,负责催化肉桂酰辅酶A类物质的还原反应生成相应的醛类化合物。分离得到毛白杨CCR基因的cDNA。将CCR基因以正义、反义和干涉的形式,通过农杆菌介... 肉桂酰辅酶A还原酶(Cinnamoyl-CoA reductase,CCR)是在木质素合成途径中起到关键作用的酶,负责催化肉桂酰辅酶A类物质的还原反应生成相应的醛类化合物。分离得到毛白杨CCR基因的cDNA。将CCR基因以正义、反义和干涉的形式,通过农杆菌介导的方法转入烟草中,Southern杂交以确定转基因成功。在获得的转基因植株中,所有下调基因的植株都表现出可溶性酚酸含量下降,木质素含量也有明显的下降趋势,纤维素含量则有上升,可能是对木质素含量下降的一种代偿性增长。植物细胞壁组分的含量变化表明CCR基因可能是一个控制木质素代谢途径的一个很好的调控点。 展开更多

关键词 肉桂酰辅酶A脱氢酶 木质素 转基因

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肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)的底物制备及酶学特性研究 被引量：3

11

作者 刘少莉 王冬冬 +2 位作者 韩伯涛 陈雪梅 盖颖 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期131-133,136,共4页

采用原核表达体系和HPLC法,分别获得肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)及其反应底物———香豆酰CoA酯,并对CCR酶学特性进行研究分析。结果表明,通过酶学方法和HPLC的分离纯化能够得到较高浓度和纯度的CCR反应底物;重组毛白杨CCR的最适反应温度是3... 采用原核表达体系和HPLC法,分别获得肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)及其反应底物———香豆酰CoA酯,并对CCR酶学特性进行研究分析。结果表明,通过酶学方法和HPLC的分离纯化能够得到较高浓度和纯度的CCR反应底物;重组毛白杨CCR的最适反应温度是37℃,最适pH值为6.25,Km值为5.664μmol/L,Vmax为4.09 nmol/Ls。 展开更多

关键词 肉桂酰辅酶A还原酶(CCR) 香豆酰CoA酯 酶学特性

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农杆菌介导的白杨遗传优化体系研究 被引量：2

12

作者 王蓓蓓 张炎 +4 位作者 金博文 王泽伟 李亦轩 赵健 张金凤 《西南林业大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2018年第4期14-21,共8页

以杂种白杨353为研究材料,利用农杆菌介导法转化p AB5启动子诱导外源基因删除系统,采用正交实验设计,以叶盘分化率为评价指标,优化转化过程中主要影响因子。结果表明:优化体系为菌液OD600值0.8,侵染时间8 min,乙酰丁香酮浓度200μmol/L... 以杂种白杨353为研究材料,利用农杆菌介导法转化p AB5启动子诱导外源基因删除系统,采用正交实验设计,以叶盘分化率为评价指标,优化转化过程中主要影响因子。结果表明:优化体系为菌液OD600值0.8,侵染时间8 min,乙酰丁香酮浓度200μmol/L,分化培养基中卡那霉素浓度35 mg/L,头孢霉素浓度350 mg/L,抗性芽生根时的筛选卡那霉素选择压25 mg/L。采用上述遗传优化体系,杂种白杨353叶盘分化率达80.00%,抗性植株经PCR检测,初步确认pAB5启动子诱导的外源基因删除系统已转入其基因组中,为检测外源基因删除系统在杨树中的有效性提供了参考依据。 展开更多

关键词 农杆菌 遗传转化 外源基因 体系优化 无性系 白杨

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杂交枫香胚性愈伤组织遗传转化体系研究 被引量：3

13

作者 江帅菲 崔莹 +5 位作者 赵瑞瑞 齐帅征 Kong Lisheng 赵健 李珊珊 张金凤 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期9-17,共9页

【目的】杂交枫香是我国重要的用材和观赏树种资源,但其遗传转化体系尚未建立。建立杂交枫香遗传转化体系为杂交枫香性状改良和基因功能研究提供了方法。【方法】本研究基于杂交枫香高效的体细胞胚胎发生技术,用根癌农杆菌介导的遗传转... 【目的】杂交枫香是我国重要的用材和观赏树种资源,但其遗传转化体系尚未建立。建立杂交枫香遗传转化体系为杂交枫香性状改良和基因功能研究提供了方法。【方法】本研究基于杂交枫香高效的体细胞胚胎发生技术,用根癌农杆菌介导的遗传转化法对其胚性愈伤组织进行遗传转化,对潮霉素选择压、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、以及共培养温度等影响因素采用正交试验等设计进行了研究。【结果】潮霉素对胚性愈伤组织的最小致死质量浓度为10 mg/L;获得最多Gus阳性斑点数的组合的菌液OD600为0.8,共培养时间为3 d,侵染时间为10 min,共培养温度为25℃;获得最多转基因阳性愈伤组织的组合的菌液OD600为0.2,共培养时间为2 d,侵染时间为10 min,共培养温度为23℃;且通过极差分析,最优处理组合的共培养时间为2 d,菌液OD600为0.2,侵染时间为20 min,共培养温度为23℃。【结论】经分子鉴定,共获得210个转基因阳性愈伤组织,初步建立了农杆菌介导的杂交枫香遗传转化体系,为阔叶树种愈伤组织的遗传转化提供了更多的可行性依据。 展开更多

关键词 杂交枫香 胚性愈伤组织 根癌农杆菌 遗传转化

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