表观遗传修饰在HHcy引起的肾功能损伤中的研究进展

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作者 揭育祯 丁宁 +1 位作者 卢冠军 马胜超 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第5期95-101,共7页

慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)是由各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍的一组临床综合征,治疗费用高、预后差。作为基因表达的重要调节因子,研究表明表观遗传修饰对基因表达和细胞功能的影响在CKD的发生发展中起关键的... 慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)是由各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍的一组临床综合征,治疗费用高、预后差。作为基因表达的重要调节因子,研究表明表观遗传修饰对基因表达和细胞功能的影响在CKD的发生发展中起关键的调控作用。同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是体内常见的一种含有氨基酸的硫醇基团,高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)作为终末期肾脏疾病发病率和死亡率的独立预测因子,涉及脏器多,危害性大。本文介绍了HHcy与慢性肾功能损伤关系,进一步对表观遗传修饰在同型半胱氨酸介导慢性肾功能损伤机制中调控作用的研究进展进行综述,旨在更加深入的了解慢性肾脏疾病发生发展的过程及其机制,为慢性肾脏疾病的研究提供一定新的思路和理论基础。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 DNA甲基化 组蛋白修饰 非编码RNA调控 慢性肾脏疾病

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环状RNA mmu_circ_0000818在地塞米松导致的MC3T3-E1细胞凋亡中的作用及机制

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作者 杨慧霞 丁宁 +5 位作者 马润秋 李桂忠 郝银菊 马胜超 姜怡邓 白志刚 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第4期478-489,共12页

目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dex... 目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dexamethasone(DEX)组;(2)采用Western blot检测各组细胞BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;(3)提取正常和DEX处理的MC3T3-E1细胞RNA,进行RNA测序,筛选出差异表达的circRNAs,并通过GO和KEGG分析其功能;(4)筛选出差异表达的mmu_circ_0000818并进行细胞水平验证以及UCSC Genome Browser Gateway和circbase网站分析mmu_circ_0000818在染色体的位置和保守性;(5)构建mmu_circ_0000818过表达质粒及小干扰RNA(siRNA)并转染细胞,流式细胞术检测各组MC3T3-E1细胞凋亡情况。结果(1)与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞凋亡升高(P<0.01);(2)根据log2foldchange(≥2)和P值(P<0.05)筛选差异表达的circRNAs,与Control组相比,DEX组中共有234个表达差异的circRNAs,其中上调的138个,下调的96个。差异表达circRNAs的靶基因利用GO和KEGG进行富集分析,Apoptosis(凋亡)和PI3K-Akt signaling pathway(磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路)差异最显著。(3)qRT-PCR结果显示,与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞中mmu_circ_0000818表达明显升高(P<0.01),UCSC Genome Browser Gateway和circbase分析发现mmu_circ_0000818主要位于17:78712463-78715086,由Crim1基因第6~7外显子环化形成并且在不同物种间具有高的保守性。(4)流式细胞术结果提示抑制mmu_circ_0000818可改善DEX引起的MC3T3-E1细胞凋亡,过表达则促进其凋亡。结论mmu_circ_0000818在DEX处理的MC3T3-E1细胞中显著增高,降低其可抑制DEX引起的细胞凋亡。 展开更多

关键词 环状RNA mmu_circ_0000818 地塞米松 MC3T3-E1细胞 RNA测序 凋亡

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铁死亡诱导剂联合紫草素协同促进人增生性瘢痕成纤维细胞的作用

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作者 王建军 王艳华 +10 位作者 唐玉婷 张静宜 马芳 贺茜 杨慧霞 赵启鹏 白志刚 郝银菊 李桂忠 姜怡邓 沈江涌 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第2期268-276,共9页

目的探讨铁死亡诱导剂(erastin,Era)联合紫草素(shikonin,SHK)协同促进人增生性瘢痕成纤维细胞(human hypertrophic scar fibroblasts,HSFBs)铁死亡的作用机制。方法收集宁夏医科大学总医院提供的增生性瘢痕,提取HSFBs;HE染色、免疫荧... 目的探讨铁死亡诱导剂(erastin,Era)联合紫草素(shikonin,SHK)协同促进人增生性瘢痕成纤维细胞(human hypertrophic scar fibroblasts,HSFBs)铁死亡的作用机制。方法收集宁夏医科大学总医院提供的增生性瘢痕,提取HSFBs;HE染色、免疫荧光鉴定HSFBs;CCK-8检测不同浓度Era、SHK对HSFBs的抑制率,计算IC 50值;CompuSyn软件计算联用指数(CI);设置对照组、Era组、SHK组和Era+SHK组,干预24 h后观察细胞数量及形态变化;划痕、Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭能力;相应生化试剂盒检测丙二醛(MDA)、总铁离子、活性氧(ROS)变化;蛋白印迹实验检测collagenⅠ、α-SMA、GOT1、SLC7A11、GPX4、FTH1表达。结果原代HSFBs Era的IC 50值为2.22μmol·L^(-1),SHK的IC 50值为3.94μmol·L^(-1),作为单用药浓度;CompuSyn软件计算CI值,选取CI=0.39597对应浓度(Era:1.2μmol·L^(-1)+SHK:1.5μmol·L^(-1))为联合用药浓度(各药浓度减小,抑制率>50%)。与单药组比,SHK+Era组HSFBs数量减少,细胞膜断裂、出泡,细胞皱缩变小,胞质浓缩;HSFBs迁移、侵袭能力减弱(P<0.05),CollagenⅠ、a-SMA蛋白表达降低(P<0.05);MDA、总铁离子、ROS含量升高(P<0.05),SLC7A11、GOT1、GPX4、FTH1蛋白表达降低(P<0.05)。结论Era联合SHK可协同抑制HSFBs增殖、迁移及纤维化水平,其机制可能是Era增强SHK对GOT1的抑制,提升细胞铁离子、ROS、脂质过氧化物水平,进而促进HSFBs铁死亡。 展开更多

关键词 铁死亡诱导剂 紫草素 铁死亡 GOT1 增生性瘢痕 成纤维细胞

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PSMD10在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制研究 被引量：3

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作者 吴欣妍 焦运 +6 位作者 王青青 徐龙 张辉 郭伟 杨安宁 郝银菊 姜怡邓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期535-541,共7页

目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3... 目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA表达;100μmol Hcy干预肝细胞(HL-7702);ELISA检测培养液上清中AST和ALT水平;Western blot检测LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA的表达;转染PSMD10 siRNA或过表达腺病毒,Western blot检测LC3B和p62的表达;ELISA检测AST和ALT水平。结果与cbs^(+/+)组比较,cbs^(+/-)组血清AST和ALT的水平增加(P<0.01),自噬水平增加(P<0.01),PSMD10表达水平增加(P<0.05);细胞水平与动物水平结果一致;与Hcy+siNC组相比,LC3Ⅱ/Ⅰ的比值降低(P<0.01),p62的蛋白表达增加(P<0.01),AST和ALT的浓度降低(P<0.01);与ad-GFP组相比,ad-PSMD10组LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.01),p62的蛋白表达降低(P<0.01),AST和ALT的浓度增加(P<0.01)。结论Hcy通过上调PSMD10的表达导致肝细胞过度自噬,造成肝脏损伤。 展开更多

关键词 PSMD10 同型半胱氨酸 肝细胞 自噬 肝损伤 AST ALT

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miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用研究 被引量：13

5

作者 吴琪瑞 王艳华 +5 位作者 刘林英 高丽娜 殷荷 张玉月 韩可栋 张慧萍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期601-605,共5页

目的探讨miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用。方法qRT-PCR检测胎盘组织中miR-488-3p的表达;并与子痫前期患者的临床特征进行相关性分析;同时,体外培养人绒毛膜滋养层细胞,并转染miR-488-3p mimic和inhibitor;Transw... 目的探讨miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用。方法qRT-PCR检测胎盘组织中miR-488-3p的表达;并与子痫前期患者的临床特征进行相关性分析;同时,体外培养人绒毛膜滋养层细胞,并转染miR-488-3p mimic和inhibitor;Transwell观察miR-488-3p对滋养层细胞侵袭和迁移的影响;生物信息学软件预测miR-488-3p下游作用靶点,并在胎盘组织中验证其表达;最后,qRT-PCR检测滋养层细胞中miR-488-3p对MMP2表达的影响。结果与正常孕妇比较,子痫前期患者胎盘组织中miR-488-3p表达水平明显升高,并与收缩压、舒张压呈正相关,而MMP2表达水平降低;过表达miR-488-3p后抑制滋养层细胞侵袭和迁移能力,MMP2表达水平降低;而抑制miR-488-3p表达则相反。结论miR-488-3p在子痫前期胎盘组织中升高,可能通过沉默MMP2,抑制滋养层细胞的侵袭和迁移参与子痫前期的发病。 展开更多

关键词 子痫前期 miR-488-3p 滋养层细胞 侵袭 迁移 MMP2

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miR‑15a‑5p对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响 被引量：1

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作者 于素美 张玉月 +4 位作者 马丽文 况园军 常庆宁 孔敏 张慧萍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期1631-1636,共6页

目的探讨miR‑15a‑5p对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响。方法收集2020年12月至2022年12月的正常妊娠胎盘组织和子痫前期胎盘组织各20例。采用荧光定量PCR检测胎盘组织和滋养细胞中miR‑15a‑5p的表达,并对其表达水平与患者血压做相关性分... 目的探讨miR‑15a‑5p对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响。方法收集2020年12月至2022年12月的正常妊娠胎盘组织和子痫前期胎盘组织各20例。采用荧光定量PCR检测胎盘组织和滋养细胞中miR‑15a‑5p的表达,并对其表达水平与患者血压做相关性分析;将HTR8‑S/Vneo细胞分正常组(control)和缺氧组(hypoxia),观察缺氧对miR‑15a‑5p表达的影响。另设mimic‑NC组、mimic‑NC+hypoxia组、miR‑15a‑5p mimic组、miR‑15a‑5p mimic+hypoxia、inhibitor‑NC组、inhibitor‑NC+hypoxia、miR‑15a‑5p inhibitor组、miR‑15a‑5p inhibitor+hypoxia组,观察miR‑15a‑5p对缺氧诱导的滋养细胞自噬相关蛋白LC3B和p62蛋白的影响。用Western blot检测各组中自噬相关蛋白LC3B和p62蛋白的表达水平;TargetScan网站预测miR‑15a‑5p的靶基因,检测其在胎盘组织和滋养细胞中的表达水平。结果与对照组相比,miR‑15a‑5p在子痫前期胎盘组织和缺氧滋养细胞中的表达均增高,且与患者血压呈正相关;缺氧条件下过表达miR‑15a‑5p,LC3BⅡ/Ⅰ表达增高,P62蛋白相对表达量降低;干扰miR‑15a‑5p后,LC3BⅡ/Ⅰ表达量降低,p62蛋白表达量升高;荧光定量PCR及Western blot检测结果发现YAP1在子痫前期胎盘组织和缺氧滋养细胞中的表达水平明显降低。结论miR‑15a‑5p在子痫前期胎盘滋养细胞中的高表达,其可能通过与YAP1结合从而促进PE自噬的发生。 展开更多

关键词 子痫前期 滋养细胞 自噬 miR‑15a‑5p YAP1

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miR-22-3p靶向GSDMD抑制同型半胱氨酸诱导的平滑肌细胞焦亡

7

作者 钟颖怡 丁宁 +7 位作者 王浥尘 刘超 董治锋 马胜超 熊建团 郝银菊 白志刚 姜怡邓 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第9期12-18,共7页

目的探讨miR-22-3p对同型半胱氨酸(Hcy)诱导血管平滑肌细胞焦亡的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞(VSMC),分为Control组(0μmol/L Hcy)与Hcy组(100μmol/L Hcy),Western blot检测细胞中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水... 目的探讨miR-22-3p对同型半胱氨酸(Hcy)诱导血管平滑肌细胞焦亡的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞(VSMC),分为Control组(0μmol/L Hcy)与Hcy组(100μmol/L Hcy),Western blot检测细胞中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水平,qRT-PCR检测miR-22-3p表达情况;ELISA检测上清中IL-1β、IL-18的浓度。转染miR-22-3p对照(miR-22-3p-NC)、miR-22-3p的模拟物(miR-22-3p-mimic)及抑制物(miR-22-3p-inhibitor)后观察Hcy诱导下VSMC的变化。结果与Control组相比,Hcy组VSMC中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水平增加(P<0.05),IL-1β、IL-18浓度更高(P<0.01),miR-22-3p相对表达水平低(P<0.01);转染miR-22-3p-mimic后,VSMC中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水平显著降低(P<0.01),IL-1β、IL-18浓度降低(P<0.01);转染miR-22-3p-inhibitor后VSMC中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水平显著增加(P<0.01),IL-1β、IL-18浓度升高(P<0.05)。结论miR-22-3p可抑制Hcy诱导的VSMC焦亡。 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 焦亡 miR-22-3p 同型半胱氨酸

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DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)下调MMP2表达抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移 被引量：1

8

作者 吴凯 刘圆 +3 位作者 张辉 王艳华 张慧萍 姜怡邓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期736-742,共7页

目的探讨DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)通过调控迁移相关因子基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达对人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移的影响。方法收集子痫前期(PE)患者和正常孕妇的胎盘组织(对照组)各20例,Masson染色观察胎盘组织结构改变,... 目的探讨DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)通过调控迁移相关因子基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达对人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移的影响。方法收集子痫前期(PE)患者和正常孕妇的胎盘组织(对照组)各20例,Masson染色观察胎盘组织结构改变,免疫荧光组织化学染色检测胎盘组织滋养层细胞MMP2的表达;实时荧光定量PCR检测DINO的表达;将HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞转染DINO小干扰片段(si-DINO)后,实时荧光定量PCR验证DINO、MMP2 mRNA表达,Western blot法检测MMP2蛋白表达;Transwell^(TM)侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移情况。结果与对照组相比,PE患者血压、蛋白尿水平明显增高;胎盘组织可见纤维素样坏死,绒毛膜绒毛减少;免疫荧光显示胎盘滋养层细胞MMP2表达减弱、DINO表达增加;转染si-DINO后,DINO表达降低,而MMP2 mRNA及蛋白表达增加,HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移能力显著增加。结论DINO下调MMP2表达,抑制胎盘滋养层细胞的侵袭与迁移。 展开更多

关键词 子痫前期 DNA损伤诱导长链非编码RNA(DINO) 基质金属蛋白酶2(MMP2) 侵袭 迁移

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FoxO1经ATF6调控Hcy诱导的肝细胞凋亡 被引量：7

9

作者 王青青 焦运 +6 位作者 吴欣妍 海秀玲 徐龙 张辉 郭伟 郝银菊 姜怡邓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期203-209,共7页

目的探讨叉头状转录因子(FoxO1)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导肝细胞凋亡中的作用及机制。方法随机选取10周龄雄性cbs^+/-与cbs+/+小鼠各8只饲以2%高蛋氨酸饮食12周,qRT-RCR和Western blot检测肝脏中FoxO1和ATF6的表达;100μmol·L^-1 Hc... 目的探讨叉头状转录因子(FoxO1)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导肝细胞凋亡中的作用及机制。方法随机选取10周龄雄性cbs^+/-与cbs+/+小鼠各8只饲以2%高蛋氨酸饮食12周,qRT-RCR和Western blot检测肝脏中FoxO1和ATF6的表达;100μmol·L^-1 Hcy处理肝细胞(HL-7702)48 h后,qRT-PCR和Western blot检测FoxO1和ATF6的表达改变;转染FoxO1和ATF6 siRNA后,Western blot检测ATF6、Bax和Bcl2蛋白表达,流式细胞术观察肝细胞凋亡情况;FoxO1过表达腺病毒与ATF6 siRNA共转至肝细胞,Western blot检测Bax和Bcl2蛋白表达。结果与cbs+/+组相比,cbs^+/-组肝脏中FoxO1和ATF6的表达水平显著增加(P<0.01);与Control组相比较,Hcy组FoxO1和ATF6的表达显著上调(P<0.01);与Hcy+siNC组相比,Hcy+siFoxO1组的ATF6和Bax表达水平明显降低,Bcl2的表达显著增加,肝细胞凋亡率显著降低(P<0.01);与Ad-FoxO1组相比,Ad-FoxO1+siATF6组Bax的表达显著降低,Bcl2的表达显著增加(P<0.01)。结论FoxO1介导的ATF6表达上调是Hcy致肝细胞凋亡进而引起肝损伤的重要机制之一。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 FOXO1 ATF6 内质网应激 肝细胞凋亡 肝损伤

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circRNA RBM39与miR-5088-5p在缺氧诱导的滋养细胞自噬中的作用 被引量：9

10

作者 吴琪瑞 王艳华 +6 位作者 柴丽芬 张辉 李淑霞 刘林英 石青 吴凯 张慧萍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期570-574,共5页

目的探讨circRNA RBM39与miR-5088-5p在缺氧诱导的胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo),分为正常组和缺氧组。采用Western blot检测各组细胞自噬标志蛋白LC3B和p62的表达水平;运用qRT-PCR检测circRNA ... 目的探讨circRNA RBM39与miR-5088-5p在缺氧诱导的胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo),分为正常组和缺氧组。采用Western blot检测各组细胞自噬标志蛋白LC3B和p62的表达水平;运用qRT-PCR检测circRNA RBM39的表达水平;同时,检测circRNA RBM39在HTR8-S/Vneo细胞胞浆/胞核中的表达水平,分析其表达位置;通过TargetScan生物信息学分析circRNA RBM39可竞争结合的miRNAs;而后qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达;分别将circRNA RBM39和miR-5088-5p的表达水平与LC3B和p62的表达水平进行相关性分析。结果与正常组相比,缺氧组LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.001),而p62蛋白表达降低(P<0.001);另外,circRNA RBM39在缺氧组中表达上调(P<0.05),并且主要在胞浆中分布;生物信息学发现circRNA RBM39可竞争性结合miR-5088-5p,而且miR-5088-5p在缺氧组中表达下调(P<0.05);最后,通过相关性分析发现circRNA RBM39与自噬水平呈正相关(P<0.01),miR-5088-5p与自噬水平呈负相关(P<0.01)。结论circRNA RBM39及miR-5088-5p与滋养细胞自噬密切相关,而circRNA RBM39可能通过竞争性结合miR-5088-5p在调节缺氧诱导的滋养细胞自噬中发挥重要作用。 展开更多

关键词 缺氧 滋养细胞 自噬 circRNA MIRNAS

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同型半胱氨酸上调miR-488-3p表达诱导MPC-5小鼠肾小球足细胞凋亡 被引量：4

11

作者 揭育祯 丁宁 +6 位作者 谢琳 刘昆 梁昪平 马飞 马胜超 姜怡邓 卢冠军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期801-806,共6页

目的探讨微小RNA-488-3p(miR-488-3p)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法体外培养足细胞分别采用0μmol/L Hcy(对照组)和80μmol/L Hcy(Hcy组)处理48 h,流式细胞术检测足细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(B... 目的探讨微小RNA-488-3p(miR-488-3p)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法体外培养足细胞分别采用0μmol/L Hcy(对照组)和80μmol/L Hcy(Hcy组)处理48 h,流式细胞术检测足细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和胱天蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测miR-488-3p的表达;用miR-488-3p抑制物(miR-488-3p inhibitor)转染足细胞,检测转染效率和足细胞凋亡水平。结果与对照组相比,Hcy组中足细胞凋亡率、BAX和caspase-3表达水平显著升高,而Bcl2表达则显著降低;且Hcy显著促进足细胞中miR-488-3p的表达。转染miR-488-3p inhibitor后,足细胞凋亡率、BAX及caspase-3蛋白表达明显降低,而Bcl2表达显著升高。结论Hcy通过上调miR-488-3p表达而促进足细胞凋亡。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸(Hcy) 足细胞 微小RNA-488-3p(miR-488-3p) 细胞凋亡

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miR-5088-5p在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其对滋养细胞自噬的影响 被引量：5

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作者 殷荷 王艳华 +6 位作者 吴琪瑞 张辉 高丽娜 朱亚飞 张慧萍 吴凯 姜怡邓 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第24期3312-3316,3322,共6页

目的探讨胎盘组织miR⁃5088⁃5p表达水平与子痫前期患者临床特征的相关性及其在子痫前期发病机制中的作用。方法qRT⁃PCR检测胎盘组织miR⁃5088⁃5p的表达;将miR⁃5088⁃5p表达水平与临床特征进行相关性分析;免疫荧光检测胎盘组织中LC3B及p62... 目的探讨胎盘组织miR⁃5088⁃5p表达水平与子痫前期患者临床特征的相关性及其在子痫前期发病机制中的作用。方法qRT⁃PCR检测胎盘组织miR⁃5088⁃5p的表达;将miR⁃5088⁃5p表达水平与临床特征进行相关性分析;免疫荧光检测胎盘组织中LC3B及p62的表达;同时,体外培养人源胎盘滋养细胞株(HTR8⁃S/Vneo),分为常氧组和缺氧组,转染miR⁃5088⁃5p mimics后,Western blot检测各组胎盘滋养细胞LC3B和p62蛋白的表达。结果miR⁃5088⁃5p在子痫前期胎盘组织中明显低表达(P<0.01),且表达水平与收缩压、舒张压、血小板计数呈负相关,而与新生儿体重呈正相关(P<0.05);免疫荧光显示LC3B在子痫前期组胎盘组织中增加,而p62减少;另外,与常氧组比较,缺氧组细胞LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.05),而p62蛋白表达降低(P<0.05);转染miR⁃5088⁃5p mimics后,LC3BⅡ/Ⅰ表达降低(P<0.01),p62表达增加(P<0.05)。结论miR⁃5088⁃5p在子痫前期胎盘组织中显著下调,其过表达可显著抑制胎盘滋养细胞自噬的发生,有望成为子痫前期的诊断分子标记物和治疗靶点。 展开更多

关键词 miR⁃5088⁃5p 子痫前期 缺氧 滋养细胞 自噬

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TLR4/NF-κB信号通路对CBS^(+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响 被引量：9

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作者 熊建团 顾铃毓 +6 位作者 王青青 丁宁 董小艳 刘达越 徐灵博 焦运 姜怡邓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1227-1232,共6页

目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CB^(S+/-))小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响。方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CB^(S+/-)小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周。应用全自动生化分析... 目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CB^(S+/-))小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响。方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CB^(S+/-)小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周。应用全自动生化分析仪检测小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及同型半胱氨酸(Hcy)水平;分离肝脏并计算肝指数(肝重/体重);ELISA法检测小鼠肝脏组织TC及TG含量变化;苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察小鼠肝脏结构和脂质改变;RT-qPCR和Western blot检测小鼠肝组织中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达;Pearson相关性分析评估小鼠肝脏中TLR4和NF-κB表达与TC和TG含量的相关性。结果:与CBS+/+组小鼠相比较,CB^(S+/-)组小鼠血清Hcy水平升高(P<0.05),肝指数升高(P<0.05),肝组织及血清中TC和TG含量增加(P<0.05或P<0.01);HE和油红O染色结果表明CB^(S+/-)组小鼠肝脏脂肪变性明显;TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);TLR4和NF-κB分别与小鼠肝脏中TC和TG含量呈正相关。结论:TLR4/NF-κB信号通路在CB^(S+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的形成过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪性肝病 TLR4/NF-κB信号通路 胱硫醚Β-合成酶 同型半胱氨酸

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长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用 被引量：2

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作者 顾铃毓 徐灵博 +3 位作者 杨安宁 焦运 张慧萍 姜怡邓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期240-245,共6页

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携... 目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。 展开更多

关键词 长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5) 同型半胱氨酸(Hcy) 肝细胞 自噬

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circRNA CPSF6核内转移促进同型半胱氨酸诱导的滋养细胞凋亡 被引量：3

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作者 高丽娜 吴琪瑞 +6 位作者 殷荷 刘林英 吴玉珠 张玉月 王艳华 吴凯 张慧萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期146-152,共7页

目的探讨环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6)在同型半胱氨酸(Hcy)致滋养细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy处理)与1 mmol/L Hcy处理组。采用免疫荧光细胞化... 目的探讨环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6)在同型半胱氨酸(Hcy)致滋养细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy处理)与1 mmol/L Hcy处理组。采用免疫荧光细胞化学染色检测滋养细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达,Western blot法检测caspase-3蛋白水平;实时定量PCR检测circRNA CPSF6的mRNA表达水平;同时,运用小干涉RNA(siRNA)技术敲低滋养细胞circRNA CPSF6表达,Western blot法检测细胞caspase-3、caspase-9、B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)表达;实时定量PCR检测circRNA CPSF6在Hcy处理前后滋养细胞胞质/胞核中的表达水平。结果与对照组相比,Hcy处理组caspase-3表达明显增加,circRNA CPSF6 mRNA表达上调;敲低circRNA CPSF6后,caspase-3表达降低,线粒体凋亡途径被抑制;正常培养的滋养细胞中circRNA CPSF6在胞质大量表达,而给予Hcy处理后,circRNA CPSF6主要在胞核表达。结论通过circRNA CPSF6核内转移激活线粒体凋亡途径促进Hcy诱导的滋养细胞凋亡。 展开更多

关键词 环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6) 滋养细胞 同型半胱氨酸(Hcy) 细胞凋亡

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铁死亡参与高脂饮食诱导的ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化及ox-LDL诱导的泡沫细胞形成过程 被引量：25

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作者 刘洋 孙岳 +6 位作者 杨安宁 刘子歌 刘太阳 郝玮 刘耀阳 王秋实 刘志宏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期585-590,共6页

目的探讨在高脂饮食诱导ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)中及泡沫细胞形成过程是否有铁死亡发生。方法高脂饮食诱导ApoE^(-/-)小鼠建立AS模型;氧化低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)干预RAW264.7... 目的探讨在高脂饮食诱导ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)中及泡沫细胞形成过程是否有铁死亡发生。方法高脂饮食诱导ApoE^(-/-)小鼠建立AS模型;氧化低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)干预RAW264.7巨噬细胞诱导泡沫细胞模型。全自动生化分析仪检测小鼠总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)血清水平;H&E、油红O染色观察小鼠主动脉根部斑块面积大小及脂质沉积情况;qRT-PCR与Western blot分别测定主动脉组织和泡沫细胞中P53、GPX4和SLC7A11的mRNA和蛋白表达改变;比色法检测细胞内脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione peroxidase,GSH)及Fe^(2+)水平;荧光探针DCFH-DA检测细胞内过氧化标志物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果与对照组相比,铁死亡相关因子p53的mRNA和蛋白表达明显升高,GPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白表达明显降低;ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞来源泡沫细胞中p53 mRNA和蛋白表达明显升高,GPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白表达水平显著降低;脂质过氧化物ROS、MDA增多,Fe^(2+)水平升高,GSH水平明显降低。结论铁死亡参与高脂饮食诱导的ApoE^(-/-)小鼠AS的形成,且ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞来源泡沫细胞中脂质过氧化和铁死亡发生增加,这提示泡沫细胞铁死亡可能与动脉粥样硬化的形成有关。 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 铁死亡 脂质过氧化 泡沫细胞

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浸润性乳腺癌组织肝配蛋白A型受体2(EphA2)高表达且与细胞焦亡负相关 被引量：2

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作者 刘昆 吴立刚 +6 位作者 揭育祯 纳莉 张晴 田荣 李桂忠 卢冠军 马胜超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期981-986,共6页

目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶... 目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测45例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中EphA2表达情况;用Pearson相关系数对患者癌组织EphA2的蛋白表达与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β进行相关性分析。结果与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中NLRP3、caspase-1、IL-1β和ICAM-1的蛋白表达水平明显降低,EphA2蛋白表达明显升高;EphA2水平与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β均呈负相关性。结论乳腺癌组织EphA2高表达,且与细胞焦亡呈负相关。 展开更多

关键词 乳腺癌 细胞焦亡(pyroptosis) 炎性体 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 肝配蛋白A型受体2(EphA2)

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长链非编码RNA SNHG1对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响 被引量：1

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作者 万瑀 马芳 +3 位作者 贺茜 马胜超 姜怡邓 沈江涌 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期118-127,共10页

目的探讨长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因1(lnc RNA SNHG1)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法纳入2019-2021年在宁夏医科大学总医院烧伤整形外科接受手术治疗的22例增生性瘢痕患者,收集其增生性瘢痕组织与瘢痕旁正常皮肤组织(... 目的探讨长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因1(lnc RNA SNHG1)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法纳入2019-2021年在宁夏医科大学总医院烧伤整形外科接受手术治疗的22例增生性瘢痕患者,收集其增生性瘢痕组织与瘢痕旁正常皮肤组织(瘢痕旁3 cm以内),从中分离培养成纤维细胞。采用q RT-PCR从组织和细胞水平检测SNHG1m RNA和mi R-382-3p相对表达水平。将增生性瘢痕成纤维细胞随机分为对照组、SNHG1阴性对照组(转染慢病毒空载体)、模拟物对照组(转染对照模拟物)、SNHG1阴性对照+模拟物对照组(转染慢病毒空载体和对照模拟物)、SNHG1过表达组(转染过表达慢病毒)、mi R-382-3p过表达组(转染mi R-382-3p模拟物)、SNHG1过表达+模拟物对照组(转染过表达慢病毒和对照模拟物)与SNHG1过表达+mi R-382-3p过表达组(转染过表达慢病毒和mi R-382-3p模拟物),采用q RT-PCR检测各组SNHG1、PCNA、p27 m RNA和mi R-382-3p的相对表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;Ed U染色法检测各组细胞增殖水平;Western blotting检测各组p27和PCNA蛋白表达水平。结果与正常皮肤组织及其成纤维细胞相比,SNHG1 m RNA在增生性瘢痕组织(3.21±2.65 vs.1.14±0.61,P<0.001)及其成纤维细胞中呈高表达(0.91±0.08 vs.0.54±0.08,P<0.01),而mi R-382-3p表达下调(组织:0.53±0.34 vs.1.15±0.61,P<0.001;细胞:0.84±0.09 vs.1.01±0.004,P<0.05)。与SNHG1阴性对照组相比,SNHG1过表达组细胞增殖能力增强(0.23±0.03 vs.0.16±0.01,P<0.001),Ed U阳性细胞百分比明显增高(30.01%±5.70%vs.7.13%±4.40%,P<0.001),PCNA m RNA和蛋白相对表达水平增高(m RNA:2.97±0.33 vs.0.98±0.25,P<0.01;蛋白:2.20±0.09 vs.0.88±0.20,P<0.05),p27 m RNA和蛋白相对表达水平降低(m RNA:0.30±0.03 vs.1.42±0.15,P<0.001;蛋白:0.47±0.11 vs.1.13±0.19,P<0.05),mi R-382-3p相对表达水平降低(0.05±0.01vs.1.03±0.12,P<0.001);与SNHG1过表达+模拟物对照组相比,SNHG1过表达+mi R-382-3p过表达组细胞增殖能力减弱(0.15±0.02 vs.0.26±0.01,P<0.001),Ed U阳性细胞百分比下降(5.97%±0.33%vs.11.70%±0.87%,P<0.001),PCNA m RNA和蛋白相对表达水平降低(m RNA:0.64±0.09 vs.3.33±0.38,P<0.001;蛋白:1.70±0.36 vs.2.34±0.16,P<0.05),p27 m RNA和蛋白相对表达水平升高(m RNA:1.01±0.44 vs.0.09±0.04,P<0.05;蛋白:1.38±0.31 vs.0.50±0.09,P<0.05)。结论 SNHG1在增生性瘢痕中呈高表达,可负向调控mi R-382-3p的表达,进而促进增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,有望成为治疗增生性瘢痕的新靶点。 展开更多

关键词 增生性瘢痕 成纤维细胞 核仁小RNA宿主基因1 细胞增殖

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巨噬细胞PDHA1基因敲除对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝细胞凋亡的影响 被引量：2

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作者 王梦 孙岳 +5 位作者 杨安宁 宝瑞 畅思容 李媛媛 余梦雪 刘志宏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期123-130,共8页

目的:探讨巨噬细胞丙酮酸脱氢酶E1 α1亚基(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1), PDHA1在同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)中对肝细胞凋亡的作用。方... 目的:探讨巨噬细胞丙酮酸脱氢酶E1 α1亚基(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1), PDHA1在同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)中对肝细胞凋亡的作用。方法:随机选取6周龄体重相近的PDHA1基因正常野生型小鼠和巨噬细胞特异性PDHA1基因敲除(PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ))小鼠各12只,均分别给予普通饮食和高Hcy饮食喂养12周后用于后续实验。应用琼脂糖凝胶电泳技术对PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ)小鼠进行基因鉴定;Western blot检测两种基因型小鼠骨髓巨噬细胞PDHA1蛋白表达;使用全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)水平;试剂盒检测肝组织上清液甘油三酯(triglyceride, TG)和ALT水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察小鼠肝组织结构改变;qRT-PCR和Western blot检测小鼠肝组织中凋亡相关指标Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果:PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ)小鼠均表达Lyz2-Cre及PDHA1-flox,且巨噬细胞中PDHA1蛋白表达减少(P<0.05),表明巨噬细胞特异性PDHA1敲除小鼠模型构建成功。高Hcy饮食组PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ)小鼠血清Hcy水平升高(P<0.05),表明高Hcy血症模型构建成功。高Hcy饮食组小鼠肝组织上清液TG和ALT水平显著升高(P<0.05),且巨噬细胞中PDHA1敲除后,血清及肝组织中ALT水平升高更为显著。HE染色结果表明,高Hcy饮食使小鼠肝脏发生脂肪变性,巨噬细胞中PDHA1基因敲除可加重肝细胞的变性坏死。PDHA1^(iΔMΦ/iΔMΦ)组凋亡相关指标Bax和caspase-3表达均显著升高(P<0.05)。结论:抑制小鼠巨噬细胞中PDHA1表达,可促进高Hcy饮食诱导的NAFLD小鼠模型中肝细胞的凋亡,这可能是加重NAFLD肝损伤的其中一个机制。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪性肝病 丙酮酸脱氢酶E1α1亚基 巨噬细胞 细胞凋亡

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D816V突变型KIT特异性诱导COS-1非洲绿猴肾细胞核不均一核糖核蛋白 L(HNRNPL)和HNRNPK磷酸化

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作者 张良颖 张少婷 +4 位作者 范朝阳 蒋宗英 李淑璟 刘安步 孙建民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期138-143,共6页

目的探究Ⅲ类酪氨酸激酶受体KIT D816V突变对核不均一核糖核蛋白L(HNRNPL)和HNRNPK的调控作用。方法在COS-1非洲绿猴肾细胞表达野生型KIT或KIT D816V,或与HNRNPL或HNRNPK共表达,用免疫沉淀法和Western blot法检测KIT活化及HNRNPL、HNRNP... 目的探究Ⅲ类酪氨酸激酶受体KIT D816V突变对核不均一核糖核蛋白L(HNRNPL)和HNRNPK的调控作用。方法在COS-1非洲绿猴肾细胞表达野生型KIT或KIT D816V,或与HNRNPL或HNRNPK共表达,用免疫沉淀法和Western blot法检测KIT活化及HNRNPL、HNRNPK的磷酸化,通过激光共聚焦显微镜检测KIT、HNRNPL、HNRNPK在COS-1细胞中的定位。结果野生型KIT需要其配基干细胞因子(SCF)的刺激发生活化,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化。此外,KIT D816V可诱导HNRNPL和HNRNPK发生磷酸化,而野生型KIT无此功能。HNRNPL和HNRNPK在细胞核表达,野生型KIT在细胞膜和细胞质表达,而KIT D816V主要表达于细胞质。结论野生型KIT活化需要其配体SCF参与,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化,并能特异性诱导HNRNPL和HNRNPK磷酸化。 展开更多

关键词 KIT D816V 核不均一核糖核蛋白L(HNRNPL) 核不均一核糖核蛋白K(HNRNPK)

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