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A3启动子缺陷piggyBac转座子在家蚕中的转基因研究
被引量：
5
1
作者
杨惠娟
庄兰芳
+4 位作者
范伟
兰天云
丁农
陆长德
钟伯雄
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第1期41-44,共4页
构建了A3启动子缺陷piggyBac转座质粒,以增强型绿色荧光蛋白基因EGFP为标记基因对家蚕品种N is-tari进行转基因实验,发现其具有较高的表达EGFP的转化效率,G0代中EGFP阳性蛾区检出占总注射蚕卵的比率达0.618%,且EGFP的表达呈组织特异性。...
构建了A3启动子缺陷piggyBac转座质粒,以增强型绿色荧光蛋白基因EGFP为标记基因对家蚕品种N is-tari进行转基因实验,发现其具有较高的表达EGFP的转化效率,G0代中EGFP阳性蛾区检出占总注射蚕卵的比率达0.618%,且EGFP的表达呈组织特异性。PCR实验分析也证实了标记基因的成功导入。该实验中标记基因及转基因阳性个体均易于检出,为启动子缺陷转基因方法在家蚕组织特异性启动子筛选研究上的应用奠定了基础。
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关键词
家蚕
转基因
启动子缺陷
PIGGYBAC转座子
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职称材料
RANTES基因启动子区多态性对其蛋白表达的影响
被引量：
2
2
作者
刘传合
陈虹
+5 位作者
胡良平
伏瑾
张惠芹
张嘉芹
张嘉琳
陈育智
《临床儿科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第9期605-608,共4页
目的探讨调节正常T细胞表达和分泌活性因子(RANTES)基因启动子区单核苷酸多态性对其蛋白表达的影响。方法分别测定44例正常儿童、44例哮喘患儿血清中及45例哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清中RANTES的含量,同时对45例哮喘患...
目的探讨调节正常T细胞表达和分泌活性因子(RANTES)基因启动子区单核苷酸多态性对其蛋白表达的影响。方法分别测定44例正常儿童、44例哮喘患儿血清中及45例哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清中RANTES的含量,同时对45例哮喘患儿DNA样本进行RANTES基因型确定。结果哮喘患儿血清中RANTES的水平显著高于正常对照儿童(P<0.01)。未发现RANTES-403(G/A)、-28(C/G)两位点的不同基因型显著影响哮喘患儿血清RANTES蛋白的水平(P>0.05),但两位点的不同基因型哮喘患儿,其PBMC分泌的RANTES水平有所不同:-403GA及-403AA基因型个体低于-403GG纯合型(P=0.06),-28CG杂合型个体低于CC纯合型(P<0.05)。结论趋化因子RANTES在哮喘的发病中具有重要作用,RANTES基因启动子区单核甘酸多态性可能通过影响其基因的表达,进而影响蛋白的表达,最终影响哮喘的发病过程和严重程度。
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关键词
趋化因子
调节正常T细胞表达和分泌活性因子
基因
多态性
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职称材料
电压门控钠离子通道与恶性肿瘤的转移
被引量：
4
3
作者
潘惠艳
黄秉仁
《生理科学进展》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期217-220,共4页
电压门控钠离子通道(VGSC)是可兴奋组织中动作电位的关键离子通道,具有重要的生理功能。近年来国内外研究发现,VGSC在转移的前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等细胞中表达,其增加了癌细胞的运动和侵袭,促使了癌症的转移,其还将被作为...
电压门控钠离子通道(VGSC)是可兴奋组织中动作电位的关键离子通道,具有重要的生理功能。近年来国内外研究发现,VGSC在转移的前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等细胞中表达,其增加了癌细胞的运动和侵袭,促使了癌症的转移,其还将被作为治疗靶点而进行药物开发和临床应用。
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关键词
电压门控钠离子通道
癌症
转移
侵袭
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职称材料
阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞乙酰胆碱酯酶的研究
被引量：
2
4
作者
许彩民
卢红
+2 位作者
崔毅
潘华珍
张之南
《生物化学杂志》
CSCD
1994年第4期471-476,共6页
用化学方法测定了乙酰胆碱脂酶（ＡｃｈＥ）活性，阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞远低于正常红细胞。为了进一步研究ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞，采用Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ＭＢ结合ＡｃｈＥ单抗亲...
用化学方法测定了乙酰胆碱脂酶（ＡｃｈＥ）活性，阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞远低于正常红细胞。为了进一步研究ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞，采用Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ＭＢ结合ＡｃｈＥ单抗亲和层析法分离出ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞。用间接免疫荧光流式细胞术检测，ＰＮＨ细胞ＡｃｈＥ低于正常，而ＰＮＨＡｃｈＥ（—）红细胞未能检出ＡｃｈＥ。３Ｈ－肌醇标记实验证明，正常红细胞膜区带４．１处有较高的放射活性，而ＰＮＨ红细胞极低，ＰＮＨＡｃｈＥ（—）红细胞完全无放射活性。用ＡｃｈＥ抗体做免疫印渍实验证明了ＡｃｈＥ存在区带４．１部位。ＤＭＰＣ诱导正常和ＰＮＨ红细胞，检测二者囊泡化的程度，发现ＰＮＨ病人红细胞远比正常人红细胞易于囊泡化。
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关键词
乙酰胆碱酯酶
血红蛋白尿症
红细胞
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职称材料
PPARγ——节俭基因的主控基因
被引量：
2
5
作者
常永生
方福德
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期315-320,共6页
过氧化物酶体增殖是细胞对多种化合物如某些天然的或修饰过的脂肪酸、邻苯二甲酸盐、白三烯拮抗物、乙酰唾液酸等或者某种病理状态如细胞形态、酶活性剧变等反应的结果。过氧化物酶体增殖现象主要发生在肝、肾、脂肪等组织,激素和营养...
过氧化物酶体增殖是细胞对多种化合物如某些天然的或修饰过的脂肪酸、邻苯二甲酸盐、白三烯拮抗物、乙酰唾液酸等或者某种病理状态如细胞形态、酶活性剧变等反应的结果。过氧化物酶体增殖现象主要发生在肝、肾、脂肪等组织,激素和营养因子都能调节过氧化物酶体增殖反应。持续的过氧化物酶体增殖可导致肝癌。组织特异性表达的三种过氧化物酶体增殖体激活受体(peroxisomeproliferatoractivatedreceptor,PPAR)包括PPARα、PPARβ、PPARγ,三者组成独特的细胞核受体亚族。经过十几年的科学研究,PPAR的功能已比较明晰。研究表明,PPARγ基因作为节俭基因的主控基因,调控着与脂肪生成、糖尿病、肥胖相关基因的表达,该受体还参与多种细胞生理活动的转录调控,包括细胞周期调控、炎症、免疫调节、肿瘤细胞的活动。
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关键词
过氧化物酶体增殖体激活受体
节俭基因
主控基因
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职称材料
p75NTR-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达、鉴定和活性分析
被引量：
2
6
作者
周素芳
王欣
+1 位作者
陈虹
黄秉仁
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期604-609,共6页
为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815...
为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815 3α factor p75NTR Fc .重组质粒电转化酵母GS115细胞后摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达的融合蛋白经ProteinA亲和层析和SephadexG 10 0纯化 ,Western印迹、N末端测序进行蛋白质鉴定 ,ELISA及细胞培养进行生物活性分析 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中 ,诱导第 4d的表达量最高 ,占上清总蛋白 6 0 %以上 ,ProteinA纯化后有 2条蛋白带 ,免疫印迹分析这 2条蛋白带均能和抗p75及抗IgG抗体结合 ,N末端序列测定证实 1条为完整p75NTR Fc ,1条为其蛋白酶降解带 .ELISA等分析表明 ,p75NTR Fc能与NGF结合 ,p75NTR Fc能抑制NGF对PC12细胞的分化作用 .
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关键词
神经生长因子低亲和力受体
FC融合蛋白
基因表达
毕赤酵母
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职称材料
小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆
被引量：
1
7
作者
李永海
苏华
+2 位作者
何维
崔莲仙
越智宏伦
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第2期158-162,共5页
目的 小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法 利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从...
目的 小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法 利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果 对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论 小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。
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关键词
DDRT-PCR
小鼠
胸腺
基因
差异表达
克隆
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职称材料
T超嗜热菌Aquifex aeolicus亮氨酰-tRNA合成酶和tRNA^(Leu)的相互作用(英文)
8
作者
赵明炜
王恩多
《中国科学院研究生院学报》
CAS
CSCD
2007年第1期131-136,共6页
超嗜热菌Aquifexaeolicus亮氨酰-tRNA合成酶(αβ-LeuRS)是已知的唯一的双肽链LeuRS.通过αβ-LeuRS和大肠杆菌LeuRS相应肽段的重组和重组酶性质的研究发现,αβ-LeuRS的α亚基C末端36个氨基酸对于αβ-LeuRS的氨基酰化活力至关重要.α...
超嗜热菌Aquifexaeolicus亮氨酰-tRNA合成酶(αβ-LeuRS)是已知的唯一的双肽链LeuRS.通过αβ-LeuRS和大肠杆菌LeuRS相应肽段的重组和重组酶性质的研究发现,αβ-LeuRS的α亚基C末端36个氨基酸对于αβ-LeuRS的氨基酰化活力至关重要.αβ-LeuRS的两个亚基人为融合得到的单亚基酶SLeuRS-αβ,具有完全的野生型双亚基酶活力,其热稳定性显著增强.同时,通过亚基重组揭示了LeuRS对于不同种属的tRNALeu的识别元件位于α亚基内,而其中的CP1结构域不仅是LeuRS行使编校功能的结构基础,对于LeuRS识别不同种属来源的tRNALeu也是十分重要的.通过不同来源的LeuRS一级结构比较,克隆了单独的CP1结构域组成的肽(CP1),发现唯有A.aeolicusαβ-LeuRS的CP1对错误的氨基酰化产物具有体外编校功能.它与其他3种来源于细菌LeuRS的CP1都能够编校误氨基酰化的古老形式的亮氨酸小螺旋(minihelixLeu).通过同源序列比较发现,在αβ-LeuRS的CP1内存在一个由20个氨基酸组成的特异的结构模体,它对CP1发挥体外编校功能必不可少,引入原本不具有体外编校功能的E.coli的CP1后则可使其获得编校功能,但是该模体不影响全酶的编校功能.αβ-LeuRS中与tRNA结合有关的亚基——β亚基也可以赋予E.coliCP1编校功能.这些研究结果充分表明,来源于古老的超嗜热菌A.aeolicus的αβ-LeuRS保留了进化的遗迹——具有编校活力的CP1和与其编校功能密切相关的由20个氨基酸组成的特异的结构模体,它们在进化过程中随着其他结构域招募进合成酶中而逐渐失去了对全酶编校功能的作用.这一发现有力地支持了aaRS通过纳入新的结构域以加速进化过程的理论,并且也从不同角度为aaRS/tRNA共进化理论提供了可靠的依据.
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关键词
亮氨酰-TRNA合成酶
tRNA^Leu
氨基酰化反应
编校反应
CP1结构域
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职称材料
题名
A3启动子缺陷piggyBac转座子在家蚕中的转基因研究
被引量：
5
1
作者
杨惠娟
庄兰芳
范伟
兰天云
丁农
陆长德
钟伯雄
机构
浙江大学动物科学学院
国家分子生物学重点实验室
浙江省湖州市农业科学院
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第1期41-44,共4页
基金
国家高技术研究发展计划“863”项目(编号2006AA10A-118)
国家重点基础研究发展计划“973”项目(编号200-5CB121003)
+1 种基金
博士点基金项目(编号20070335148)
浙江省科技厅重点科研项目(编号2005C22046)
文摘
构建了A3启动子缺陷piggyBac转座质粒,以增强型绿色荧光蛋白基因EGFP为标记基因对家蚕品种N is-tari进行转基因实验,发现其具有较高的表达EGFP的转化效率,G0代中EGFP阳性蛾区检出占总注射蚕卵的比率达0.618%,且EGFP的表达呈组织特异性。PCR实验分析也证实了标记基因的成功导入。该实验中标记基因及转基因阳性个体均易于检出,为启动子缺陷转基因方法在家蚕组织特异性启动子筛选研究上的应用奠定了基础。
关键词
家蚕
转基因
启动子缺陷
PIGGYBAC转座子
Keywords
Bombyx mori
Transgene
Promoter-deficient
piggyBac transposon
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
RANTES基因启动子区多态性对其蛋白表达的影响
被引量：
2
2
作者
刘传合
陈虹
胡良平
伏瑾
张惠芹
张嘉芹
张嘉琳
陈育智
机构
首都儿科研究所
中国医学科学院基础医学研究所
国家分子生物学重点实验室
中国军事医学科学院
生物
医学统计咨询中心
出处
《临床儿科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第9期605-608,共4页
基金
北京市自然科学基金资助项目(编号:7022010)
文摘
目的探讨调节正常T细胞表达和分泌活性因子(RANTES)基因启动子区单核苷酸多态性对其蛋白表达的影响。方法分别测定44例正常儿童、44例哮喘患儿血清中及45例哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清中RANTES的含量,同时对45例哮喘患儿DNA样本进行RANTES基因型确定。结果哮喘患儿血清中RANTES的水平显著高于正常对照儿童(P<0.01)。未发现RANTES-403(G/A)、-28(C/G)两位点的不同基因型显著影响哮喘患儿血清RANTES蛋白的水平(P>0.05),但两位点的不同基因型哮喘患儿,其PBMC分泌的RANTES水平有所不同:-403GA及-403AA基因型个体低于-403GG纯合型(P=0.06),-28CG杂合型个体低于CC纯合型(P<0.05)。结论趋化因子RANTES在哮喘的发病中具有重要作用,RANTES基因启动子区单核甘酸多态性可能通过影响其基因的表达,进而影响蛋白的表达,最终影响哮喘的发病过程和严重程度。
关键词
趋化因子
调节正常T细胞表达和分泌活性因子
基因
多态性
Keywords
chemokine
RANTES
gene
polymorphism
分类号
R725.6 [医药卫生—儿科]
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职称材料
题名
电压门控钠离子通道与恶性肿瘤的转移
被引量：
4
3
作者
潘惠艳
黄秉仁
机构
首都医科大学附属北京妇产医院中心
实验室
中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院
生物
化学和
分子生物学
系
国家
医学
分子生物学
重点
实验室
出处
《生理科学进展》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期217-220,共4页
基金
国家重点实验室专项经费(2060204)
教育部留学回国启动基金
北京市自然科学基金(7112052)资助课题
文摘
电压门控钠离子通道(VGSC)是可兴奋组织中动作电位的关键离子通道,具有重要的生理功能。近年来国内外研究发现,VGSC在转移的前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等细胞中表达,其增加了癌细胞的运动和侵袭,促使了癌症的转移,其还将被作为治疗靶点而进行药物开发和临床应用。
关键词
电压门控钠离子通道
癌症
转移
侵袭
分类号
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞乙酰胆碱酯酶的研究
被引量：
2
4
作者
许彩民
卢红
崔毅
潘华珍
张之南
机构
中国医学科学院基础医学研究所
国家
医学
分子生物学
重点
实验室
出处
《生物化学杂志》
CSCD
1994年第4期471-476,共6页
基金
国家自然科学基金
文摘
用化学方法测定了乙酰胆碱脂酶（ＡｃｈＥ）活性，阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞远低于正常红细胞。为了进一步研究ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞，采用Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ＭＢ结合ＡｃｈＥ单抗亲和层析法分离出ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞。用间接免疫荧光流式细胞术检测，ＰＮＨ细胞ＡｃｈＥ低于正常，而ＰＮＨＡｃｈＥ（—）红细胞未能检出ＡｃｈＥ。３Ｈ－肌醇标记实验证明，正常红细胞膜区带４．１处有较高的放射活性，而ＰＮＨ红细胞极低，ＰＮＨＡｃｈＥ（—）红细胞完全无放射活性。用ＡｃｈＥ抗体做免疫印渍实验证明了ＡｃｈＥ存在区带４．１部位。ＤＭＰＣ诱导正常和ＰＮＨ红细胞，检测二者囊泡化的程度，发现ＰＮＨ病人红细胞远比正常人红细胞易于囊泡化。
关键词
乙酰胆碱酯酶
血红蛋白尿症
红细胞
Keywords
Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria
Acetylcholinesterase
Glycosylphosphatidyinositol anchored membrane protein
Vesiculation
分类号
R556.640.2 [医药卫生—血液循环系统疾病]
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职称材料
题名
PPARγ——节俭基因的主控基因
被引量：
2
5
作者
常永生
方福德
机构
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所
国家
医学
分子生物学
重点
实验室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期315-320,共6页
文摘
过氧化物酶体增殖是细胞对多种化合物如某些天然的或修饰过的脂肪酸、邻苯二甲酸盐、白三烯拮抗物、乙酰唾液酸等或者某种病理状态如细胞形态、酶活性剧变等反应的结果。过氧化物酶体增殖现象主要发生在肝、肾、脂肪等组织,激素和营养因子都能调节过氧化物酶体增殖反应。持续的过氧化物酶体增殖可导致肝癌。组织特异性表达的三种过氧化物酶体增殖体激活受体(peroxisomeproliferatoractivatedreceptor,PPAR)包括PPARα、PPARβ、PPARγ,三者组成独特的细胞核受体亚族。经过十几年的科学研究,PPAR的功能已比较明晰。研究表明,PPARγ基因作为节俭基因的主控基因,调控着与脂肪生成、糖尿病、肥胖相关基因的表达,该受体还参与多种细胞生理活动的转录调控,包括细胞周期调控、炎症、免疫调节、肿瘤细胞的活动。
关键词
过氧化物酶体增殖体激活受体
节俭基因
主控基因
Keywords
peroxisome proliferator activated receptor
thrifty gene
master genes
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
p75NTR-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达、鉴定和活性分析
被引量：
2
6
作者
周素芳
王欣
陈虹
黄秉仁
机构
广西医科大学生化教研室
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期604-609,共6页
文摘
为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815 3α factor p75NTR Fc .重组质粒电转化酵母GS115细胞后摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达的融合蛋白经ProteinA亲和层析和SephadexG 10 0纯化 ,Western印迹、N末端测序进行蛋白质鉴定 ,ELISA及细胞培养进行生物活性分析 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中 ,诱导第 4d的表达量最高 ,占上清总蛋白 6 0 %以上 ,ProteinA纯化后有 2条蛋白带 ,免疫印迹分析这 2条蛋白带均能和抗p75及抗IgG抗体结合 ,N末端序列测定证实 1条为完整p75NTR Fc ,1条为其蛋白酶降解带 .ELISA等分析表明 ,p75NTR Fc能与NGF结合 ,p75NTR Fc能抑制NGF对PC12细胞的分化作用 .
关键词
神经生长因子低亲和力受体
FC融合蛋白
基因表达
毕赤酵母
Keywords
p75NTR, Fc fusion protein, gene expression, Pichia pastoris
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆
被引量：
1
7
作者
李永海
苏华
何维
崔莲仙
越智宏伦
机构
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室
国家
医学
分子生物学
重点
实验室
日本老化制御研究所
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第2期158-162,共5页
基金
日本老化制御研究所支持的中日合作研究项目!(衰老的免疫学机制研究
1997-2000)&&
文摘
目的 小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法 利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果 对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论 小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。
关键词
DDRT-PCR
小鼠
胸腺
基因
差异表达
克隆
Keywords
DDRT-PCR
mice
thymus
gene
differential expression
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
T超嗜热菌Aquifex aeolicus亮氨酰-tRNA合成酶和tRNA^(Leu)的相互作用(英文)
8
作者
赵明炜
王恩多
机构
中国科学院上海生命科学研究院生化细胞所
国家分子生物学重点实验室
出处
《中国科学院研究生院学报》
CAS
CSCD
2007年第1期131-136,共6页
基金
supported by the Natural Science Foundation of China (30170224 ,30270310 and 30330180) ,the Chinese Academy of Sciences (KSCX-2-2-04) ,Committee of Science and Technologyin Shanghai (02DJ140567)
文摘
超嗜热菌Aquifexaeolicus亮氨酰-tRNA合成酶(αβ-LeuRS)是已知的唯一的双肽链LeuRS.通过αβ-LeuRS和大肠杆菌LeuRS相应肽段的重组和重组酶性质的研究发现,αβ-LeuRS的α亚基C末端36个氨基酸对于αβ-LeuRS的氨基酰化活力至关重要.αβ-LeuRS的两个亚基人为融合得到的单亚基酶SLeuRS-αβ,具有完全的野生型双亚基酶活力,其热稳定性显著增强.同时,通过亚基重组揭示了LeuRS对于不同种属的tRNALeu的识别元件位于α亚基内,而其中的CP1结构域不仅是LeuRS行使编校功能的结构基础,对于LeuRS识别不同种属来源的tRNALeu也是十分重要的.通过不同来源的LeuRS一级结构比较,克隆了单独的CP1结构域组成的肽(CP1),发现唯有A.aeolicusαβ-LeuRS的CP1对错误的氨基酰化产物具有体外编校功能.它与其他3种来源于细菌LeuRS的CP1都能够编校误氨基酰化的古老形式的亮氨酸小螺旋(minihelixLeu).通过同源序列比较发现,在αβ-LeuRS的CP1内存在一个由20个氨基酸组成的特异的结构模体,它对CP1发挥体外编校功能必不可少,引入原本不具有体外编校功能的E.coli的CP1后则可使其获得编校功能,但是该模体不影响全酶的编校功能.αβ-LeuRS中与tRNA结合有关的亚基——β亚基也可以赋予E.coliCP1编校功能.这些研究结果充分表明,来源于古老的超嗜热菌A.aeolicus的αβ-LeuRS保留了进化的遗迹——具有编校活力的CP1和与其编校功能密切相关的由20个氨基酸组成的特异的结构模体,它们在进化过程中随着其他结构域招募进合成酶中而逐渐失去了对全酶编校功能的作用.这一发现有力地支持了aaRS通过纳入新的结构域以加速进化过程的理论,并且也从不同角度为aaRS/tRNA共进化理论提供了可靠的依据.
关键词
亮氨酰-TRNA合成酶
tRNA^Leu
氨基酰化反应
编校反应
CP1结构域
Keywords
Leucyl-tRNA synthetase, tRNA^Lau, aminoacylation, editing, CP1 domain
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
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小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆
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T超嗜热菌Aquifex aeolicus亮氨酰-tRNA合成酶和tRNA^(Leu)的相互作用(英文)
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