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实时重组酶辅助扩增技术快速检测狗源性成分
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作者 刘明明 颜海燕 +3 位作者 周朝旭 叶语桦 李志刚 肖昭竞 《肉类研究》 北大核心 2025年第4期24-29,共6页
为快速检测狗源性成分,针对cytb基因保守区域设计3对重组酶辅助扩增(recombinaseaided amplification,RAA)引物和1条核酸外切酶(exonuclease,exo)探针,通过引物和探针浓度的筛选,构建一种实时RAA(real-time RAA,Rt-RAA)方法。利用交叉... 为快速检测狗源性成分,针对cytb基因保守区域设计3对重组酶辅助扩增(recombinaseaided amplification,RAA)引物和1条核酸外切酶(exonuclease,exo)探针,通过引物和探针浓度的筛选,构建一种实时RAA(real-time RAA,Rt-RAA)方法。利用交叉反应和重复性实验对该检测方法的特异性和稳定性进行评估,并将Rt-RAA方法灵敏度以及对混合模拟样品和市售样品的检测结果与相应的国标检测方法进行对比。结果表明,Rt-RAA检测方法特异性强、稳定性好,在30 min内可检测到目的序列,对狗源性成分的检出限为0.2%,明显优于实时荧光聚合酶链式反应检测方法,应用Rt-RAA方法与国标方法对模拟样品和市售实际样品检测结果完全一致。因此,本研究建立的Rt-RAA检测方法适用于狗源性成分的检测,为肉源性成分鉴定提供了另一种快速、准确的新方法。 展开更多
关键词 实时荧光重组酶辅助扩增技术 狗源性成分 肉制品掺假
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低共熔溶剂液液微萃取高效液相色谱法检测调味油中6种工业染料 被引量:5
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作者 余文琴 肖昭竞 +2 位作者 冉宗勤 阮燕 谢蔓莉 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第23期7573-7580,共8页
目的建立一种基于低共熔溶剂(deep eutectic solvent,DES)液液微萃取结合高效液相色谱法检测调味油中6种工业染料的分析方法。方法合成了8种不同DES并对比了其对酸性橙Ⅱ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄O、罗丹明B的萃取效率,... 目的建立一种基于低共熔溶剂(deep eutectic solvent,DES)液液微萃取结合高效液相色谱法检测调味油中6种工业染料的分析方法。方法合成了8种不同DES并对比了其对酸性橙Ⅱ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄O、罗丹明B的萃取效率,研究了取样量、DES摩尔比、DES添加量以及正己烷添加比例对萃取率的影响。结果采用氯化胆碱:L(+)乳酸(摩尔比1:3)组成的DES,当取样量为1 g,添加1 mL正己烷,DES用量为600μL的条件下萃取率最高。6种工业染料在0.05~2.00 mg/L(罗丹明B:0.05~2.00μg/L)浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9998,在0.05、0.10、1.00 mg/kg(罗丹明B:0.05、0.10、1.00μg/kg)3个不同浓度添加水平下回收率为67.5%~115.8%,相对标准偏差为1.5%~11.6%,检出限为0.02~20.00μg/kg,定量限为0.05~50.00μg/kg。结论该方法对调味油中6种工业染料有很好的选择性和萃取效果,采用绿色环保的DES萃取目标物,减少了有机试剂的用量。 展开更多
关键词 低共熔溶剂 液液微萃取 高效液相色谱法 工业染料 调味油
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利用双重实时荧光重组酶辅助扩增技术快速检测肉制品中鼠源性成分 被引量:1
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作者 刘明明 周朝旭 +2 位作者 颜海燕 田碧英 李根容 《肉类研究》 北大核心 2024年第9期15-20,共6页
为实现肉制品中大鼠和小鼠源性成分的同步检测,基于实时荧光重组酶辅助扩增(real-time recombinase-aided amplification,Rt-RAA)技术,以大鼠COX3基因和小鼠16S rRNA基因序列保守区域为靶标,分别设计相应的Rt-RAA引物和探针,通过反应参... 为实现肉制品中大鼠和小鼠源性成分的同步检测,基于实时荧光重组酶辅助扩增(real-time recombinase-aided amplification,Rt-RAA)技术,以大鼠COX3基因和小鼠16S rRNA基因序列保守区域为靶标,分别设计相应的Rt-RAA引物和探针,通过反应参数的优化确定最佳双重Rt-RAA检测反应条件。进一步对建立的双重Rt-RAA检测方法进行特异性、灵敏度及稳定性评估,并应用该方法对模拟市售肉制品进行检测。结果表明,所建立的双重RtRAA检测方法特异性强、稳定性好,大鼠和小鼠源性成分的检出限分别为0.5%和0.2%,同步检测2种源性成分检出限为0.5%,同步检测混合模拟市售样品检出限仍低至0.5%,双重Rt-RAA与实时荧光定量聚合酶链式反应对市售样品和模拟样品检测结果高度一致。因此,本研究建立的双重Rt-RAA检测方法适用于大鼠和小鼠源性成分的检测,为肉制品掺假检测提供了一种快捷、高效及准确的新方法。 展开更多
关键词 大鼠 小鼠 肉制品 实时荧光重组酶辅助扩增技术 肉制品掺假
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转基因食品分析检测技术研究进展 被引量:1
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作者 刘明明 秦爱 +4 位作者 袁磊 王娟 余秋地 张明娟 李根容 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第10期155-164,共10页
随着转基因研发技术的快速发展及在农业领域产业化应用的不断推进,抗逆、抗病和高产优质的转基因(genetically modified,GM)作物品种日渐增多。但转基因食品(genetically modified food,GMF)在带来极大经济效益同时,其安全性也备受争议... 随着转基因研发技术的快速发展及在农业领域产业化应用的不断推进,抗逆、抗病和高产优质的转基因(genetically modified,GM)作物品种日渐增多。但转基因食品(genetically modified food,GMF)在带来极大经济效益同时,其安全性也备受争议。因此,世界各国不断建立和完善GM产品标识制度,有些国家甚至规定了转基因成分(genetically modified ingredients,GMIs)具体阈值限量。为更好地对GMF安全性提供评价,识别和量化GMIs检测技术的持续创新与发展尤为重要。本文从基于外源核酸水平的检测技术和基于外源蛋白的检测技术两个方面,系统介绍了定性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术、定量PCR技术、等温扩增技术、基因组测序技术、酶联免疫吸附技术、免疫层析试纸条技术以及较新的CRISPR/Cas核酸检测技术等重要技术的原理、应用情况和研究进展,并总结分析各转基因食品成分检测技术的优缺点和亟需解决的难点问题,以期为促进GMF快速、准确及高通量检测技术发展,为确保我国GMF安全的高效准确的监督提供有效支撑。 展开更多
关键词 转基因食品 检测技术 优缺点
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液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法测定牛奶中22种真菌毒素 被引量:6
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作者 童兰艳 许博舟 +6 位作者 聂雪梅 王秀娟 马佳慧 国伟 李根容 龚迎昆 许秀丽 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期986-994,共9页
真菌毒素因具有致癌性、致突变性、肝毒性、肾毒性、免疫毒性、神经毒性及致畸性等危害而广受关注。本研究建立了高效液相色谱⁃四极杆/静电场轨道阱质谱法同时测定牛奶中22种真菌毒素的分析方法。针对真菌毒素的特性和牛奶样品基质的特... 真菌毒素因具有致癌性、致突变性、肝毒性、肾毒性、免疫毒性、神经毒性及致畸性等危害而广受关注。本研究建立了高效液相色谱⁃四极杆/静电场轨道阱质谱法同时测定牛奶中22种真菌毒素的分析方法。针对真菌毒素的特性和牛奶样品基质的特点选择简单、有效、快速的前处理方法,重点优化了提取溶剂种类、溶剂用量和提取盐用量。样品用0.5%甲酸乙腈提取,氯化钠分层,低温高速离心净化,上清液经氮吹浓缩后复溶,ZORBAX Eclipse Plus C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,同位素内标法定量。化合物在正离子模式下电离,在数据依赖型质谱扫描模式下对目标物进行定性。结果表明,22种目标物在0.5~100.0μg/L线性范围内呈良好的线性关系,相关系数(R^(2))均大于0.999,该方法的检出限(S/N=3)为0.3~0.5μg/kg,定量限(S/N=10)为1.0~1.5μg/kg。以牛奶为基质,在1.5、5.0、15μg/kg加标水平下,22种真菌毒素的回收率为84.7%~100.8%,相对标准偏差为1.2%~9.9%。应用本方法对25份实际牛奶样品进行分析检测,结果显示22种真菌毒素均未检出。该方法灵敏度好,准确度高,可作为牛奶中真菌毒素的高通量筛查和确证检测方法。 展开更多
关键词 液相色谱⁃四极杆/静电场轨道阱质谱 快速前处理 真菌毒素 牛奶
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时间分辨荧光免疫法快速测定禽蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺 被引量:1
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作者 童兰艳 龚迎昆 +4 位作者 李根容 肖昭竞 章健 李明伟 谭立华 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第23期80-88,共9页
目的建立时间分辨荧光免疫分析法同时快速检测禽蛋中氟苯尼考、氟苯尼考胺的分析方法。方法采用乙腈对禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺进行提取,并用二氯乙酸酐将提取液中的氟苯尼考胺衍生化为氟苯尼考,最后用时间分辨荧光免疫分析技术对氟... 目的建立时间分辨荧光免疫分析法同时快速检测禽蛋中氟苯尼考、氟苯尼考胺的分析方法。方法采用乙腈对禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺进行提取,并用二氯乙酸酐将提取液中的氟苯尼考胺衍生化为氟苯尼考,最后用时间分辨荧光免疫分析技术对氟苯尼考总量进行快速检测。结果衍生试剂二氯乙酸酐体积分数为3%时,氟苯尼考胺生成氟苯尼考含量最高,副产物最少。氟苯尼考及氟苯尼考胺检出限为10μg/kg。灵敏度、特异性和相对准确度为100%,假阴性率和假阳性率均为0%。另外,采用本研究建立的时间分辨荧光免疫分析技术对市售禽蛋样品进行检测,其结果与食品安全国家标准检测结果基本一致。结论本方法前处理简单、快速,检测成本低、结果准确可靠,适合基层日常监管,重大活动食品安全的现场快速筛查、快速检测,提高检测效率。 展开更多
关键词 禽蛋 氟苯尼考 氟苯尼考胺 衍生化反应 时间分辨荧光免疫技术
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