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基于CRISPR系统的禽源多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌检测方法的建立
1
作者
李燕红
李鋆涛
+2 位作者
杨天沐
贾梦言
熊文广
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第2期912-921,共10页
[目的]建立禽源多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌的可视化检测方法。[方法]将重组酶聚合酶扩增(RPA)与成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR-Cas)系统相结合,针对两种病原菌设计特异性CRISPR相关RNA(crRNA)序列,筛选RPA引物,并对CRI...
[目的]建立禽源多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌的可视化检测方法。[方法]将重组酶聚合酶扩增(RPA)与成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR-Cas)系统相结合,针对两种病原菌设计特异性CRISPR相关RNA(crRNA)序列,筛选RPA引物,并对CRISPR检测体系进行优化,探究单管双靶标扩增体系,评估检测方法的特异性及灵敏度,验证临床样品检测的可行性。[结果]本研究建立的检测方法最优组合为:Buffer中Mg^(2+)浓度20 mmol/L、Cas12a蛋白80 nmol/L、crRNA 400 nmol/L、ROX荧光探针14μmol/L。特异性及灵敏度检测结果显示,本研究建立的检测方法特异性良好,在蓝光下观察,灵敏度与实时荧光定量PCR一致,比普通PCR高100倍。临床样品检测结果显示,巴氏杆菌、大肠杆菌均被有效检出,本研究所建立方法的临床符合率为100%。[结论]本研究成功建立了禽源多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌的可视化检测方法,其特异性及灵敏度较高,可以准确检测临床样品中的目标病原菌。试验结果为监测与防控禽源细菌性疾病提供了新方法。
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关键词
多杀性巴氏杆菌
大肠杆菌
重组酶聚合酶扩增(RPA)
CRISPR-Cas12a
可视化检测
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职称材料
题名
基于CRISPR系统的禽源多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌检测方法的建立
1
作者
李燕红
李鋆涛
杨天沐
贾梦言
熊文广
机构
广东省
兽
药
研制与
安全
评价
重点
实验室
国家
兽
药
安全
评价
(
环境
评估
)
实验室
(
华南
农大
)
国家
兽
医微生物耐
药
性风险
评估
实验室
出处
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第2期912-921,共10页
基金
广东省基础与应用基础研究基金(2023A1515030137)。
文摘
[目的]建立禽源多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌的可视化检测方法。[方法]将重组酶聚合酶扩增(RPA)与成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR-Cas)系统相结合,针对两种病原菌设计特异性CRISPR相关RNA(crRNA)序列,筛选RPA引物,并对CRISPR检测体系进行优化,探究单管双靶标扩增体系,评估检测方法的特异性及灵敏度,验证临床样品检测的可行性。[结果]本研究建立的检测方法最优组合为:Buffer中Mg^(2+)浓度20 mmol/L、Cas12a蛋白80 nmol/L、crRNA 400 nmol/L、ROX荧光探针14μmol/L。特异性及灵敏度检测结果显示,本研究建立的检测方法特异性良好,在蓝光下观察,灵敏度与实时荧光定量PCR一致,比普通PCR高100倍。临床样品检测结果显示,巴氏杆菌、大肠杆菌均被有效检出,本研究所建立方法的临床符合率为100%。[结论]本研究成功建立了禽源多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌的可视化检测方法,其特异性及灵敏度较高,可以准确检测临床样品中的目标病原菌。试验结果为监测与防控禽源细菌性疾病提供了新方法。
关键词
多杀性巴氏杆菌
大肠杆菌
重组酶聚合酶扩增(RPA)
CRISPR-Cas12a
可视化检测
Keywords
Pasteurella multocida
Escherichia coli
recombinant enzyme polymerase amplification(RPA)
CRISPR-Cas12a
visual detection
分类号
S858.292 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
基于CRISPR系统的禽源多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌检测方法的建立
李燕红
李鋆涛
杨天沐
贾梦言
熊文广
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025
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