湖北道地药材贝母ISSR反应体系优化及多态性引物筛选 被引量：2

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作者 蒋小刚 王华 +1 位作者 郭坤元 张美德 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期642-650,共9页

【目的】优化湖北贝母ISSR-PCR体系,并筛选适用于湖北贝母的多态性引物,为后续湖北贝母的分子辅助育种及遗传多样性和亲缘关系分析等提供科学依据。【方法】采用U12(43)均匀设计和单因素试验结合的方法,获得PCR体系各组分(2×Taq Ma... 【目的】优化湖北贝母ISSR-PCR体系,并筛选适用于湖北贝母的多态性引物,为后续湖北贝母的分子辅助育种及遗传多样性和亲缘关系分析等提供科学依据。【方法】采用U12(43)均匀设计和单因素试验结合的方法,获得PCR体系各组分(2×Taq Master Mix,模板DNA,引物)的最佳用量,在此基础上通过梯度退火温度实验探究引物的最佳退火温度。【结果】湖北贝母ISSR-PCR最佳反应体系为:20μL反应体系中,2×Taq Master Mix 10.5μL,模板DNA 0.8μL(40.0 ng),引物2.2μL(5.5μmol),ddH2O 6.5μL,ISSR-PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性0.75 min,54.3℃~60.0℃退火0.75 min,72℃延伸1.5 min,40个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。利用优化的反应体系筛选了6条多态性较好、扩增稳定的引物(UBC848、UBC850、UBC853、UBC857、UBC859、UBC866),其最佳退火温度分别为59.3、58.2、56.9、54.3、59.3和60.0℃。用优化的ISSR-PCR体系对12份不同产地的湖北贝母资源进行PCR扩增,结果表明,该反应体系稳定可靠,不同产地湖北贝母具有较丰富的遗传多样性。【结论】优化的湖北贝母ISSR-PCR反应体系可用于湖北贝母种质资源鉴定、亲缘关系和遗传多样性分析等研究。 展开更多

关键词 湖北贝母 ISSR 分子标记 体系优化

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黄精精深加工研究现状

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作者 朱越 李治宽 +3 位作者 高翔 杨静丽 何美军 彭诗琴 《农业与技术》 2025年第4期35-40,共6页

黄精含有多种生物活性成分,具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功能,是我国首批进入“按照传统既是食品又是中药材的物质目录”的中药材。随着人们对健康和中药认识的提高,黄精的市场需求不断增长、加工产业迅速发展,但存在加工技术水平... 黄精含有多种生物活性成分,具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功能,是我国首批进入“按照传统既是食品又是中药材的物质目录”的中药材。随着人们对健康和中药认识的提高,黄精的市场需求不断增长、加工产业迅速发展,但存在加工技术水平较低、深加工能力薄弱等问题。本文基于黄精活性物质的生物活性,阐述了黄精多糖、黄酮类和皂苷类化学成分,总结了黄精的精深加工产品最新研究进展,以期为黄精精深加工产业提供参考。 展开更多

关键词 黄精 活性成分 功能活性 精深加工

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党参精深加工研究进展

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作者 秦靖茹 彭诗琴 +3 位作者 杨敏 李会玲 罗凯 何美军 《农业与技术》 2025年第19期1-6,共6页

党参作为药食同源的传统补益药材,含有多糖、黄酮、生物碱等活性成分,具有补气健脾、免疫调节等功效。随着健康消费升级,党参的市场需求持续增长,加工产业快速发展。然而,目前党参产业仍面临加工技术粗放化、深加工能力薄弱等问题。本... 党参作为药食同源的传统补益药材,含有多糖、黄酮、生物碱等活性成分,具有补气健脾、免疫调节等功效。随着健康消费升级,党参的市场需求持续增长,加工产业快速发展。然而,目前党参产业仍面临加工技术粗放化、深加工能力薄弱等问题。本文系统梳理了党参炮炙与干燥技术方法,并综述了其在健康食品和医药制剂等领域的精深加工产品进展,以期为党参精深加工产业提供参考。 展开更多

关键词 党参 炮炙 干燥 精深加工

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恩施产区湖北贝母乙酸乙酯组分挥发性成分与抗菌活性研究 被引量：4

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作者 李宇 刘翠君 +5 位作者 艾伦强 方昕悦 刘玉 袁名远 冉亚兰 何美军 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期1088-1094,共7页

为了研究恩施产区湖北贝母乙酸乙酯组分的抗菌活性和挥发性成分,以恩施产区湖北贝母乙酸乙酯组分为研究对象,运用滤纸片法测试对11株供试菌的抑菌活性;采用微量肉汤稀释法测定对供试菌的MIC值;运用GC-MS鉴定挥发性成分;运用气相色谱外... 为了研究恩施产区湖北贝母乙酸乙酯组分的抗菌活性和挥发性成分,以恩施产区湖北贝母乙酸乙酯组分为研究对象,运用滤纸片法测试对11株供试菌的抑菌活性;采用微量肉汤稀释法测定对供试菌的MIC值;运用GC-MS鉴定挥发性成分;运用气相色谱外标法测定贝母素乙含量。研究结果显示:湖北贝母乙酸乙酯组分对苏云金芽孢杆菌、溶藻弧菌、鲍曼不动杆菌有中度敏感抑制活性,其MIC值分别为2.37、5.93、11.86 mg·mL^(-1);湖北贝母乙酸乙酯组分的抑菌活性与贝母素乙的抑菌活性存在显著性差异,推测贝母素乙不是湖北贝母乙酸乙酯组分中主要发挥抑菌活性的成分;从乙酸乙酯组分中共鉴定出16个挥发性代谢产物,主要成分为脂肪烃(4.55%)、脂肪酸(24.07%)、含氮生物碱(23.02%);湖北贝母乙酸乙酯组分中贝母素乙的含量为(16.19±0.16)mg·g^(-1),加标回收率为96.58%,相对标准偏差为3.98%。湖北贝母乙酸乙酯组分的优良抑菌活性和抑菌广谱性,为开发优质植物来源的新型天然抗生素提供了重要参考。 展开更多

关键词 恩施 湖北贝母 乙酸乙酯组分 挥发性成分 抑菌活性 贝母素乙

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恩施藤茶乙醇提取物对高温煮熟鱼肉腐败菌的抑制作用研究 被引量：3

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作者 李宇 刘翠君 +3 位作者 赵仁君 罗建群 冉亚兰 何美军 《保鲜与加工》 CAS 2021年第1期124-130,共7页

以生长菌落数为评价指标,研究恩施藤茶乙醇提取物对高温煮熟鱼肉的防腐效果;采用稀释平板法分离纯化和16S rDNA测序技术鉴定导致高温煮熟鱼肉腐败变质的细菌;运用滤纸片法测试恩施藤茶乙醇提取物对腐败变质细菌的抑菌活性;通过测定恩施... 以生长菌落数为评价指标,研究恩施藤茶乙醇提取物对高温煮熟鱼肉的防腐效果;采用稀释平板法分离纯化和16S rDNA测序技术鉴定导致高温煮熟鱼肉腐败变质的细菌;运用滤纸片法测试恩施藤茶乙醇提取物对腐败变质细菌的抑菌活性;通过测定恩施藤茶乙醇提取物对腐败变质细菌生长曲线、导电率及生物大分子含量的影响研究其抑菌机理。结果表明:在储藏15 d内,30 mg·mL-1恩施藤茶乙醇提取物能完全抑制高温煮熟鱼肉中细菌生长;分离、鉴定了2株导致高温煮熟鱼肉腐败变质的细菌Bacillus methylotrophicus T-10、Alcaligenes faecalis T-9;恩施藤茶乙醇提取物对这2株腐败菌具有中敏抑菌活性(抑菌圈直径:10~20 mm),其最小抑菌浓度(MIC)分别为16.0 mg·mL-1和20.0 mg·mL-1;恩施藤茶乙醇提取物通过破坏菌体细胞膜的完整性,致使生物大分子物质外溢而发挥抑菌作用。 展开更多

关键词 腐败细菌 藤茶乙醇提取物 分离 鉴定 抑菌活性 最小抑菌浓度

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尖吻蝮蛇蛇毒酒的安全性评价研究

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作者 杨静丽 方昕悦 +7 位作者 李治宽 张中华 谭发祥 戴奎 李宇 王晴芳 罗凯 何美军 《湖北农业科学》 2024年第12期158-162,共5页

系统评价尖吻蝮蛇蛇毒酒(Deinagkistrodon acutus snake venom wine,DSVW)的出血、水肿、肌肉、肝肾毒性,为DSVW的安全生产和运用提供参考。取尖吻蝮蛇的新鲜蛇毒,加入高粱酒炮制获得DSVW;运用小鼠模型皮下注射DSVW研究出血、水肿、肌... 系统评价尖吻蝮蛇蛇毒酒(Deinagkistrodon acutus snake venom wine,DSVW)的出血、水肿、肌肉、肝肾毒性,为DSVW的安全生产和运用提供参考。取尖吻蝮蛇的新鲜蛇毒,加入高粱酒炮制获得DSVW;运用小鼠模型皮下注射DSVW研究出血、水肿、肌肉毒性等急性毒性,通过口服21 d研究其对肝、肾组织的慢性毒性。结果表明,DSVW注射(5 mg/mL)的小鼠背部皮肤都没有明显的出血点(≤2.4 cm^(2)),小鼠小腿增重与空白对照组无显著差异,肌酸激酶为(0.32±0.03)U/mL与CK组(0.34±0.02)U/mL无显著差异,DSVW无显著的急性出血、水肿、肌肉毒性;DSVW灌胃[0.024 mg(/g·d)]的小鼠血清尿素、肌酐、谷丙转氨酶、谷草转氨酶分别为(6.04±0.83)μmol/L、(13.00±2.93)mmol/L、(36.67±9.29)U/L、(89.67±7.09)U/L,与CK组无显著差异,且体重、肾肝质量、肝肾/体重、肝肾组织病理切片均无显著差异,DSVW无显著的慢性肝、肾毒性。经炮制获得的DSVW的无出血、水肿、肌肉、肝肾毒性,为尖吻蝮蛇蛇毒酒安全生产和使用提供了理论依据。 展开更多

关键词 尖吻蝮蛇蛇毒酒(Deinagkistrodon acutus snake venom wine DSVW) 出血毒性 水肿毒性 肌肉毒性 肝肾毒性

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湖北贝母石油醚段的抗菌活性和化学成分研究 被引量：2

7

作者 方诗琪 李宇 +3 位作者 黄东海 艾伦强 刘翠君 何美军 《湖北农业科学》 2020年第22期160-165,共6页

为探究湖北贝母(Fritillaria hupehensis Hsiao et k.c.Hsia)石油醚段的抗菌活性和化学成分,将湖北贝母经60%乙醇溶液超声提取获得总浸膏,再采用石油醚萃取获得石油醚段浸膏,利用滤纸片法、稀释倒平板法、超微量紫外分光光度计以及电导... 为探究湖北贝母(Fritillaria hupehensis Hsiao et k.c.Hsia)石油醚段的抗菌活性和化学成分,将湖北贝母经60%乙醇溶液超声提取获得总浸膏,再采用石油醚萃取获得石油醚段浸膏,利用滤纸片法、稀释倒平板法、超微量紫外分光光度计以及电导仪对湖北贝母石油醚段的抗菌活性和机制进行了探索;同时,利用GC-MS、1D和2D NMR等对湖北贝母石油醚段的成分进行了探索。结果表明,湖北贝母石油醚段溶液对于苏云金芽孢杆菌、绿脓杆菌有中度敏感抑制活性,对肺炎克雷伯杆菌ATCC13883、金黄色葡萄球菌ATCC29213、枯草芽孢杆菌有轻度敏感抑制活性。其中,只有苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌的MIC/MBC小于4.0 mg/mL。湖北贝母石油醚段很可能通过破坏细胞膜从而减缓了苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌生长,从而达到抗菌的效果,并获得了对应总离子流中的27种化合物。 展开更多

关键词 湖北贝母(Fritillaria hupehensis Hsiao et k.c.Hsia) 抗菌活性 石油醚段 化合物

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3种重楼属药用植物挥发性成分和抑菌活性研究 被引量：2

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作者 何银生 邱姣 +4 位作者 李宇 袁名远 何美军 张美德 杨旭 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第8期80-83,共4页

目的 比较3种5年生重楼属药用植物的挥发性成分和抑菌活性差异,为推动重楼资源在医药方面的开发和合理利用提供参考。方法 采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术研究七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼3种重楼属药用植物提取物挥发性成分,采... 目的 比较3种5年生重楼属药用植物的挥发性成分和抑菌活性差异,为推动重楼资源在医药方面的开发和合理利用提供参考。方法 采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术研究七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼3种重楼属药用植物提取物挥发性成分,采用滤纸片法研究3种提取物对11种供试菌的抑菌活性。结果 从七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼中分别鉴定出33、29、22种挥发性成分,占其相对百分含量29.35%、30.13%、20.09%,三者相同挥发性成分14种;酯类化合物为主要挥发性成分,其中己二酸二(2-乙基己)酯含量最高,七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼中分别为4.28%、4.94%、5.43%。七叶一枝花对苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌等4株供试菌有良好抑制效果,啟良重楼对苏云金芽孢杆菌、多耐铜绿假单胞菌、藤黄微球菌等3株供试菌有良好抑制效果,黑籽重楼对苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌2株供试菌有良好抑制效果。结论 3种重楼属药用植物提取物挥发性成分的组成和含量存在很大差异;对11株供试菌的抑菌效果依次为七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼。 展开更多

关键词 啟良重楼 七叶一枝花 黑籽重楼 挥发性成分 抑菌活性

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拟南芥核酸酶基因AtCaN2克隆及功能分析

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作者 郭坤元 张欣欣 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期1-7,共7页

为了研究拟南芥核酸酶AtCaN2基因在植物生长发育过程中的作用与功能,从拟南芥中克隆了核酸酶AtCaN2基因,并对该基因进行生物信息学分析,亚细胞定位分析,蛋白质诱导、表达、纯化及功能研究。结果表明,AtCaN2蛋白等电点为8.45,化学式为C11... 为了研究拟南芥核酸酶AtCaN2基因在植物生长发育过程中的作用与功能,从拟南芥中克隆了核酸酶AtCaN2基因,并对该基因进行生物信息学分析,亚细胞定位分析,蛋白质诱导、表达、纯化及功能研究。结果表明,AtCaN2蛋白等电点为8.45,化学式为C1116H1788N310O335S3,共含有3552个原子数,为亲水性蛋白;AtCaN2与十字花科亚麻荠的同源性较高,同源性为87.89%,与谷子、高粱和玉米的同源性较低,同源性分别是56.42%,57.35%,56.47%,且在氨基酸序列中间具有高度保守的D-X-D序列;同时进化树分析显示AtCaN2与十字花科亚麻荠的亲缘性最近,与谷子、玉米等禾本科植物的亲缘性比较远,这些结果同氨基酸序列比对的结果一致;亚细胞定位结果显示其定位于细胞质,与预测结果相符;蛋白质诱导和纯化得到大小约为35 ku的His-AtCaN2融合蛋白;Western Blot分析显示,诱导表达的融合蛋白正确翻译表达,且没有出现结构上的断裂或者降解的情况;小量诱导和大量诱导均有点突变后的His-AtCaN2(M)融合蛋白表达,且纯化后得到了点突变His-AtCaN2(M)较单一的条带;蛋白酶活性分析表明,His-AtCaN2融合蛋白对核酸底物具有降解能力,表现出较高的活性,而His-AtCaN2(M)点突变融合蛋白对核酸底物没有降解能力,底物基本上未降解。研究结果可以为下一步在植物体内研究AtCaN2基因的相关机理作用提供基础。 展开更多

关键词 拟南芥 核酸酶 AtCaN2 亚细胞定位 原核表达 酶活性

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湖北贝母活性成分与内生菌次级代谢产物研究 被引量：2

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作者 袁名远 李宇 +4 位作者 谭旭辉 刘玉 方昕悦 冉亚兰 何美军 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期27-34,共8页

为探究湖北贝母不同组织贝母素乙含量、内生菌组成及其次级代谢产物的抑菌活性,采用气相色谱法测定湖北贝母鳞茎、花、叶的贝母素乙含量,分别利用16S rDNA和ITS测序技术鉴定内生细菌和真菌,并通过琼脂扩散法、微量二倍稀释法研究内生菌... 为探究湖北贝母不同组织贝母素乙含量、内生菌组成及其次级代谢产物的抑菌活性,采用气相色谱法测定湖北贝母鳞茎、花、叶的贝母素乙含量,分别利用16S rDNA和ITS测序技术鉴定内生细菌和真菌,并通过琼脂扩散法、微量二倍稀释法研究内生菌次级代谢产物对10株供试菌的抑菌活性。结果表明:湖北贝母叶中贝母素乙含量最高,达(3.99±0.10)mg/g,其含量是鳞茎的1.78倍、花的4.24倍;从湖北贝母中分离鉴定了4株内生菌,分别为Pseudomonas sp.BM-X-6、Arthrinium sp.BM-Z-5、Aspergillus sp.BM-Z-1、Aspergillus sp.BM-Z-3;3株内生真菌次级代谢产物抑菌活性均优于细菌Pseudomonas sp.BM-X-6,其中Arthrinium sp.BM-Z-5的次级代谢产物抑菌谱最广,对肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、鲍曼不动杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有中度抑制活性。 展开更多

关键词 湖北贝母 贝母素乙 内生菌 次级代谢产物 抑菌活性 药用植物 新型抗菌药物

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拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因AtCYS6克隆及功能分析

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作者 郭坤元 张欣欣 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期8-14,共7页

为了研究拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂AtCYS6基因在植物生长发育过程中的作用与功能,从拟南芥中克隆了半胱氨酸蛋白酶抑制剂AtCYS6基因,并对该基因进行生物信息学分析,亚细胞定位分析,蛋白质诱导、表达、纯化及功能研究。结果表明,AtCYS... 为了研究拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂AtCYS6基因在植物生长发育过程中的作用与功能,从拟南芥中克隆了半胱氨酸蛋白酶抑制剂AtCYS6基因,并对该基因进行生物信息学分析,亚细胞定位分析,蛋白质诱导、表达、纯化及功能研究。结果表明,AtCYS6蛋白等电点为5.85,化学式为C1179H1848N322O348S6,共含有3703个原子数,为亲水性蛋白;AtCYS6与十字花科的荠菜、荠蓝的同源性较高,同源性分别为81.1%,80.3%,同水稻、玉米和大豆的同源性较低,同源性分别为55.5%,54.3%,56.6%,且在氨基酸序列中间具有高度保守的Q-V-G(Gln-Val-Gly)序列;同时进化树分析显示AtCYS6与同属于十字花科的荠菜、荠蓝的亲缘性较近,同水稻、玉米、高粱、谷子等禾本科植物的亲缘性较远;亚细胞定位结果显示其定位于细胞质,与预测结果相符合;蛋白质诱导、表达和纯化得到大小约为52 ku的融合蛋白,其中AtCYS6蛋白质的分子量约为26 ku,与预测值相符合;Western Blot分析显示,诱导表达的融合蛋白正确翻译表达,且没有出现结构上的断裂或者降解的情况;蛋白酶活性分析表明,AtCYS6对木瓜蛋白酶具有抑制作用。研究结果可以为下一步在植物体内研究该基因的相关机理作用提供基础。 展开更多

关键词 拟南芥 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 亚细胞定位 原核表达 酶活性

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不同表型的利川鸡爪黄连的形态学和生物学活性差异研究

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作者 方昕悦 李宇 +5 位作者 冉亚兰 龙入海 杨永康 张乔会 谭生权 何美军 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期870-877,共8页

为培育优质高产的特色经济作物鸡爪黄连(Coptis chinensis Franch),开展对两种不同表型的大叶、细叶鸡爪黄连的形态学和生物学活性差异研究.统计分析不同表型的鸡爪黄连形态学差异,并运用高效液相色谱法(HPLC)检测盐酸小檗碱含量;采用... 为培育优质高产的特色经济作物鸡爪黄连(Coptis chinensis Franch),开展对两种不同表型的大叶、细叶鸡爪黄连的形态学和生物学活性差异研究.统计分析不同表型的鸡爪黄连形态学差异,并运用高效液相色谱法(HPLC)检测盐酸小檗碱含量;采用滤纸片法对十二种供试菌进行抗菌活性筛选,并运用微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(MIC);通过对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基体外清除试验,测定其抗氧化活性.4年生大叶鸡爪黄连的平均株高31.83±2.66 cm、叶柄长度15.77±2.05 mm、叶绿素含量(SPAD)43.41±1.28、鲜重30.47±12.19 g、干重9.07±2.93 g,显著优于小叶鸡爪黄连:株高21.33±1.25 cm、叶柄长度11.81±1.85 mm、叶绿素含量(SPAD)35.76±1.98、鲜重3.87±0.31g、干重1.97±0.24 g;小叶鸡爪黄连的盐酸小檗碱含量(41.2±2.24μg·g^(-1))显著高于大叶鸡爪黄连(13.3±0.9μg·g^(-1));大叶鸡爪黄连对7株供试菌有较好的抑菌作用,MIC值范围为3.91~7.81 mg·mL^(-1),小叶黄连对6种供试菌有较好的抑菌作用,MIC值范围10.94~21.88 mg·mL^(-1);小叶黄连较大叶黄连更好抗氧化活性,IC50分别为0.259、0.387 mg·mL^(-1).大叶鸡爪黄连的产量、抑菌活性显著优于小叶鸡爪黄连,但是抗氧化活性、盐酸小檗碱含量显著低于小叶鸡爪黄连. 展开更多

关键词 鸡爪黄连 表型 小檗碱 抗菌 抗氧化

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湖北贝母石油醚段化学成分研究

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作者 李宇 彭湘敏 +4 位作者 张娜 刘丹 冉亚兰 赵仁君 何美军 《农业与技术》 2020年第21期4-6,共3页

探究湖北贝母石油醚段的化学成分。本文将湖北贝母经60%乙醇超声提取获得总浸膏,再采用石油醚萃取获得石油醚段浸膏;利用1D和2D NMR等对湖北贝母石油醚段的成分进行了探索。结果表明,石油醚段经硅胶柱色谱及半制备高效液相分离到2个化合... 探究湖北贝母石油醚段的化学成分。本文将湖北贝母经60%乙醇超声提取获得总浸膏,再采用石油醚萃取获得石油醚段浸膏;利用1D和2D NMR等对湖北贝母石油醚段的成分进行了探索。结果表明,石油醚段经硅胶柱色谱及半制备高效液相分离到2个化合物,利用1D和2D NMR波谱数据分析,鉴定其结构分别为beta-Sitosterol(1)、ethyl ferulate(2)。该研究可为湖北贝母药材的开发利用、临床使用提供理论依据。 展开更多

关键词 湖北贝母 抗菌活性 石油醚段 化合物

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