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rstA基因缺失对肠炎沙门菌生物学特性的影响
1
作者
张春晓
赵奇
+6 位作者
侯冠欣
王利丽
孙欣艺
李红
史秋梅
董玉来
张志强
《中国预防兽医学报》
北大核心
2025年第3期231-238,共8页
为研究rstA基因对肠炎沙门菌C50336生物学特性的影响,本研究利用λ-Red同源重组技术构建肠炎沙门菌C50336(WT)rstA基因缺失株C50336ΔrstA(KO)、rstA基因回补株C50336ΔrstA/pBR322-rstA(RS),经PCR及测序鉴定正确后,测定培养9 h期间各...
为研究rstA基因对肠炎沙门菌C50336生物学特性的影响,本研究利用λ-Red同源重组技术构建肠炎沙门菌C50336(WT)rstA基因缺失株C50336ΔrstA(KO)、rstA基因回补株C50336ΔrstA/pBR322-rstA(RS),经PCR及测序鉴定正确后,测定培养9 h期间各时间点各菌株OD_(600nm)值,分析各菌株的生长特性,并利用半固体培养基检测各菌株的运动能力,结果显示3株菌的生长特性和运动能力均无明显差异。通过结晶紫染色法测定菌株生物被膜(BF)的形成能力,并利用刚果红培养基和荧光剂培养基分别检测BF中curli菌毛及纤维素的形成情况,结果显示,与WT、RS菌株相比,KO菌株BF的形成能力极显著降低(P<0.01),rstA基因对菌毛形成无显著影响,但与BF中纤维素的形成有关。采用细菌计数法检测WT、KO、RS菌株在7种应激条件下的生存率,结果显示,除热应激条件下三者生存率无差异外,KO菌株在酸、碱、高渗、低渗、铁饥饿和氧化应激环境中的生存率较WT和RS菌株均极显著降低(P<0.01)。通过细菌计数法检测WT、KO、RS菌株对Caco-2细胞的黏附性、侵袭能力以及在巨噬细胞RAW264.7中的胞内存活能力,结果显示,3株菌对Caco-2细胞的黏附率均无显著差异;与WT、RS菌株相比,KO菌株的侵袭率极显著降低(P<0.01),胞内存活率显著降低(P<0.05)。通过RT-qPCR检测肠炎沙门菌内18个毒力基因的相对转录水平,结果显示,相比于WT、RS菌株,KO菌株的ssaV、tatA、xthA、sipA、mrr1、ompR、sipB、orf245、hflk、pipB、invH、flgG、csgD共13个毒力基因的相对转录水平均极显著下调(P<0.01)。本研究首次证实了rstA基因参与肠炎沙门菌C50336 BF形成、抗应激、细胞侵袭、胞内存活以及毒力基因相对转录水平等机制,为沙门菌rstA基因的进一步研究提供参考。
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关键词
肠炎沙门菌
rstA基因缺失
生物学特性
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职称材料
基于gI蛋白的牛传染性鼻气管炎病毒抗体间接ELISA方法的建立及初步应用
2
作者
李驰欢
郭福强
+7 位作者
李红
朱思萍
刘小琛
张晓禹
董玉来
史秋梅
高光平
张志强
《中国预防兽医学报》
2025年第6期601-605,共5页
为建立牛传染性鼻气管炎的血清学诊断方法,本研究经PCR扩增牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的gI基因,并利用大肠杆菌表达系统表达重组g I蛋白(rgI),利用His蛋白纯化试剂盒纯化rgI并经western blot检测后以其为包被抗原,通过优化各反应条件...
为建立牛传染性鼻气管炎的血清学诊断方法,本研究经PCR扩增牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的gI基因,并利用大肠杆菌表达系统表达重组g I蛋白(rgI),利用His蛋白纯化试剂盒纯化rgI并经western blot检测后以其为包被抗原,通过优化各反应条件初步建立检测IBRV的间接ELISA方法,结果显示,表达的IBRV rgI大小约49ku,与预期相符,且该蛋白可与IBRV阳性血清反应。间接ELISA优化后的最佳条件为rgI的包被浓度100 ng/mL,4℃包被12 h;封闭液为1%明胶,4℃封闭12 h;待检血清稀释度为1:50,室温孵育30 min;兔抗牛IgG-HRP稀释度为1:5000,37℃孵育45 min;TMB底物37℃反应10 min。利用该方法检测IBRV、牛口蹄疫病毒、牛布鲁氏菌、牛冠状病毒、牛副流感病毒3型等阳性血清,评估其特异性,结果显示,仅传染性鼻气管炎IBRV阳性血清为阳性,其余相关病毒及细菌阳性血清均为阴性结果。利用该方法检测2倍倍比稀释(1:25~1:3200)的IBRV阳性血清,评估其敏感性,结果显示,1:400稀释的阳性血清检测仍为阳性结果。采用同一批次和不同批次包被的酶标板检测3份IBRV阳性和3份IBRV阴性血清,进行重复性试验,结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数CV值均小于10%,重复性良好。利用该间接ELISA方法检测120份临床血清样品,结果显示,检测到阳性样品80份,阴性样品40份,与商品化IBRV g D抗体试剂盒和中和试验的总符合率分别为90%和83%。本研究首次基于gI蛋白建立的检测IBRV抗体的间接ELISA方法特异性、敏感性和重复性均较好,为IBRV的临床检测与筛查提供了可行技术手段。
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关键词
牛传染性鼻气管炎
gI蛋白
ELISA
在线阅读
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职称材料
题名
rstA基因缺失对肠炎沙门菌生物学特性的影响
1
作者
张春晓
赵奇
侯冠欣
王利丽
孙欣艺
李红
史秋梅
董玉来
张志强
机构
河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室
围场满族蒙古族自治县新瑞农业开发有限公司
出处
《中国预防兽医学报》
北大核心
2025年第3期231-238,共8页
基金
中央引导地方科技发展资金项目(236Z6604G)
河北省现代农业产业体系肉牛产业创新团队疫病防控与减抗岗位(HBCT2024240201)
+3 种基金
河北省高层次人才资助项目(C20231014)
河北科技师范学院高校基本科研任务业务费专项项目(2023JK14)
承德国家可持续发展议程创新示范区建设科技专项项目(202302F040)
河北省自然科学基金资助项目(C2024407005)。
文摘
为研究rstA基因对肠炎沙门菌C50336生物学特性的影响,本研究利用λ-Red同源重组技术构建肠炎沙门菌C50336(WT)rstA基因缺失株C50336ΔrstA(KO)、rstA基因回补株C50336ΔrstA/pBR322-rstA(RS),经PCR及测序鉴定正确后,测定培养9 h期间各时间点各菌株OD_(600nm)值,分析各菌株的生长特性,并利用半固体培养基检测各菌株的运动能力,结果显示3株菌的生长特性和运动能力均无明显差异。通过结晶紫染色法测定菌株生物被膜(BF)的形成能力,并利用刚果红培养基和荧光剂培养基分别检测BF中curli菌毛及纤维素的形成情况,结果显示,与WT、RS菌株相比,KO菌株BF的形成能力极显著降低(P<0.01),rstA基因对菌毛形成无显著影响,但与BF中纤维素的形成有关。采用细菌计数法检测WT、KO、RS菌株在7种应激条件下的生存率,结果显示,除热应激条件下三者生存率无差异外,KO菌株在酸、碱、高渗、低渗、铁饥饿和氧化应激环境中的生存率较WT和RS菌株均极显著降低(P<0.01)。通过细菌计数法检测WT、KO、RS菌株对Caco-2细胞的黏附性、侵袭能力以及在巨噬细胞RAW264.7中的胞内存活能力,结果显示,3株菌对Caco-2细胞的黏附率均无显著差异;与WT、RS菌株相比,KO菌株的侵袭率极显著降低(P<0.01),胞内存活率显著降低(P<0.05)。通过RT-qPCR检测肠炎沙门菌内18个毒力基因的相对转录水平,结果显示,相比于WT、RS菌株,KO菌株的ssaV、tatA、xthA、sipA、mrr1、ompR、sipB、orf245、hflk、pipB、invH、flgG、csgD共13个毒力基因的相对转录水平均极显著下调(P<0.01)。本研究首次证实了rstA基因参与肠炎沙门菌C50336 BF形成、抗应激、细胞侵袭、胞内存活以及毒力基因相对转录水平等机制,为沙门菌rstA基因的进一步研究提供参考。
关键词
肠炎沙门菌
rstA基因缺失
生物学特性
Keywords
Salmonella enteritidis
rstA gene deletion
biological properties
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
在线阅读
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职称材料
题名
基于gI蛋白的牛传染性鼻气管炎病毒抗体间接ELISA方法的建立及初步应用
2
作者
李驰欢
郭福强
李红
朱思萍
刘小琛
张晓禹
董玉来
史秋梅
高光平
张志强
机构
河北科技师范学院动物科技学院/河北省预防兽医重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
2025年第6期601-605,共5页
基金
承德国家可持续发展议程创新示范区建设科技专项项目(202302F040)
中央引导地方科技发展资金项目(236Z6604G)
+3 种基金
河北省现代农业产业体系肉牛产业创新团队疫病防控与减抗岗位(HBCT2024240201)
河北省高层次人才资助项目(C20231014)
河北科技师范学院高校基本科研任务业务费专项项目(2023JK14)
河北省自然科学基金资助项目(C2024407005)。
文摘
为建立牛传染性鼻气管炎的血清学诊断方法,本研究经PCR扩增牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的gI基因,并利用大肠杆菌表达系统表达重组g I蛋白(rgI),利用His蛋白纯化试剂盒纯化rgI并经western blot检测后以其为包被抗原,通过优化各反应条件初步建立检测IBRV的间接ELISA方法,结果显示,表达的IBRV rgI大小约49ku,与预期相符,且该蛋白可与IBRV阳性血清反应。间接ELISA优化后的最佳条件为rgI的包被浓度100 ng/mL,4℃包被12 h;封闭液为1%明胶,4℃封闭12 h;待检血清稀释度为1:50,室温孵育30 min;兔抗牛IgG-HRP稀释度为1:5000,37℃孵育45 min;TMB底物37℃反应10 min。利用该方法检测IBRV、牛口蹄疫病毒、牛布鲁氏菌、牛冠状病毒、牛副流感病毒3型等阳性血清,评估其特异性,结果显示,仅传染性鼻气管炎IBRV阳性血清为阳性,其余相关病毒及细菌阳性血清均为阴性结果。利用该方法检测2倍倍比稀释(1:25~1:3200)的IBRV阳性血清,评估其敏感性,结果显示,1:400稀释的阳性血清检测仍为阳性结果。采用同一批次和不同批次包被的酶标板检测3份IBRV阳性和3份IBRV阴性血清,进行重复性试验,结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数CV值均小于10%,重复性良好。利用该间接ELISA方法检测120份临床血清样品,结果显示,检测到阳性样品80份,阴性样品40份,与商品化IBRV g D抗体试剂盒和中和试验的总符合率分别为90%和83%。本研究首次基于gI蛋白建立的检测IBRV抗体的间接ELISA方法特异性、敏感性和重复性均较好,为IBRV的临床检测与筛查提供了可行技术手段。
关键词
牛传染性鼻气管炎
gI蛋白
ELISA
Keywords
infectious bovine rhinotracheitis
gI protein
ELISA
分类号
S852.65 [农业科学]
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题名
作者
出处
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被引量
操作
1
rstA基因缺失对肠炎沙门菌生物学特性的影响
张春晓
赵奇
侯冠欣
王利丽
孙欣艺
李红
史秋梅
董玉来
张志强
《中国预防兽医学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于gI蛋白的牛传染性鼻气管炎病毒抗体间接ELISA方法的建立及初步应用
李驰欢
郭福强
李红
朱思萍
刘小琛
张晓禹
董玉来
史秋梅
高光平
张志强
《中国预防兽医学报》
2025
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