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九龙牦牛ELOVL3基因克隆、真核表达载体构建及组织表达谱分析
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作者 司比努尔·牙生江 者玉琦 +2 位作者 钟金城 武志娟 柴志欣 《华北农学报》 北大核心 2025年第2期201-209,共9页
极长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)主要参与合成极长链脂肪酸(VLCFA),在脂肪酸代谢过程中扮演重要角色。旨为克隆九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列,构建ELOVL3基因真核表达载体,并预测分析其生物学功能,通过PCR技术扩增九龙牦牛ELOVL3基因的... 极长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)主要参与合成极长链脂肪酸(VLCFA),在脂肪酸代谢过程中扮演重要角色。旨为克隆九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列,构建ELOVL3基因真核表达载体,并预测分析其生物学功能,通过PCR技术扩增九龙牦牛ELOVL3基因的CDS区序列,并通过同源重组将其插入到pcDNA3.1载体中以构建重组质粒。采用限制性酶切及PCR技术验证重组质粒,结合测序结果,利用在线预测软件分析其蛋白编码序列的生物学功能。另外,针对ELOVL3基因在mRNA水平和蛋白水平的表达量,进行qPCR和Western Blot检测。结果表明:九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列全长813 bp,共编码270个氨基酸;酶切、PCR及测序鉴定,确认成功构建pcDNA3.1-ELOVL3真核表达载体。生物信息学分析结果显示,ELOVL3基因编码蛋白属于疏水性蛋白,共有6个跨膜结构域及27个磷酸化位点。系统发育树显示,与九龙牦牛亲缘关系最近的是普通牛,最远的是原鸡。此外,ELOVL3基因在九龙牦牛肺脏组织中表达量最高。 展开更多
关键词 牦牛 ELOVL3基因 基因克隆 真核表达载体构建
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过瘤胃蛋氨酸对牦牛半腱肌肉品质、挥发性风味物质及脂肪酸组成的影响 被引量:6
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作者 左子珍 王海波 +4 位作者 柴志欣 符健慧 张翔飞 罗晓林 钟金城 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1102-1114,共13页
旨在探究过瘤胃蛋氨酸对牦牛半腱肌肉品质、挥发性风味物质及脂肪酸组成的影响。选用4岁、体重为(252.79±15.95)kg的健康麦洼公牦牛24头,将其随机分为4组:基础日粮(CON)、基础日粮加5 g·d^(-1)过瘤胃蛋氨酸(RPM1)、基础日粮加... 旨在探究过瘤胃蛋氨酸对牦牛半腱肌肉品质、挥发性风味物质及脂肪酸组成的影响。选用4岁、体重为(252.79±15.95)kg的健康麦洼公牦牛24头,将其随机分为4组:基础日粮(CON)、基础日粮加5 g·d^(-1)过瘤胃蛋氨酸(RPM1)、基础日粮加10 g·d^(-1)过瘤胃蛋氨酸(RPM2)和基础日粮加15 g·d^(-1)过瘤胃蛋氨酸(RPM3),预饲10 d,舍饲70 d后屠宰。结果表明,RPM3组脂肪含量显著高于RPM1组与RPM2组(P<0.05);RPM1组、RPM2组、RPM3组的粗蛋白含量均显著高于CON组(P<0.05)。牦牛半腱肌样品中共检验出42种挥发性风味物质,通过相对气味活度值计算发现,CON组、RPM1组、RPM2组和RPM3组关键挥发性风味物质分别有9种、11种、9种和10种,关键挥发性风味物质为牦牛半腱肌提供了独特的肉香与油脂香等;CON组、RPM1组与RPM2组的主要挥发性风味物质为壬醛,而RPM3组的主要挥发性物质为1-辛烯-3-醇;RPM1组的醛类物质含量最高,且具有独特的水果香味与坚果味,RPM2组的醇类与烃类物质的种类最多。四组半腱肌样品中共检测出16种脂肪酸。半腱肌CON组饱和脂肪酸总量显著低于RPM1组和RPM2组(P<0.05),其中RPM1组与RPM2组棕榈酸含量显著高于其他组(P<0.05),RPM1组二十二碳酸含量显著高于CON组和RPM3组(P<0.05);RPM1组单不饱和脂肪酸总量著高于RPM2组与RPM3组(P<0.05),其中RPM1组肉豆蔻油酸含量显著低于其他组(P<0.05),CON组十七碳烯酸含量显著高于其他组(P<0.05),RPM1组二十四碳烯酸含量显著高于RPM2组(P<0.05);各组间半腱肌多不饱和脂肪酸总量无差异(P>0.05)。综上所述,日粮添加10 g·d^(-1)的过瘤胃蛋氨酸组牦牛半腱肌中风味丰富度与挥发性风味物质含量最高;日粮添加5 g·d^(-1)过瘤胃蛋氨酸组牦牛半腱肌中脂肪酸含量最高,且分布合理。 展开更多
关键词 过瘤胃蛋氨酸 牦牛半腱肌 肉品质 挥发性风味物质 脂肪酸
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西藏特色牦牛mtDNA ND1遗传多样性及系统进化分析
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作者 者玉琦 柴志欣 +3 位作者 武志娟 姜辉 钟金城 信金伟 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期201-210,共10页
旨在通过mtDNA ND1探究6个西藏特色牦牛群体的遗传多样性、系统进化及亲缘关系,为西藏牦牛的遗传多样性、历史演化以及遗传资源保护与利用等提供理论依据。利用PCR和直接测序法分别测定了西藏帕里牦牛、嘉黎牦牛、工布江达牦牛、斯布牦... 旨在通过mtDNA ND1探究6个西藏特色牦牛群体的遗传多样性、系统进化及亲缘关系,为西藏牦牛的遗传多样性、历史演化以及遗传资源保护与利用等提供理论依据。利用PCR和直接测序法分别测定了西藏帕里牦牛、嘉黎牦牛、工布江达牦牛、斯布牦牛、江达牦牛、类乌齐牦牛6个群体共95头个体ND1基因蛋白质编码区(CDS)序列,利用DNAMAN、DNASP 5.1、Mega 7.0、Arlequin 3.5.2等软件分析其序列多态性、单倍型多样性、遗传距离等,并构建单倍型网络图及系统发育树。结果表明,西藏牦牛群体ND1基因CDS区序列长度均为956 bp,共检测获得78个变异位点和16种单倍型,平均单倍型多样性(Hd)及核苷酸多样性(Pi)分别为0.670和0.00421,Tajima′s D均为负值;根据群体遗传差异的分子方差分析可知,西藏牦牛群体内的变异程度大于群体间变异;斯布牦牛与嘉黎牦牛之间的分化程度较大,其余大部分群体间的分化程度为中等或较弱。此外,通过聚类分析发现,类乌齐牦牛单独聚为一类,而嘉黎牦牛、工布江达牦牛、斯布牦牛、江达牦牛先聚为一类,然后再与帕里牦牛聚为一大类;16种单倍型可分为2个聚类簇,说明西藏牦牛可能存在2个母系起源;与其他牛种进行聚类分析,发现家牦牛、爪哇野牛和普通牛可能是西藏牦牛的混合母系起源。西藏牦牛遗传多样性十分丰富,其中类乌齐牦牛遗传多样性最丰富,6个牦牛群体存在2个母系起源。 展开更多
关键词 西藏牦牛 ND1基因 遗传多样性 系统进化 遗传分化
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基于mtDNA COX3基因对西藏特色牦牛群体遗传结构的分析
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作者 者玉琦 武志娟 +3 位作者 王吉坤 钟金城 柴志欣 信金伟 《草业学报》 CSCD 北大核心 2023年第9期231-240,共10页
为探究西藏特色牦牛群体的遗传多样性、系统进化及亲缘关系,本研究利用PCR和直接测序法分别测定了西藏帕里牦牛、嘉黎牦牛、类乌齐牦牛、工布江达牦牛、斯布牦牛、桑日牦牛、江达牦牛7个群体共140头个体的mtDNA COX3基因蛋白质编码区(C... 为探究西藏特色牦牛群体的遗传多样性、系统进化及亲缘关系,本研究利用PCR和直接测序法分别测定了西藏帕里牦牛、嘉黎牦牛、类乌齐牦牛、工布江达牦牛、斯布牦牛、桑日牦牛、江达牦牛7个群体共140头个体的mtDNA COX3基因蛋白质编码区(CDS)序列,利用DNAMAN、DNASP 5.1、MEGA 7.0软件分析了其序列多态性、单倍体多样性,并构建了系统发育树。结果表明,西藏牦牛群体的COX3基因CDS序列长度均为781 bp,共检测获得55个变异位点。在140头个体中共检测出11种单倍型,平均单倍型多样性(H_(d))及核苷酸多样性(P_(i))分别为0.665和0.00480,说明西藏牦牛具有丰富的遗传多样性。西藏7个牦牛群体可分为2大类,类乌齐牦牛单独聚为一类,其余牦牛群体为一类。此外,11种单倍型可分为2个聚类簇,说明西藏牦牛可能存在两个母系起源。西藏7个牦牛群体可划分到家牦牛、原牛和普通牛三大单倍型群体中,其中Hap_2、Hap_3、Hap_4、Hap_6、Hap_7、Hap_8、Hap_10、Hap_11这8个单倍型属于家牦牛支系,Hap_5和Hap_9属于原牛和普通牛支系,Hap_1属于野牦牛支系,说明家牦牛、原牛和普通牛是西藏牦牛的混合母系起源,但受家牦牛影响较大。研究结果旨在为西藏牦牛的演化、遗传多样性以及遗传资源保护和利用提供理论依据。 展开更多
关键词 西藏牦牛 COX3基因 遗传多样性 系统进化
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过表达PRKAA1抑制山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积
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作者 李海洋 邵鹏 +6 位作者 杨昌恒 林亚秋 王永 杜站宇 向华 黄炼 朱江江 《华北农学报》 2025年第5期208-215,共8页
为了明确PRKAA1基因在山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积中的作用,通过RT-PCR方法克隆山羊PRKAA1基因的完整CDS区,并开展生物信息学分析;利用双酶切法构建PRKAA1基因过表达载体,并转染山羊肌内前体脂肪细胞。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检... 为了明确PRKAA1基因在山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积中的作用,通过RT-PCR方法克隆山羊PRKAA1基因的完整CDS区,并开展生物信息学分析;利用双酶切法构建PRKAA1基因过表达载体,并转染山羊肌内前体脂肪细胞。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PRKAA1基因在幼年期与青年期背最长肌的表达水平,同时检测前体脂肪细胞在诱导分化过程中PRKAA1基因的表达水平及脂代谢相关基因的表达。采用油红O染色法对PRKAA1基因在脂滴形成过程中的作用进行了观察和研究。研究结果表明,山羊PRKAA1基因的核苷酸序列总长为2520 bp。其中,5'非翻译区(UTR)包含3 bp,编码区(CDS)长达1680 bp,而3'非翻译区(UTR)则为837 bp,该基因所编码的蛋白质由559个氨基酸残基组成。山羊PRKAA1基因的亲缘关系分析结果显示,绵羊被确定为其最近的亲缘物种,其次是牛、猪、海豚、人、小鼠、大鼠,而鸡是亲缘关系最远的物种。PRKAA1基因在9月龄背最长肌中的表达水平低于2月龄的,诱导分化前体脂肪细胞过程中均存在表达,且在第6天达到最高。在过表达PRKAA1基因的试验中,山羊肌内前体脂肪细胞脂滴含量显著减少。此外,与脂肪代谢相关的基因,如SREBP1-c、FASN、ACC、AGPAT6、PLIN1、ATGL、ACOX1表达均显著下调,且其变化具有统计学意义。然而,DGAT1、DGAT2、LPL和HSL这几个基因的表达水平并未表现出显著变化。这些结果表明,PRKAA1基因的过表达可能通过多种代谢途径影响脂质沉积,具体而言,它能够抑制脂肪酸的从头合成、降低脂肪的合成速率,并提高脂肪的降解速率。这些机制共同作用,从而抑制山羊肌内前体脂肪细胞中的脂质沉积。 展开更多
关键词 山羊 PRKAA1 过表达 克隆 脂质沉积
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