根据GenBank上鸡白介素15(IL-15),白介素16(IL-16),白介素18(IL-18)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以β-actin基因为内参,采用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量PCR检测方法。将基因克隆至pMD19-T载体上,以各阳性质粒...根据GenBank上鸡白介素15(IL-15),白介素16(IL-16),白介素18(IL-18)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以β-actin基因为内参,采用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量PCR检测方法。将基因克隆至pMD19-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,鸡IL-15、IL-16、IL-18和β-actin基因的Ct值与标准品稀释度在2×102~2×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,r2均大于0.999。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。建立的鸡IL-15、IL-16和IL-18基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡白介素的定量分析奠定了基础。展开更多
文摘根据GenBank上鸡白介素15(IL-15),白介素16(IL-16),白介素18(IL-18)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以β-actin基因为内参,采用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量PCR检测方法。将基因克隆至pMD19-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,鸡IL-15、IL-16、IL-18和β-actin基因的Ct值与标准品稀释度在2×102~2×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,r2均大于0.999。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。建立的鸡IL-15、IL-16和IL-18基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡白介素的定量分析奠定了基础。
