本研究以绿色荧光蛋白为报告基因,转染兔卵母细胞,探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法。选择14只成年新西兰雌兔,每侧卵巢内分别打点注射0.25 mL 0.5-0.8 mg/mL的质粒,注射后第3日、第16日和第31日进行...本研究以绿色荧光蛋白为报告基因,转染兔卵母细胞,探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法。选择14只成年新西兰雌兔,每侧卵巢内分别打点注射0.25 mL 0.5-0.8 mg/mL的质粒,注射后第3日、第16日和第31日进行人工辅助配种;卵巢注射后第3日、第16日和31日随机各取1只雌兔卵巢做冰冻切片,置荧光显微镜下观察绿色荧光;应用PCR和Southern杂交检测转基因新生仔兔阳性率。结果经荧光显微镜观察,卵巢注射后第3日配种的雌兔卵巢冰冻切片及48 h以后的胚胎呈现绿色荧光;卵巢注射报告基因后第3日配种的雌兔后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测结果分别为72.7%和45.5%;第31日配种的后代阳性率最低,分别为36.8%和15.8%;第16日配种、第3日配种和第31日配种雌兔的阳性后代数量呈递减趋势。卵巢注射后第3日配种,虽然后代阳性率较高,但是其产仔数最少。实验结果表明,用注射器直接对卵巢打点注射外源基因生产转基因兔的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础。展开更多
基金Hi-Tech Research and Development Program (863)of China(2008AA101011)Foundation for the 11th FiveYear Program of China(2006BAD01A11)+1 种基金National Natural Science Foundation of China(30860193)the National Hi-important Transgenic Program of China(2009ZX08008-001B)
基金The 11th five-year Program of China (2006BAD01All)National Science Foundation of China (30860193)National Hi-Tech imporant Transgenic Program of China (2009ZX08008-001B)
文摘本研究以绿色荧光蛋白为报告基因,转染兔卵母细胞,探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法。选择14只成年新西兰雌兔,每侧卵巢内分别打点注射0.25 mL 0.5-0.8 mg/mL的质粒,注射后第3日、第16日和第31日进行人工辅助配种;卵巢注射后第3日、第16日和31日随机各取1只雌兔卵巢做冰冻切片,置荧光显微镜下观察绿色荧光;应用PCR和Southern杂交检测转基因新生仔兔阳性率。结果经荧光显微镜观察,卵巢注射后第3日配种的雌兔卵巢冰冻切片及48 h以后的胚胎呈现绿色荧光;卵巢注射报告基因后第3日配种的雌兔后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测结果分别为72.7%和45.5%;第31日配种的后代阳性率最低,分别为36.8%和15.8%;第16日配种、第3日配种和第31日配种雌兔的阳性后代数量呈递减趋势。卵巢注射后第3日配种,虽然后代阳性率较高,但是其产仔数最少。实验结果表明,用注射器直接对卵巢打点注射外源基因生产转基因兔的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础。
