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PDGF-A基因逆转录病毒载体的构建及其在猪骨髓间充质干细胞中表达的研究
被引量：
5
1
作者
闫国和
杨余亮
+6 位作者
侯爱莲
王锋超
许庆娥
熊玮
程天民
王军平
粟永萍
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第21期2024-2028,共5页
目的克隆血小板衍生生长因子A链(platelet-derived growth factor A chain,PDGF-A)基因,以逆转录病毒载体pLXSN为骨架携带PDGF-A基因转染猪骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,bMSCs),为应用PDGF-A基因修饰bM...
目的克隆血小板衍生生长因子A链(platelet-derived growth factor A chain,PDGF-A)基因,以逆转录病毒载体pLXSN为骨架携带PDGF-A基因转染猪骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,bMSCs),为应用PDGF-A基因修饰bMSCs进行创面修复奠定基础。方法采用RT-PCR二步分离法,以人肝癌细胞总RNA为模板,扩增PDGF-A基因的全长cDNA编码序列,构建PDGF-A基因的逆转录病毒载体pLXSN/PDGF-A,并将其导入病毒包装细胞PA317中,经G418筛选并扩增,以病毒液感染NIH3T3细胞,选出抗性克隆,测其病毒滴度,将高滴度病毒液感染bMSCs。采用RT-PCR、Southern blot和ELISA法,分别检测PDGF-A基因转染bMSCs的效率及PDGF-A在bMSCs中的表达水平;光镜、MTT法、成骨与成脂诱导分别检测bMSCs转染PDGF-A基因后的生长状态、增殖情况及干细胞特性。结果经测序验证,克隆到PDGF-A基因的全长cDNA序列与GenBank所报告的该基因序列完全一致。成功构建了PDGF-A链基因的逆转录病毒载体pLXSN/PDGF-A,并实现了PDGF-A基因在bMSCs的稳定表达。bMSCs转染PDGF-A后的生长状态、增殖情况良好,且仍具干细胞特性。结论成功地将PDGF-A基因克隆到pLXSN载体中,并实现了PDGF-A基因在bMSCs中的稳定表达。bMSCs转染PDGF-A后仍具干细胞特性。
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关键词
逆转录病毒载体
血小板衍生生长因子A链基因
骨髓间充质干细胞
稳定表达
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职称材料
题名
PDGF-A基因逆转录病毒载体的构建及其在猪骨髓间充质干细胞中表达的研究
被引量：
5
1
作者
闫国和
杨余亮
侯爱莲
王锋超
许庆娥
熊玮
程天民
王军平
粟永萍
机构
第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室
四川省古蔺县人民医院普外科
重庆医科大学基础医学院生理学教研室
解放军
第三军医大学西南
医院
呼吸内科
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第21期2024-2028,共5页
基金
国家重点基础研究发展计划(973计划,2005CB522605)
国家自然科学基金(30200142,30770929)
全军医学科研“十一五”计划科技攻关项目(06G076)~~
文摘
目的克隆血小板衍生生长因子A链(platelet-derived growth factor A chain,PDGF-A)基因,以逆转录病毒载体pLXSN为骨架携带PDGF-A基因转染猪骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,bMSCs),为应用PDGF-A基因修饰bMSCs进行创面修复奠定基础。方法采用RT-PCR二步分离法,以人肝癌细胞总RNA为模板,扩增PDGF-A基因的全长cDNA编码序列,构建PDGF-A基因的逆转录病毒载体pLXSN/PDGF-A,并将其导入病毒包装细胞PA317中,经G418筛选并扩增,以病毒液感染NIH3T3细胞,选出抗性克隆,测其病毒滴度,将高滴度病毒液感染bMSCs。采用RT-PCR、Southern blot和ELISA法,分别检测PDGF-A基因转染bMSCs的效率及PDGF-A在bMSCs中的表达水平;光镜、MTT法、成骨与成脂诱导分别检测bMSCs转染PDGF-A基因后的生长状态、增殖情况及干细胞特性。结果经测序验证,克隆到PDGF-A基因的全长cDNA序列与GenBank所报告的该基因序列完全一致。成功构建了PDGF-A链基因的逆转录病毒载体pLXSN/PDGF-A,并实现了PDGF-A基因在bMSCs的稳定表达。bMSCs转染PDGF-A后的生长状态、增殖情况良好,且仍具干细胞特性。结论成功地将PDGF-A基因克隆到pLXSN载体中,并实现了PDGF-A基因在bMSCs中的稳定表达。bMSCs转染PDGF-A后仍具干细胞特性。
关键词
逆转录病毒载体
血小板衍生生长因子A链基因
骨髓间充质干细胞
稳定表达
Keywords
retroviral vector
platelet-derived growth factor A chain gene
marrow mesenchymal stem cells
stable expression
分类号
R331.2 [医药卫生—人体生理学]
R394-33 [医药卫生—医学遗传学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PDGF-A基因逆转录病毒载体的构建及其在猪骨髓间充质干细胞中表达的研究
闫国和
杨余亮
侯爱莲
王锋超
许庆娥
熊玮
程天民
王军平
粟永萍
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
5
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