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大肠杆菌β-内酰胺酶耐药基因bla_(TEM),bla_(SHV),bla_(CTX-M)三重PCR检测方法建立 被引量：10
1
作者 田国宝 王红宁 +3 位作者 张安云 张毅 杨鑫 徐昌文 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期3-5,共3页
本研究以我国大肠杆菌中常见的3种β-内酰胺酶耐药基因(bla,TEMblaSHV和blaCTX-M)作为目的基因,设计3对特异性引物,建立了blaTEM,blaSHV和blaCTX-M耐药基因三重PCR检测方法。三重PCR反应体系为:10×PCR缓冲液2.5μL,MgCl2(25mmol/L)... 本研究以我国大肠杆菌中常见的3种β-内酰胺酶耐药基因(bla,TEMblaSHV和blaCTX-M)作为目的基因,设计3对特异性引物,建立了blaTEM,blaSHV和blaCTX-M耐药基因三重PCR检测方法。三重PCR反应体系为:10×PCR缓冲液2.5μL,MgCl2(25mmol/L)2.5μL,dNTP(2.5mmol/L)4μL,blaTEM,blaSHV和blaCTX-M上下游引物(25μmol/L)分别为0.25μL、0.5μL、1.0μL,Taq DNA聚合酶(2.5U/μL)0.4μL,模板2.5μL,反应总体积为25μL。反应参数为:94℃5min,94℃50s,55℃55s,72℃1min,32个循环,72℃延伸5min。本方法的建立为大肠杆菌中β-内酰胺酶耐药基因的快速检测及分子流行病学调查提供了新的手段。 展开更多
关键词 大肠杆菌 三重PCR Β-内酰胺酶 耐药基因
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不同品种猪感染HP-PRRSV后肺组织间PRRSV受体基因差异表达的研究 被引量：1
2
作者 康润敏 姬高升 +2 位作者 曾凯 吕学斌 殷明郁 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期538-545,共8页
为进一步了解藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)JXA1分离株具有不同易感性的分子机理,本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法比较分析藏猪、藏梅猪和大约克夏猪感染JXA1分离株前、感染后4、7和14d肺脏中H... 为进一步了解藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)JXA1分离株具有不同易感性的分子机理,本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法比较分析藏猪、藏梅猪和大约克夏猪感染JXA1分离株前、感染后4、7和14d肺脏中HSPG2、SIGLEC1、CD163、VIM和NMMHC-ⅡA5个PRRSV受体基因的差异表达情况。结果显示,藏猪感染JXA1分离株后4和14d肺脏中HSPG2的表达量显著高于感染前(P<0.05),而感染后7dHSPG2的表达量显著低于感染前(P<0.05),藏梅猪在感染后14dHSPG2的表达量显著高于感染后7d(P<0.05);藏猪感染后4和14d肺脏中SIGLEC1的表达量显著高于感染前(P<0.05),大约克夏猪感染后4、7和14dSIGLEC1的表达量均显著低于感染前(P<0.05);藏猪和藏梅猪感染后14d肺脏中CD163的表达量均显著高于感染前(P<0.05),大约克夏猪则感染后7和14d均显著低于感染前(P<0.05);藏猪感染后7d肺脏中VIM的表达量显著高于感染前(P<0.05),大约克夏猪在感染后7d显著低于感染前(P<0.05);藏梅猪感染后4d肺脏中NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前(P<0.05),大约克夏猪在感染后4和14dNMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前(P<0.05)。结果表明,5个PRRSV受体基因中,SIGLEC1和VIM基因可能是影响藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对JXA1分离株易感性存在差异的潜在关键基因。 展开更多
关键词 JXA1分离株 藏猪 藏梅猪 大约克夏猪 PRRSV受体基因 差异表达
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鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫增强效应研究
3
作者 张毅 王红宁 +4 位作者 樊汶樵 张安云 曹海鹏 郭自成 丁梦蝶 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期214-218,共5页
为研究鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DNA疫苗免疫效果的影响,根据GenBank登录的鸡IL-1β和IL-16序列设计两对引物,采用RT-PCR方法从四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆IL-1β和IL-16基因,与真核表达... 为研究鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DNA疫苗免疫效果的影响,根据GenBank登录的鸡IL-1β和IL-16序列设计两对引物,采用RT-PCR方法从四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆IL-1β和IL-16基因,与真核表达质粒pcDNA3.1(+)连接构建了pDNAIL-1β和pDNAIL-16。分别将两种重组质粒与IBVDNA联合免疫SPF雏鸡并进行攻毒试验。结果表明,pDNAIL-1β和pDNAIL-16均能促进血清中特异性抗体水平和外周血T淋巴细胞亚群数量的增加(p<0.05),增强IBV DNA疫苗对同型强毒的保护率15%～25%,pDNAIL-1β提升DNA疫苗的抗体水平的时间比pDNAIL-16多7d。试验表明,鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫具有增强作用。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 鸡IL-1β 鸡IL-16 免疫增强作用
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