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Smad3D和Smad7重组腺病毒载体的快速构建 被引量:4
1
作者 秦建军 周清华 +6 位作者 覃扬 孙芝琳 赵峰 孙泽芳 王艳萍 易成 朱文 《中国肺癌杂志》 CAS 2003年第3期169-171,共3页
目的 简化重组腺病毒载体的构造方法 ,构建含Smad3DcDNA或Smad7cDNA的重组腺病毒载体 ,为下一步的基因治疗奠定基础。方法 以AdEasySystem为基础 ,应用序贯化学转化方法 ,在大肠杆菌E .coliBJ5 183体内将携带目的基因的穿梭质粒和骨... 目的 简化重组腺病毒载体的构造方法 ,构建含Smad3DcDNA或Smad7cDNA的重组腺病毒载体 ,为下一步的基因治疗奠定基础。方法 以AdEasySystem为基础 ,应用序贯化学转化方法 ,在大肠杆菌E .coliBJ5 183体内将携带目的基因的穿梭质粒和骨架质粒重组。结果 成功构建了重组腺病毒载体pAd Smad3D和 pAd Smad7及空腺病毒载体 ,并经酶切鉴定证实。结论 用序贯化学转化方法 ,可以快速高效地在大肠杆菌内构建重组腺病毒载体。 展开更多
关键词 Smad3D SMAD7 腺病毒载体 基因治疗 AD 生长因子
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615小鼠H-2K^k基因cDNA的克隆及序列测定和分析 被引量:1
2
作者 李龙江 龚浩 +3 位作者 陈俊杰 王若菡 温玉明 王昌美 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期313-315,共3页
目的 :克隆 6 15小鼠主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ分子抗原识别基因H_2Kk 并测序分析 ,为转基因治疗提供目的基因。方法 :采用RT_PCR法从 6 15小鼠肝组织总RNA中获得 1 4kb的H_2Kk 基因cDNA ,将其定向连接至PGEM3Zf(+)载体 ,转化E coli... 目的 :克隆 6 15小鼠主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ分子抗原识别基因H_2Kk 并测序分析 ,为转基因治疗提供目的基因。方法 :采用RT_PCR法从 6 15小鼠肝组织总RNA中获得 1 4kb的H_2Kk 基因cDNA ,将其定向连接至PGEM3Zf(+)载体 ,转化E coliJM10 9,限制性内切酶筛选出阳性克隆PGEM3Zf(+)_H_2KkcDNA ,末端终止法完成H_2KkcDNA的全序列测定。结果 :测得的H_2KkcDNA序列与文献报道序列同源性高达 99% ,编码MHCⅠ分子抗原识别部位的氨基酸残基的核苷酸序列完全相同。结论 :成功克隆了 6 15小鼠MHCⅠ分子抗原识别基因 。 展开更多
关键词 H-2K^k基因 序列测定 主要组织相容性复合体 克隆 小鼠 转基因治疗 肿瘤
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外周血造血干细胞体外保存的研究进展 被引量:1
3
作者 彭文珍 周宏远 傅继梁 《中国肺癌杂志》 CAS 2003年第3期242-244,共3页
关键词 外周血造血干细胞移植 PBSCT 血细胞 过氧化氢酶 副作用
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615小鼠MHC Ⅰ cDNA重组逆转录病毒基因治疗载体的构建和包装 被引量:2
4
作者 龚浩 李龙江 +3 位作者 温玉明 王昌美 陈俊杰 彭文珍 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期404-407,共4页
目的:制备615小鼠MHCⅠ目的基因(H-2Kk)载体,获得高表达MHCⅠ分子功能的单克隆细胞株。方法:将615小鼠MHCⅠ(H-2Kk)cDNA定向连接至PLXSN逆转录病毒质粒,转染E.coli JM109,限制性酶切分析法筛选出重组质粒PLXSN-H-2Kk,继而转染PA317细胞,... 目的:制备615小鼠MHCⅠ目的基因(H-2Kk)载体,获得高表达MHCⅠ分子功能的单克隆细胞株。方法:将615小鼠MHCⅠ(H-2Kk)cDNA定向连接至PLXSN逆转录病毒质粒,转染E.coli JM109,限制性酶切分析法筛选出重组质粒PLXSN-H-2Kk,继而转染PA317细胞,经G418筛选获得抗性PA317单克隆细胞株,并转染NIH3T3细胞,依抗性NIH3T3细胞克隆数目,鉴定病毒液的滴度和PA317单克隆细胞株。结果:转染成功的病毒液滴度位于1.6×104~1.1×105 CFU/ml之间,PA317单克隆细胞株成片生长良好,并高表达H-2Kk产物。结论:H-2Kk cDNA重组逆转录病毒质粒的成功构建、包装和滴度鉴定为在615小鼠上进行恶性肿瘤的MHC Ⅰ转基因治疗奠定了物质基础。 展开更多
关键词 基因治疗 MHCⅠ目的基因 PA317细胞 基因载体 重组逆转录病毒质粒 肿瘤治疗
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