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代谢综合征相关新基因MSRG实时荧光PCR检测方法的建立
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作者 陈瑾歆 方定志 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期489-492,共4页
目的建立测定MSRG mRNA表达量的实时荧光定量PCR检测方法,为新基因的功能研究奠定基础。方法根据MSRGcDNA序列设计荧光PCR适用的引物和探针,构建质粒标准品,建立标准曲线用于荧光PCR相对定量,检测荧光PCR方法的灵敏性、特异性和重复性... 目的建立测定MSRG mRNA表达量的实时荧光定量PCR检测方法,为新基因的功能研究奠定基础。方法根据MSRGcDNA序列设计荧光PCR适用的引物和探针,构建质粒标准品,建立标准曲线用于荧光PCR相对定量,检测荧光PCR方法的灵敏性、特异性和重复性。荧光PCR检测不同浓度葡萄糖[5.6mmol/L(G5.6)、22mmol/L(G22)、33.3mmol/L(G33.3)]刺激人肝癌细胞株HepG2细胞MSRG的表达并与半定量RT-PCR方法进行比较。结果建立了MSRG mRNA表达的实时荧光PCR检测方法。荧光PCR检测显示G33.3、G22和G5.6组HepG2细胞MSRG表达均有显著差异,半定量RT-PCR方法检测G33.3组MSRG表达显著增加,但不能检测出G22和G5.6组间有差异。结论本实验建立的MSRG mRNA表达实时荧光PCR检测方法灵敏性、特异性和重复性较好,为MSRG功能的研究提供了一种重要手段。 展开更多
关键词 代谢综合征 实时荧光定量PCR 半定量RT-PCR HEPG2
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Wnt/β-catenin信号通路在实验性大鼠肝癌形成过程中的作用 被引量:11
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作者 王启明 李肖 +3 位作者 贾连群 杨开明 周鸿鹰 羊惠君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期454-457,共4页
目的:探讨Wnt/β-catenin信号转导通路与肿瘤发生的关系,为肝癌的防治提供新的思路。方法:选取Wnt/β-catenin信号转导通路中上下游关键因子wnt1、β-catenin、APC、cyclinD1以及c-myc等,应用RT-PCR法观察它们在正常肝脏,不典型增生肝... 目的:探讨Wnt/β-catenin信号转导通路与肿瘤发生的关系,为肝癌的防治提供新的思路。方法:选取Wnt/β-catenin信号转导通路中上下游关键因子wnt1、β-catenin、APC、cyclinD1以及c-myc等,应用RT-PCR法观察它们在正常肝脏,不典型增生肝脏和肝癌组织中的转录水平。用免疫组化染色法研究β-catenin、APC和cyclinD1等3个因子有无表达。结果:在正常肝脏中,用RT-PCR未检测到wnt1、cyc-linD1以及c-myc的mRNA转录,免疫组化染色也只观察到β-catenin在细胞膜处有比较弱的表达。诱癌14周后,在发生不典型增生的肝组织中,检测到β-catenin、APC和cyclinD13个基因的转录。通过免疫组化染色也观察到β-catenin蛋白在胞质中的积累,APC和cyclinD1在部分细胞中出现表达。诱癌16周后,在肝癌组织中,除wnt1mRNA外,其他几个因子的mRNA都有转录,免疫组化也印证了上述各个发生转录的因子在蛋白水平都有不同程度的表达。结论:Wnt/β-catenin信号转导通路在大鼠的肝癌形成过程中被激活,其可能是实验性肝癌发生的原因之一。 展开更多
关键词 WNT/Β-CATENIN 信号转导通路 肝癌发生 大鼠
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高密度脂蛋白亚类抗脂多糖作用的研究 被引量:7
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作者 贾连群 王启明 +2 位作者 柳春 田丽 傅明德 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期616-619,共4页
目的:探讨不同的高密度脂蛋白(HDL)亚类抗脂多糖(LPS)作用。方法:转染NF-κB-luc报告质粒至HepG2细胞,分析HDL各亚类对经LPS刺激的转染细胞荧光素酶表达的影响、HDL亚类与转染细胞孵育对LPS诱导的荧光素酶表达的影响以及HDL与LPS孵育对... 目的:探讨不同的高密度脂蛋白(HDL)亚类抗脂多糖(LPS)作用。方法:转染NF-κB-luc报告质粒至HepG2细胞,分析HDL各亚类对经LPS刺激的转染细胞荧光素酶表达的影响、HDL亚类与转染细胞孵育对LPS诱导的荧光素酶表达的影响以及HDL与LPS孵育对LPS诱导的荧光素酶表达的影响;运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术,分析HDL亚类与LPS孵育对LPS诱导的TNF-α mRNA表达的影响。结果:大颗粒HDL2孵育的细胞荧光素酶表达显著受到抑制;HDL3孵育的细胞荧光素酶表达略有降低;preβ1-HDL孵育的细胞荧光素酶表达未见改变;LPS-HDL2复合物刺激的细胞荧光素酶表达显著受到抑制;LPS-HDL2复合物刺激的细胞TNF-α mRNA的表达也显著降低。结论:成熟的大颗粒HDL2能够显著抑制LPS诱导的荧光素酶活性以及TNF-α mRNA的表达,表明HDL2具有较强的结合和中和LPS的能力。 展开更多
关键词 高密度脂蛋白亚类 脂多糖 荧光素酶报告基因 HEPG2细胞
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