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孟鲁司特对哮喘中白三烯B4代谢的影响 被引量：1
1
作者 胡煜 谢亮 +4 位作者 邹丹 伏洪玲 娄丽丽 谢柯祺 刘瀚旻 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期580-591,共12页
目的·观察孟鲁司特在哮喘治疗中对白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)代谢途径关键分子表达的影响,探讨哮喘的潜在干预靶点。方法·卵清蛋白(ovalbumin,OVA)+Al(OH)3致敏激发小鼠,建立以过敏性气道疾病(allergic airway disease,A... 目的·观察孟鲁司特在哮喘治疗中对白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)代谢途径关键分子表达的影响,探讨哮喘的潜在干预靶点。方法·卵清蛋白(ovalbumin,OVA)+Al(OH)3致敏激发小鼠,建立以过敏性气道疾病(allergic airway disease,AAD)为特点的小鼠急性、亚急性和慢性哮喘模型并予孟鲁司特灌胃干预,然后再予OVA激发慢性哮喘模型。无约束全身体积描记仪测定小鼠肺功能,探究气道高反应性(airway hyperresponsiveness,AHR)的变化规律。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肺组织嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)浸润及杯状细胞(goblet cell,GCL)增生情况,观察气道过敏性炎症的病理学特点。ELISA和液相芯片多因子检测试剂盒检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和血清的免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)、干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)和白细胞介素(interleukin,IL)表达水平,观察2型辅助性T细胞(helper T cell type 2,Th2)炎症情况。RT-qPCR、Western blotting及免疫组织化学检测小鼠LTB4合成限速酶5-脂氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase activating protein,ALOX5AP)和白三烯A4水解酶(leukotriene A4 hydrolase,LTA4H)及LTB4受体1(leukotriene B4 receptor 1,BLT1)基因及蛋白表达,探究LTB4的代谢与哮喘的关系。结果·OVA+Al(OH)_(3)可建立以AAD为特征的小鼠哮喘模型,表现为以增强呼气间歇(enhanced pause,Penh)值升高为肺功能特点的AHR,以气道EOS浸润和GCL增生为病理学特点的嗜酸性炎症和黏液高分泌状态,及以BALF和血清中IgE、IL-4和IL-13升高且IFN-γ、IL-2和IL-12降低为免疫学特点的Th2型炎症反应;孟鲁司特可有效缓解AAD。ALOX5AP、LTA4H和BLT1基因及蛋白在哮喘中表达增强,孟鲁司特始终抑制ALOX5AP表达,但可促进LTA4H和BLT1在慢性期的表达。OVA再次激发后,孟鲁司特可使LTA4H和BLT1表达增强。结论·孟鲁司特具有缓解哮喘小鼠过敏性炎症的效应,但可刺激LTB4的生成和堆积并以慢性期显著;再次予OVA激发孟鲁司特持续干预的哮喘小鼠可使LTB4与BLT1的表达增强;孟鲁司特可能存在激活LTB4及其受体BLT1进而加重哮喘发作的风险,LTB4代谢限速酶LTA4H及受体BLT1可能是哮喘治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 哮喘 5-脂氧合酶激活蛋白 白三烯A4水解酶 白三烯B4受体 孟鲁司特
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人参皂苷CK对肺动脉平滑肌细胞迁移和胶原沉积的作用 被引量：3
2
作者 刘桃 朱路 +4 位作者 李刚 贾鹏 谢亮 刘瀚旻 刘斌 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2021年第12期1229-1236,共8页
目的:探究人参皂苷CK(CK)对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的迁移和胶原沉积的作用以及相关的机制。方法:以体外培养的大鼠PASMC为研究对象,PDGF-BB为诱导剂,CK为干预剂。实验分为三组(每组每次实验有5个负... 目的:探究人参皂苷CK(CK)对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的迁移和胶原沉积的作用以及相关的机制。方法:以体外培养的大鼠PASMC为研究对象,PDGF-BB为诱导剂,CK为干预剂。实验分为三组(每组每次实验有5个负孔,独立重复3次即每组n=3):采用CCK-8法检测对照组(不做处理)、模型组(给予PDGF-BB 20 mg/L)、干预组(同时给予PDGF-BB 20 mg/L+CK 5μmol/L)细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移;实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)信使RNA(mRNA)的相对表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液中COLⅠ和COLⅢ蛋白的表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测COLⅠ、COLⅢ和β-连环蛋白(β-catenin)的相对表达。结果(:1)与对照组比较,模型组中PDGF-BB显著诱导了PASMC的增殖;与对照组比较,模型组PASMC在12 h、24 h的迁移率[(37%vs.26%)、(68%vs.51%)]均呈显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.01)。PASMC培养液中,与对照组比较,模型组培养液中COLⅠ蛋白含量升高约3.5倍和COLⅢ蛋白含量升高2.5倍(P<0.01),同时PASMC中COLⅠ、COLⅢ、β-catenin的m RNA和蛋白表达水平均明显升高(P均<0.01)。(2)与模型组比较,干预组中CK抑制了PDGF-BB诱导的PASMC增殖;与模型组比较,干预组12 h、24 h迁移率分别为[(16%vs.37%)、(48%vs.68%)]较模型组均明显降低(P均<0.01),PASMC培养液中COLⅠ蛋白含量减少了45%和COLⅢ减少了56%(P<0.01),同时PASMC中COLⅠ、COLⅢ和β-catenin的m RNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.01),差异均有统计学意义。结论:CK明显抑制了PDGF-BB诱导PASMC的增殖、迁移以及胶原沉积,这表明CK可能对胶原沉积类疾病有抑制作用。 展开更多
关键词 人参皂苷CK 肺动脉平滑肌细胞 迁移 胶原蛋白 胶原沉积
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利用食管类器官研究c-Myc在食管癌发生中的作用 被引量：2
3
作者 陈友红 杨文豪 倪超 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期601-614,I0003,共15页
c-Myc基因在食管癌等多种恶性肿瘤中异常高表达,但其参与癌症发生发展机制尚不完全清楚。为探究c-Myc在食管癌发生中的作用,本文成功构建了食管类器官作为研究模型,首先制备表达c-Myc的慢病毒并通过高效侵染方法获得了稳定过表达c-Myc... c-Myc基因在食管癌等多种恶性肿瘤中异常高表达,但其参与癌症发生发展机制尚不完全清楚。为探究c-Myc在食管癌发生中的作用,本文成功构建了食管类器官作为研究模型,首先制备表达c-Myc的慢病毒并通过高效侵染方法获得了稳定过表达c-Myc的食管类器官。以正常食管类器官作为对照,使用ImageJ软件分析感染7代后食管类器官的形态,显示食管类器官的上皮形态并未出现异常。随后利用免疫荧光染色实验和CCK8试剂检测食管类器官的细胞增殖状态,结果显示细胞增殖速度也没有显著改变。最后通过实时荧光定量PCR实验(quantitative real-time PCR,qPCR)检测细胞周期、细胞代谢以及常见的在食管癌中高表达基因的表达情况,结果显示相关基因表达均未显著升高。这些结果初步表明在食管中单独过表达c-Myc基因不足以诱导食管上皮细胞癌化。本文建立了食管类器官研究模型,通过高效的慢病毒过表达体系研究了原癌基因c-Myc对食管类器官发育和增殖的潜在影响。这对于食管类器官模拟食管发育和食管癌发生相关研究具有一定参考意义。 展开更多
关键词 食管癌 食管类器官 c-Myc过表达 慢病毒侵染
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