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Chelex-100法及酚氯仿法提取阴道毛滴虫DNA的比较 被引量:2
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作者 谢辉 王雅静 +2 位作者 帖超男 廖琳 刘佩娜 《四川动物》 CSCD 2004年第4期338-340,共3页
目的 -比较Chelex 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA。方法 -分别用Chelex - 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA ,用PCR法检测DNA提取的有效性。结果 -两种方法提取的DNA经PCR扩增均有特定的条带。结论 -两种方法均能提... 目的 -比较Chelex 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA。方法 -分别用Chelex - 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA ,用PCR法检测DNA提取的有效性。结果 -两种方法提取的DNA经PCR扩增均有特定的条带。结论 -两种方法均能提取阴道毛滴虫DNA。Chelex 10 0方法简便、省时 。 展开更多
关键词 阴道毛滴虫 Chelex-100法 基因组DNA 临床 PCR法 PCR扩增 分子生物学研究 氯仿法 DNA提取
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针刺对备用DRG的NGF及其mRNA阳性大、中、小神经元数量的影响 被引量:3
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作者 罗敏 王廷华 +2 位作者 保天然 陈彦红 柯青 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期81-84,共4页
本研究观察了 NGF及其 m RNA阳性神经元在 DRG大、中、小神经元中的数量变化 ,目的在于探讨 DRG各类神经元NGF变化与针刺促进脊髓可塑性的关系。对 5只成年猫进行双侧备用根手术。术后当日开始针刺一侧 L6 脊神经后肢分布区的两组穴位... 本研究观察了 NGF及其 m RNA阳性神经元在 DRG大、中、小神经元中的数量变化 ,目的在于探讨 DRG各类神经元NGF变化与针刺促进脊髓可塑性的关系。对 5只成年猫进行双侧备用根手术。术后当日开始针刺一侧 L6 脊神经后肢分布区的两组穴位即足三里和悬中、伏兔和三阴交 ,每天一次 ,每次 3 0 min,连续针刺 7d后处死动物。取针刺侧与非针刺侧 L6 的 DRG制成 2 0μm厚冰冻纵切片。分别用 NGF抗血清和 NGF的 c RNA探针进行免疫组织化学反应及原位杂交染色。计数两侧 DRG相同面积内大 (>5 7μm)、中 (4 2~ 5 7μm)、小 (<42 μm)型 NGF及其 m RNA阳性神经元的数量。结果显示 :针刺侧备用 DRG NGF及其 m RNA阳性大、小型神经元的数量明显增加 (P<0 .0 5 ) ,而对中型神经元数量影响不明显。结论 :针刺促进脊髓可塑性可能与备用 DRG大、小神经元表达 NGF增多有关。 展开更多
关键词 神经生长因子 针刺 备用根模型 可塑性 神经元数量 脊髓 NGF MRNA DRG
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内源性GDNF、NT-4对针刺猫脊髓备用根背根节神经元的作用 被引量:1
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作者 王特为 王廷华 +2 位作者 周雪 张连双 徐新运 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期62-66,共5页
为了解部分背根切除和针刺及内源性GDNF和NT-4对体外培养备用背根节(DRG)的作用,本研究对5只成年猫进行双侧备用根手术(切除双侧L1~L3和L7~S2 DRG,其中L6DRG作为备用背根)。术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位... 为了解部分背根切除和针刺及内源性GDNF和NT-4对体外培养备用背根节(DRG)的作用,本研究对5只成年猫进行双侧备用根手术(切除双侧L1~L3和L7~S2 DRG,其中L6DRG作为备用背根)。术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位,即足三里和悬钟、伏兔和三阴交,每天一次,每次30min,连续针刺7d后无菌条件下取出双侧L6 DRG进行体外培养,24h后全量换液,并将针刺侧的一部分培养孔的培养液分别用含有200ng/ml抗GDNF和NT4抗体培养液替换,分别作为抗GDNF和NT4抗体封闭组。7d后终止培养,于显微镜下用显微测微尺测量神经突起的长度;并用抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行神经元鉴定。结果显示:(1)免疫细胞化学染色可见体外培养的细胞95%以上为NSE阳性细胞,且为典型的体外培养的DRG神经元;(2)体外培养备用根组和抗GDNF抗体组神经突起的平均长度比针刺组的短(P〈0.05);(3)而针刺组神经突起的平均长度与抗NT-4抗体组间无差异(P〉0.05);两抗体组平均突起长度比备用根组的突起长(P(0.05)。本研究结果提示,针刺可促进体外培养DRG神经元突起的生长,进而可能与脊髓可塑性密切相关;内源性GDNF有促进DRG神经元突起生长的作用;而内源性NT4在DRG神经元突起生长中发挥的作用却不明显。 展开更多
关键词 部分脊髓背根切除 针刺 细胞培养 免疫细胞化学 GDNF NT-4
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阴道毛滴虫多克隆抗体的制备及Fd基因的原核表达
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作者 谢辉 王雅静 +3 位作者 帖超男 毕世樑 刘佩娜 廖琳 《四川动物》 CSCD 北大核心 2006年第4期692-694,共3页
目的-将阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因在大肠埃希菌中诱导表达。方法-制备阴道毛滴虫可溶性抗原,多点注射免疫家兔,获得的血清用ELISA测定其抗体效价。将原核表达重组质粒pET3C-Fd转化入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,异... 目的-将阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因在大肠埃希菌中诱导表达。方法-制备阴道毛滴虫可溶性抗原,多点注射免疫家兔,获得的血清用ELISA测定其抗体效价。将原核表达重组质粒pET3C-Fd转化入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达。结果-制备出抗阴道毛滴虫多克隆抗体,抗体效价在1∶8000以上,用于免疫印迹实验。经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)分析,重组质粒在大肠埃希菌中表达出Fd。结论-在大肠埃希菌中表达出了Fd。 展开更多
关键词 阴道毛滴虫 铁氧还蛋白 多克隆抗体 基因表达
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阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因的原核表达
5
作者 谢辉 王雅静 +3 位作者 帖超男 毕世梁 刘佩娜 廖琳 《四川动物》 CSCD 北大核心 2007年第1期15-17,共3页
目的在原核细胞中表达阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因。方法构建阴道毛滴虫Fd基因的原核表达重组质粒pUC19-Fd,转化大肠埃希菌JM109感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达。结果经十二烷基磺酸钠-聚丙... 目的在原核细胞中表达阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因。方法构建阴道毛滴虫Fd基因的原核表达重组质粒pUC19-Fd,转化大肠埃希菌JM109感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达。结果经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)分析,重组质粒在大肠埃希菌中表达出Fd。结论在大肠埃希菌中表达出了Fd。 展开更多
关键词 阴道毛滴虫 铁氧还蛋白 基因表达
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蛛网膜下腔置管灌注rhNCAM1促损伤脊髓再生修复的实验研究 被引量:3
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作者 路伟 王廷华 +2 位作者 王特为 郭勇 费强 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期169-173,共5页
目的:探讨神经细胞粘附分子1(neural cell adhesion molecule 1,NCAM1)灌注治疗小鼠脊髓撞击伤后对脊髓修复及神经功能恢复的影响。方法:采用改良NYU(纽约大学)Weight-Drop Impactor打击装置,以25 gcf(l0 g重量从25 mm高度自由... 目的:探讨神经细胞粘附分子1(neural cell adhesion molecule 1,NCAM1)灌注治疗小鼠脊髓撞击伤后对脊髓修复及神经功能恢复的影响。方法:采用改良NYU(纽约大学)Weight-Drop Impactor打击装置,以25 gcf(l0 g重量从25 mm高度自由落下)制备脊髓损伤模型(打击面积为2 mm×2 mm)。将SA小鼠30只随机分为3组:实验组(rhNCAM1组,n=10)于损伤即刻经蛛网膜下腔注入rhNCAM1蛋白2μl(约100μg),隔日1次,共5次;对照组(生理盐水组,n=10)于损伤即刻经蛛网膜下腔注入生理盐水2μl,隔日1次,共5次;假手术组仅做椎板切除术,术后缝合切口。观察各组小鼠18周行为学改变,行BBB评分。第8周灌注固定、取材,采用神经纤维200(NF200)免疫荧光检测,进行图像分析及统计处理。结果:(1)行为学评估:实验组BBB评分在各时间点均显著高于对照组(P〈0.01);(2)NF200免疫荧光染色:实验组阳性着色明显多于、并强于对照组;实验组无组织瘢痕结构面积明显小于对照组。结论:蛛网膜下腔应用rhNCAM1后可能改善SCI后损伤区及两端的神经细胞之间的功能,促进轴突再生,促进双下肢运动功能的恢复。 展开更多
关键词 神经细胞粘附因子 灌注 脊髓损伤与修复 NF200 小鼠
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