期刊文献+
共找到11篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
TLR-4信号转导通路介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达的研究 被引量:3
1
作者 梁峰 黄宁 +1 位作者 王伯瑶 陈槐卿 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-5,I001,共6页
目的 :观察TLR - 4信号转导通路在层流低切应力诱导血管内皮细胞IL - 8基因表达中的作用。方法 :设计突变引物 ,用RT -PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR4cDNA ,用PCR技术从其DNA中扩增出IL - 8上游调控序列 (IL - 8USCS... 目的 :观察TLR - 4信号转导通路在层流低切应力诱导血管内皮细胞IL - 8基因表达中的作用。方法 :设计突变引物 ,用RT -PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR4cDNA ,用PCR技术从其DNA中扩增出IL - 8上游调控序列 (IL - 8USCS) ,分别克隆于真核表达质粒pcDNA3及绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1质粒 ,构建出重组TLR - 4缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3 -mTLR4和IL - 8报告基因表达质粒pEGFP1-IL8USCS。用pEGFP1 -IL8USCS转染或pcDNA3 -mTLR4和pEGFP1 -IL8USCS共转染ECV30 4细胞 ,用 4 2dyne/cm2 层流切应力刺激 3h ,流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化。细胞裂解物IκB免疫印迹和NF -κBp65免疫荧光细胞化学染色检测IκB的磷酸化及降解和NF -κB的活化。结果 :用pEGFP1 -IL8USCS转染细胞 ,经层流切应力刺激 3h后荧光蛋白表达增强 (1 0 6∶2 71 ) ,同样用pcDNA3 -mTLR4和pEGFP 1 -IL8USCS共转染细胞 ,层流切应力刺激 3h后荧光蛋白表达未明显增强。细胞裂解物免疫印迹显示 ,刺激 1 0min时磷酸化IκB即显著增强 ,1h后磷酸化IκB印迹强度几乎降到基线水平 ,而IκB随刺激时间延长而逐渐降低 ,1h后几乎测不到IκB。NF -κBp65免疫荧光细胞化学染色显示 ,切应力刺激 0 5h ,胞核即出现阳性反应 ,刺? 展开更多
关键词 白细胞介素-8 基因表达 内皮细胞 信号传递 TLR-4信号转导 动脉粥样硬化
在线阅读 下载PDF
利用基因芯片技术快速检测结核杆菌耐药性的初步研究 被引量:2
2
作者 张万江 鲍朗 +4 位作者 王晓樱 张会东 谢勇恩 陈玮 于向华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期762-764,T003,共4页
目的 :探讨利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性。方法 :结核杆菌耐药性检测基因芯片的制备 ;临床分离株结核杆菌培养和药敏检测 ;结核杆菌基因组DNA的制备和结核杆菌耐药基因的聚和酶链反应 ;基因芯片的杂交、洗涤、检测与分析。结... 目的 :探讨利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性。方法 :结核杆菌耐药性检测基因芯片的制备 ;临床分离株结核杆菌培养和药敏检测 ;结核杆菌基因组DNA的制备和结核杆菌耐药基因的聚和酶链反应 ;基因芯片的杂交、洗涤、检测与分析。结果 :临床分离株结核杆菌培养和药敏检测结果 :1株为药物敏感株结核杆菌 (对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇 4种药物均敏感 ) ;4株为多耐药株结核杆菌 (对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇 4种药物均耐药 ) ;药敏检测结果与 5位患者临床的诊断性治疗的结果完全一致 ;进一步利用基因芯片技术进行检测 ,检测结果与上述结果相符合。结论 :利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性 ,准确、快速、高效。 展开更多
关键词 寡核苷酸陈列序列分析 分支杆菌 结核 药物耐受性
在线阅读 下载PDF
采用基因打靶技术构建结核分枝杆菌新基因Rv0901缺失株的研究 被引量:1
3
作者 邱云青 鲍朗 +3 位作者 赵计林 赵明才 张会东 吴悦涵 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1507-1510,共4页
目的 :利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株 ,用于结核分枝杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养 ,对其Rv0 90 1基因及两侧序列进行体外扩增 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,再引入筛选... 目的 :利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株 ,用于结核分枝杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养 ,对其Rv0 90 1基因及两侧序列进行体外扩增 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,再引入筛选标志构建重组自杀质粒 ,分别用酶切及PCR鉴定 ;用电穿孔法将重组自杀质粒转入结核杆菌H37Rv株 ,用PCR鉴定。结果 :经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符 ,且为所需目的基因片段 ,成功切除靶片段 ;蓝白斑筛选证实标记基因插入片段插入方向正确 ;Rv0 90 1基因缺失株用PCR鉴定成功缺失了目的基因片段 2 5kb。结论 :成功构建了用于结核分枝杆菌基因打靶的置换型载体和Rv0 90 1新基因缺失株 ,为Rv0 90 展开更多
关键词 基因敲除 基因 Rv0901 分枝杆菌 结核
在线阅读 下载PDF
结核杆菌检测基因芯片的制备研究
4
作者 张万江 鲍朗 +4 位作者 王晓樱 谢勇恩 陈玮 张会东 于向华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期754-754,共1页
关键词 结核杆菌 检测 基因芯片 制备
在线阅读 下载PDF
赖型钩端螺旋体毒力株新基因差异片段筛选和核苷酸序列分析 被引量:2
5
作者 赵计林 鲍朗 张会东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期185-188,共4页
目的 :筛选致病钩端螺旋体赖型 0 1 7株毒力相关基因DNA差异片段 ,并进行核苷酸及基因信息学分析。方法 :提取钩端螺旋体 0 1 7株基因组DNA ,根据抑制消减杂交 (SSH)筛选的 0 1 7株特有的 1 53bp核苷酸短片段 ,采用盒式连接半巢式PCR技... 目的 :筛选致病钩端螺旋体赖型 0 1 7株毒力相关基因DNA差异片段 ,并进行核苷酸及基因信息学分析。方法 :提取钩端螺旋体 0 1 7株基因组DNA ,根据抑制消减杂交 (SSH)筛选的 0 1 7株特有的 1 53bp核苷酸短片段 ,采用盒式连接半巢式PCR技术 ,扩增相邻未知序列 ,进行序列测定、分析及同源性检索 ,并进行蛋白二级结构预测。结果 :克隆获得 580bp核苷酸长度的基因片段 ,包含 4个重叠开放阅读框架 (ORF) ,在氨基酸水平上与A型化脓性链球菌 ,肺炎链球菌保守的假想蛋白高度同源。被GenBank收录 ,收录号为AF495587。结论 :本研究筛选并分析了可能是钩体毒力相关的基因片段 ,为进一步探讨该基因的生物学功能及阐明赖型钩端螺旋体致病分子机制打下了基础。 展开更多
关键词 钩端螺旋体属 聚合酶链反应 碱基序列 基因
在线阅读 下载PDF
CpG ODN对树突状细胞抗肝癌作用的影响 被引量:2
6
作者 李岩 邢飞跃 李明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1801-1805,共5页
目的 :研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法 :CpGODN联合肿瘤抗原 (TAg)体外刺激BMDC ,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率 ,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL - 12 (p70 )的水平 ,MTT法检测活化... 目的 :研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法 :CpGODN联合肿瘤抗原 (TAg)体外刺激BMDC ,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率 ,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL - 12 (p70 )的水平 ,MTT法检测活化BMDC刺激T细胞的增殖能力 ,联合CpGODN和TAg体内预激小鼠获得CTL ,检测CTL对肝癌细胞株Hca-F的特异性杀伤作用。结果 :CpGODN联合TAg体外可明显激活BMDC ,诱导BMDC膜表面CD80的表达 ,刺激BMDC分泌高水平IL - 12 ,促进BMDC刺激T淋巴细胞增殖 ;体内联合应用CpGODN和TAg诱导的CTL对Hca -F具有强大的特异性杀伤作用 ,其诱导作用明显强于TAg ,与细菌脂多糖和金黄色葡萄球菌肠毒素B相近。结论 :CpGODN体外能有效促进小鼠BMDC的分化、增殖和成熟 。 展开更多
关键词 胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸 寡二核苷类 树突状细胞 T淋巴细胞 细胞毒性
在线阅读 下载PDF
含CpG基序的寡核苷酸对树突状细胞的作用及其机制 被引量:4
7
作者 李岩 邢飞跃 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1431-1434,共4页
Oligodeoxynucleotide containing unmethylated cytosine phosphate-guanosine motif(CpG ODN) may induce high expression of CD80, CD86, CD83, HLA I and HLAⅡ molecules on dendritic cells(DC) and stimulate DC to produce hig... Oligodeoxynucleotide containing unmethylated cytosine phosphate-guanosine motif(CpG ODN) may induce high expression of CD80, CD86, CD83, HLA I and HLAⅡ molecules on dendritic cells(DC) and stimulate DC to produce high level of IL-6, IL-12, TNF-α and IFN-α. CpG ODN is demonstrated in vivo to be a very potent adjuvant for Th1 cells, regulating Th0 cells to develop toward Th1 cells. Its role for DC is characteristics of CpG ODN sequence specificity and species specificity. CpG ODN is, at present, considered as a pathogen associated molecular pattern which binds its specific receptor,Toll-like receptor 9,then functions through TLR/IL-1R signaling pathway. It may represent a new therapeutic drug for broad applications in infectious disease, autoimmune disease, allergy and cancer therapy. 展开更多
关键词 寡核苷酸类 树突细胞 免疫调节
在线阅读 下载PDF
赖型钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL41基因真核表达质粒的构建及表达 被引量:1
8
作者 朱海龙 鲍朗 +1 位作者 李学敏 张会东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期336-339,共4页
目的:构建赖型钩端螺旋体LipL41基因的真核重组表达质粒、并对其表达进行检测。方法:以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板PCR扩增目的基因,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1上。测序分析后酶切,并连接至真核表达质粒pcDNA3上,构建真核重... 目的:构建赖型钩端螺旋体LipL41基因的真核重组表达质粒、并对其表达进行检测。方法:以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板PCR扩增目的基因,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1上。测序分析后酶切,并连接至真核表达质粒pcDNA3上,构建真核重组表达质粒LipL41-pCDNA3。利用脂质体介导转染COS7细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR检测其表达。结果:PCR扩增出1 011 bp大小的目的片段,序列分析显示它与Leptospira kirschneri的LipL41基因成熟肽序列同源性高达98%。酶切鉴定证实真核重组表达质粒LipL41-pCD-NA3构建成功,RT-PCR检测显示,LipL41-pCDNA3转染组在大约1kb处出现特异的扩增带,而空质粒组无此条带。结论:LipL41的真核重组表达质粒构建成功,并可在哺乳动物细胞中表达。 展开更多
关键词 钩端螺旋体属 基因 LipL41 真核表达
在线阅读 下载PDF
超抗原SEB和SEC诱导的树突状细胞对T细胞的影响 被引量:1
9
作者 邢飞跃 李明 +1 位作者 申志华 李岩 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1171-1176,共6页
目的:阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)和葡萄球菌肠毒素C(SEC)诱导树突状细胞(dendriticcells,DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。方法:以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞,免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白;流式细胞... 目的:阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)和葡萄球菌肠毒素C(SEC)诱导树突状细胞(dendriticcells,DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。方法:以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞,免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白;流式细胞术检测DC表达I-Eκ和CD80分子水平,检测T细胞受刺激后CD69的表达、IL-2和TNF-α的生成;用MTT法检测T细胞增殖及其对HcaF细胞的杀伤效应。结果:体外试验表明,DC高表达S-100蛋白,SEB或SEC诱导的DC高表达I-Eκ和CD80分子;SEB或SEC能诱导DC促进T细胞活化,其浓度以100μg/L时作用最强;SEB或SEC能诱导DC促进T细胞增殖、大量分泌IL-2和TNF-α,被激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤率高达83.2%±12.8%,明显优于肿瘤抗原诱导的DC所激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤作用;SEB与SEC的诱导作用无明显差异。结论:超抗原SEB或SEC能诱导DC显著增强T细胞活化、增殖、分泌和杀伤肿瘤细胞,并优于肿瘤抗原的诱导作用,SEB和SEC的作用相似,为超抗原SEB或SEC与DC联合应用于临床肿瘤的治疗提供了证据。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素类 树突状细胞 T淋巴细胞 HeaF细胞
在线阅读 下载PDF
多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL的构建及其功能鉴定 被引量:1
10
作者 张万江 鲍朗 +3 位作者 邓喜玲 吴芳 曹旭东 王晓樱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期614-617,共4页
目的:构建多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL及其功能鉴定。方法:制备临床分离株多耐药结核杆菌基因组DNA,PCR扩增该株结核杆菌rpsL基因,构建及鉴定该株结核杆菌rpsL基因重组穿梭质粒PMV261/rp... 目的:构建多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL及其功能鉴定。方法:制备临床分离株多耐药结核杆菌基因组DNA,PCR扩增该株结核杆菌rpsL基因,构建及鉴定该株结核杆菌rpsL基因重组穿梭质粒PMV261/rpsL,重组穿梭质粒PMV261/rpsL电转化结核杆菌H37Rv株及其鉴定。结果:成功地构建了重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒PMV261/rpsL;重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒PMV261/rpsL电转化结核杆菌H37Rv株获得成功,并且重组质粒PMV261/rpsL电转化后的结核杆菌H37Rv株对链霉素耐药。结论:该临床分离株多耐药结核分支杆菌对链霉素耐药的机制仅仅是由于rpsL基因的93bp、94bp处碱基突变所致,耐药性是一个基因突变的结果,是单基因型。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 基因 rpsL
在线阅读 下载PDF
赖型钩端螺旋体溶血素HlyX对血管内皮细胞通透性的影响
11
作者 孙湛 吴秉婷 +1 位作者 李道坤 鲍朗 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1682-1686,共5页
目的:克隆表达赖型钩端螺旋体溶血素基因hlyX,观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)通透性的影响,并初步探讨其机制。方法:将hlyX基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-hlyX,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨... 目的:克隆表达赖型钩端螺旋体溶血素基因hlyX,观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)通透性的影响,并初步探讨其机制。方法:将hlyX基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-hlyX,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-HlyX融合蛋白,并作亲和层析纯化。采用生物素标记白蛋白的酶联免疫吸附法测定目的蛋白对HUVECs单细胞层通透性的影响,并以流式细胞术及Ho-echst 33258荧光染色方法检测其作用于HUVECs后的细胞凋亡率。结果:成功构建了重组质粒pET-hlyX并高效表达出Trx-HlyX融合蛋白;与对照组相比较,蛋白Trx-HlyX作用于HUVECs后,明显增加其通透性(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论:重组质粒pET-hlyX高效表达出Trx-HlyX融合蛋白,纯化后的融合蛋白对HUVECs通透性有影响,且对HUVECs具有细胞毒性作用。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 HlyX 通透性 细胞凋亡 人脐静脉内皮细胞
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部