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中国病理生理学会炎症发热感染低温专业委员会第八届全国学术会议论文摘要 发展炎症反应概念——哺乳动物抗菌肽及其基因表达调控研究
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作者 王伯瑶 黄宁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期797-798,共2页
关键词 炎症反应 抗菌肽 基因表达 动物实验
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TLR-4信号转导通路介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达的研究 被引量:3
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作者 梁峰 黄宁 +1 位作者 王伯瑶 陈槐卿 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-5,I001,共6页
目的 :观察TLR - 4信号转导通路在层流低切应力诱导血管内皮细胞IL - 8基因表达中的作用。方法 :设计突变引物 ,用RT -PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR4cDNA ,用PCR技术从其DNA中扩增出IL - 8上游调控序列 (IL - 8USCS... 目的 :观察TLR - 4信号转导通路在层流低切应力诱导血管内皮细胞IL - 8基因表达中的作用。方法 :设计突变引物 ,用RT -PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR4cDNA ,用PCR技术从其DNA中扩增出IL - 8上游调控序列 (IL - 8USCS) ,分别克隆于真核表达质粒pcDNA3及绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1质粒 ,构建出重组TLR - 4缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3 -mTLR4和IL - 8报告基因表达质粒pEGFP1-IL8USCS。用pEGFP1 -IL8USCS转染或pcDNA3 -mTLR4和pEGFP1 -IL8USCS共转染ECV30 4细胞 ,用 4 2dyne/cm2 层流切应力刺激 3h ,流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化。细胞裂解物IκB免疫印迹和NF -κBp65免疫荧光细胞化学染色检测IκB的磷酸化及降解和NF -κB的活化。结果 :用pEGFP1 -IL8USCS转染细胞 ,经层流切应力刺激 3h后荧光蛋白表达增强 (1 0 6∶2 71 ) ,同样用pcDNA3 -mTLR4和pEGFP 1 -IL8USCS共转染细胞 ,层流切应力刺激 3h后荧光蛋白表达未明显增强。细胞裂解物免疫印迹显示 ,刺激 1 0min时磷酸化IκB即显著增强 ,1h后磷酸化IκB印迹强度几乎降到基线水平 ,而IκB随刺激时间延长而逐渐降低 ,1h后几乎测不到IκB。NF -κBp65免疫荧光细胞化学染色显示 ,切应力刺激 0 5h ,胞核即出现阳性反应 ,刺? 展开更多
关键词 白细胞介素-8 基因表达 内皮细胞 信号传递 TLR-4信号转导 动脉粥样硬化
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利用基因芯片技术快速检测结核杆菌耐药性的初步研究 被引量:2
3
作者 张万江 鲍朗 +4 位作者 王晓樱 张会东 谢勇恩 陈玮 于向华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期762-764,T003,共4页
目的 :探讨利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性。方法 :结核杆菌耐药性检测基因芯片的制备 ;临床分离株结核杆菌培养和药敏检测 ;结核杆菌基因组DNA的制备和结核杆菌耐药基因的聚和酶链反应 ;基因芯片的杂交、洗涤、检测与分析。结... 目的 :探讨利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性。方法 :结核杆菌耐药性检测基因芯片的制备 ;临床分离株结核杆菌培养和药敏检测 ;结核杆菌基因组DNA的制备和结核杆菌耐药基因的聚和酶链反应 ;基因芯片的杂交、洗涤、检测与分析。结果 :临床分离株结核杆菌培养和药敏检测结果 :1株为药物敏感株结核杆菌 (对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇 4种药物均敏感 ) ;4株为多耐药株结核杆菌 (对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇 4种药物均耐药 ) ;药敏检测结果与 5位患者临床的诊断性治疗的结果完全一致 ;进一步利用基因芯片技术进行检测 ,检测结果与上述结果相符合。结论 :利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性 ,准确、快速、高效。 展开更多
关键词 寡核苷酸陈列序列分析 分支杆菌 结核 药物耐受性
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大肠杆菌感染对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的负相调节作用 被引量:2
4
作者 陈新年 黄宁 +1 位作者 吴琦 王伯瑶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期83-85,I005,共4页
目的 :探讨细菌对大鼠 β -防御素 - 2 (rBD - 2 )基因的表达调控。 方法 :将大肠杆菌E .coliML -35p和绿脓杆菌ATCC 2 785 3大鼠气管内接种 ,于 2 4h后提取肺组织RNA ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法和Northernblot检测大鼠 β -... 目的 :探讨细菌对大鼠 β -防御素 - 2 (rBD - 2 )基因的表达调控。 方法 :将大肠杆菌E .coliML -35p和绿脓杆菌ATCC 2 785 3大鼠气管内接种 ,于 2 4h后提取肺组织RNA ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法和Northernblot检测大鼠 β -防御素 - 2基因的表达变化。 结果 :气管内接种大肠杆菌 2 4h后使大鼠肺组织 β -防御素- 2mRNA的表达受到显著抑制 ,绿脓杆菌对其基因的表达却没有抑制作用。结论 :大肠杆菌感染可负相调节大鼠肺组织rBD - 2mRNA的表达。 展开更多
关键词 肺感染 基因表达 肠杆菌科 β-防御素-2基因 炎症反应
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采用基因打靶技术构建结核分枝杆菌新基因Rv0901缺失株的研究 被引量:1
5
作者 邱云青 鲍朗 +3 位作者 赵计林 赵明才 张会东 吴悦涵 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1507-1510,共4页
目的 :利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株 ,用于结核分枝杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养 ,对其Rv0 90 1基因及两侧序列进行体外扩增 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,再引入筛选... 目的 :利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株 ,用于结核分枝杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养 ,对其Rv0 90 1基因及两侧序列进行体外扩增 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,再引入筛选标志构建重组自杀质粒 ,分别用酶切及PCR鉴定 ;用电穿孔法将重组自杀质粒转入结核杆菌H37Rv株 ,用PCR鉴定。结果 :经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符 ,且为所需目的基因片段 ,成功切除靶片段 ;蓝白斑筛选证实标记基因插入片段插入方向正确 ;Rv0 90 1基因缺失株用PCR鉴定成功缺失了目的基因片段 2 5kb。结论 :成功构建了用于结核分枝杆菌基因打靶的置换型载体和Rv0 90 1新基因缺失株 ,为Rv0 90 展开更多
关键词 基因敲除 基因 Rv0901 分枝杆菌 结核
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结核杆菌检测基因芯片的制备研究
6
作者 张万江 鲍朗 +4 位作者 王晓樱 谢勇恩 陈玮 张会东 于向华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期754-754,共1页
关键词 结核杆菌 检测 基因芯片 制备
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CRISPR-Cas系统及其在结核分枝杆菌中的研究进展 被引量:1
7
作者 翟小倩 鲍朗 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期89-92,共4页
成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats–CRISPR-associated proteins,CRISPR-Cas)系统是在结核分枝杆菌中发现的一种新型获得性免疫系统。近年来,在调控结核毒力基因... 成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats–CRISPR-associated proteins,CRISPR-Cas)系统是在结核分枝杆菌中发现的一种新型获得性免疫系统。近年来,在调控结核毒力基因表达、基因定向编辑以及基因组进化方面表现出显著作用。主要从III-A型结核CRISPR-Cas系统的作用机制、改造后的II型CRISPR-Cas系统在结核中的应用以及cas基因的研究进展三方面进行综述,为研究结核发病机制提供理论基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 III-A型CRISPR-Cas系统 基因编辑技术 CAS
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赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22基因的克隆分析及蛋白表达 被引量:6
8
作者 朱海龙 鲍朗 +2 位作者 张会东 王晓樱 李岩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期294-297,共4页
目的分析赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22的结构特征,并对其进行克隆表达。方法分别以问号状赖型钩体017株、56601株及双曲状钩体PatocI株基因组为模板PCR扩增目的基因。构建Loa22基因与质粒pGEX-4T-1的重组原核表达质粒,克隆筛选并测序... 目的分析赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22的结构特征,并对其进行克隆表达。方法分别以问号状赖型钩体017株、56601株及双曲状钩体PatocI株基因组为模板PCR扩增目的基因。构建Loa22基因与质粒pGEX-4T-1的重组原核表达质粒,克隆筛选并测序。利用Bioedit、Dnaman、PSIPRED、NCBI及SignaIP等对其结构进行分析。最后在大肠杆菌JM109中诱导表达目的蛋白。结果不同毒力赖型钩体均能扩增出约600bp的片段,而PatocI株则未能扩增出目的片段;PCR、双酶切及测序证实pGEX-Loa22构建成功:分析显示不同赖型钩体的Loa22的同源性很高,C末端都具有同OmpA一致的保守序列及肽聚糖相关基序,都有信号肽序列;表达产物经SDS-PAGE检测证明是目的蛋白。结论赖型钩体具有编码OmpA膜蛋白的Loa22基因,可能与赖型钩体毒力和免疫原性存在某种相关性。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 OmpA基因 克隆 表达
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赖型钩端螺旋体毒力株新基因差异片段筛选和核苷酸序列分析 被引量:2
9
作者 赵计林 鲍朗 张会东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期185-188,共4页
目的 :筛选致病钩端螺旋体赖型 0 1 7株毒力相关基因DNA差异片段 ,并进行核苷酸及基因信息学分析。方法 :提取钩端螺旋体 0 1 7株基因组DNA ,根据抑制消减杂交 (SSH)筛选的 0 1 7株特有的 1 53bp核苷酸短片段 ,采用盒式连接半巢式PCR技... 目的 :筛选致病钩端螺旋体赖型 0 1 7株毒力相关基因DNA差异片段 ,并进行核苷酸及基因信息学分析。方法 :提取钩端螺旋体 0 1 7株基因组DNA ,根据抑制消减杂交 (SSH)筛选的 0 1 7株特有的 1 53bp核苷酸短片段 ,采用盒式连接半巢式PCR技术 ,扩增相邻未知序列 ,进行序列测定、分析及同源性检索 ,并进行蛋白二级结构预测。结果 :克隆获得 580bp核苷酸长度的基因片段 ,包含 4个重叠开放阅读框架 (ORF) ,在氨基酸水平上与A型化脓性链球菌 ,肺炎链球菌保守的假想蛋白高度同源。被GenBank收录 ,收录号为AF495587。结论 :本研究筛选并分析了可能是钩体毒力相关的基因片段 ,为进一步探讨该基因的生物学功能及阐明赖型钩端螺旋体致病分子机制打下了基础。 展开更多
关键词 钩端螺旋体属 聚合酶链反应 碱基序列 基因
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CpG ODN对树突状细胞抗肝癌作用的影响 被引量:2
10
作者 李岩 邢飞跃 李明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1801-1805,共5页
目的 :研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法 :CpGODN联合肿瘤抗原 (TAg)体外刺激BMDC ,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率 ,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL - 12 (p70 )的水平 ,MTT法检测活化... 目的 :研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法 :CpGODN联合肿瘤抗原 (TAg)体外刺激BMDC ,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率 ,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL - 12 (p70 )的水平 ,MTT法检测活化BMDC刺激T细胞的增殖能力 ,联合CpGODN和TAg体内预激小鼠获得CTL ,检测CTL对肝癌细胞株Hca-F的特异性杀伤作用。结果 :CpGODN联合TAg体外可明显激活BMDC ,诱导BMDC膜表面CD80的表达 ,刺激BMDC分泌高水平IL - 12 ,促进BMDC刺激T淋巴细胞增殖 ;体内联合应用CpGODN和TAg诱导的CTL对Hca -F具有强大的特异性杀伤作用 ,其诱导作用明显强于TAg ,与细菌脂多糖和金黄色葡萄球菌肠毒素B相近。结论 :CpGODN体外能有效促进小鼠BMDC的分化、增殖和成熟 。 展开更多
关键词 胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸 寡二核苷类 树突状细胞 T淋巴细胞 细胞毒性
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含CpG基序的寡核苷酸对树突状细胞的作用及其机制 被引量:4
11
作者 李岩 邢飞跃 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1431-1434,共4页
Oligodeoxynucleotide containing unmethylated cytosine phosphate-guanosine motif(CpG ODN) may induce high expression of CD80, CD86, CD83, HLA I and HLAⅡ molecules on dendritic cells(DC) and stimulate DC to produce hig... Oligodeoxynucleotide containing unmethylated cytosine phosphate-guanosine motif(CpG ODN) may induce high expression of CD80, CD86, CD83, HLA I and HLAⅡ molecules on dendritic cells(DC) and stimulate DC to produce high level of IL-6, IL-12, TNF-α and IFN-α. CpG ODN is demonstrated in vivo to be a very potent adjuvant for Th1 cells, regulating Th0 cells to develop toward Th1 cells. Its role for DC is characteristics of CpG ODN sequence specificity and species specificity. CpG ODN is, at present, considered as a pathogen associated molecular pattern which binds its specific receptor,Toll-like receptor 9,then functions through TLR/IL-1R signaling pathway. It may represent a new therapeutic drug for broad applications in infectious disease, autoimmune disease, allergy and cancer therapy. 展开更多
关键词 寡核苷酸类 树突细胞 免疫调节
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超抗原SEB或SEC对T细胞增殖和活化的影响 被引量:2
12
作者 李明 邢飞跃 李岩 《实用医学杂志》 CAS 2005年第15期1612-1614,共3页
目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphy lococcal enterotoxinB,SEB)和金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphy lococcal enterotoxinC,SEC)在体外对T细胞增殖和活化的影响。方法:不同浓度SEB或SEC在体外刺激T细胞,采用MTT法检测T细胞增... 目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphy lococcal enterotoxinB,SEB)和金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphy lococcal enterotoxinC,SEC)在体外对T细胞增殖和活化的影响。方法:不同浓度SEB或SEC在体外刺激T细胞,采用MTT法检测T细胞增殖水平,在流式细胞仪(flowcytometer,FCM)上检测T细胞受不同浓度SEB或SEC刺激后不同时间其早期活化标志CD69的表达水平。结果:SEB或SEC在体外能明显激活T细胞,以浓度为100μg/L时活化T细胞的作用最强,刺激时间以4~8h为佳,而对T细胞的增殖无明显影响。SEB和SEC活化T细胞的作用强度之间无明显差异。结论:以上结果提示,SEB或SEC具有很强的刺激T细胞活化的能力,为其应用于肿瘤免疫治疗提供了一定依据。 展开更多
关键词 超抗原 SEB SEC T细胞增殖 金黄色葡萄球菌 肠毒素类
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赖型钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL41基因真核表达质粒的构建及表达 被引量:1
13
作者 朱海龙 鲍朗 +1 位作者 李学敏 张会东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期336-339,共4页
目的:构建赖型钩端螺旋体LipL41基因的真核重组表达质粒、并对其表达进行检测。方法:以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板PCR扩增目的基因,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1上。测序分析后酶切,并连接至真核表达质粒pcDNA3上,构建真核重... 目的:构建赖型钩端螺旋体LipL41基因的真核重组表达质粒、并对其表达进行检测。方法:以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板PCR扩增目的基因,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1上。测序分析后酶切,并连接至真核表达质粒pcDNA3上,构建真核重组表达质粒LipL41-pCDNA3。利用脂质体介导转染COS7细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR检测其表达。结果:PCR扩增出1 011 bp大小的目的片段,序列分析显示它与Leptospira kirschneri的LipL41基因成熟肽序列同源性高达98%。酶切鉴定证实真核重组表达质粒LipL41-pCD-NA3构建成功,RT-PCR检测显示,LipL41-pCDNA3转染组在大约1kb处出现特异的扩增带,而空质粒组无此条带。结论:LipL41的真核重组表达质粒构建成功,并可在哺乳动物细胞中表达。 展开更多
关键词 钩端螺旋体属 基因 LipL41 真核表达
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超抗原SEB和SEC诱导的树突状细胞对T细胞的影响 被引量:1
14
作者 邢飞跃 李明 +1 位作者 申志华 李岩 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1171-1176,共6页
目的:阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)和葡萄球菌肠毒素C(SEC)诱导树突状细胞(dendriticcells,DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。方法:以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞,免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白;流式细胞... 目的:阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)和葡萄球菌肠毒素C(SEC)诱导树突状细胞(dendriticcells,DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。方法:以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞,免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白;流式细胞术检测DC表达I-Eκ和CD80分子水平,检测T细胞受刺激后CD69的表达、IL-2和TNF-α的生成;用MTT法检测T细胞增殖及其对HcaF细胞的杀伤效应。结果:体外试验表明,DC高表达S-100蛋白,SEB或SEC诱导的DC高表达I-Eκ和CD80分子;SEB或SEC能诱导DC促进T细胞活化,其浓度以100μg/L时作用最强;SEB或SEC能诱导DC促进T细胞增殖、大量分泌IL-2和TNF-α,被激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤率高达83.2%±12.8%,明显优于肿瘤抗原诱导的DC所激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤作用;SEB与SEC的诱导作用无明显差异。结论:超抗原SEB或SEC能诱导DC显著增强T细胞活化、增殖、分泌和杀伤肿瘤细胞,并优于肿瘤抗原的诱导作用,SEB和SEC的作用相似,为超抗原SEB或SEC与DC联合应用于临床肿瘤的治疗提供了证据。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素类 树突状细胞 T淋巴细胞 HeaF细胞
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Toll样受体及其信号转导 被引量:9
15
作者 王国兴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期666-669,共4页
关键词 天然免疫 TOLL样受体 信号转率
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多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL的构建及其功能鉴定 被引量:1
16
作者 张万江 鲍朗 +3 位作者 邓喜玲 吴芳 曹旭东 王晓樱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期614-617,共4页
目的:构建多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL及其功能鉴定。方法:制备临床分离株多耐药结核杆菌基因组DNA,PCR扩增该株结核杆菌rpsL基因,构建及鉴定该株结核杆菌rpsL基因重组穿梭质粒PMV261/rp... 目的:构建多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL及其功能鉴定。方法:制备临床分离株多耐药结核杆菌基因组DNA,PCR扩增该株结核杆菌rpsL基因,构建及鉴定该株结核杆菌rpsL基因重组穿梭质粒PMV261/rpsL,重组穿梭质粒PMV261/rpsL电转化结核杆菌H37Rv株及其鉴定。结果:成功地构建了重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒PMV261/rpsL;重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒PMV261/rpsL电转化结核杆菌H37Rv株获得成功,并且重组质粒PMV261/rpsL电转化后的结核杆菌H37Rv株对链霉素耐药。结论:该临床分离株多耐药结核分支杆菌对链霉素耐药的机制仅仅是由于rpsL基因的93bp、94bp处碱基突变所致,耐药性是一个基因突变的结果,是单基因型。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 基因 rpsL
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结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c基因的重组质粒构建及蛋白表达
17
作者 姚素霞 鲍朗 +1 位作者 商正玲 张会东 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期142-145,148,共5页
目的应用生物信息学方法分析结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c所编码蛋白的结构特征,并对其进行克隆和表达。方法利用Bioedit、Dnaman及Pfam等对Rv1246c和Rv1247c所表达蛋白结构进行分析;以结核分枝杆菌H37Rv的基因组为模板,用PCR分别扩... 目的应用生物信息学方法分析结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c所编码蛋白的结构特征,并对其进行克隆和表达。方法利用Bioedit、Dnaman及Pfam等对Rv1246c和Rv1247c所表达蛋白结构进行分析;以结核分枝杆菌H37Rv的基因组为模板,用PCR分别扩增Rv1246c和Rv1247c基因片段,并重组到原核表达载体pET32a(+)中,转化E.coliBL21(DH3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达。通过SDS-PAGE及Western-blot免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价。结果生物信息学分析表明它们与大肠杆菌的relBE家族有相似的蛋白模块,Rv1246c蛋白与大肠杆菌RelE同源性是21.55%,Rv1247c同源性是23.85%;两个重组质粒构建成功;通过SDS-PAGE检测分别在31kD和29kD处有特异性条带;Western-blot免疫印迹出现特异性阳性信号;间接ELISA检测多克隆抗体效价均大于1:40 000。结论本研究首次成功构建了结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了Rv1246c和Rv1247c蛋白,为进一步研究该组基因的分子功能奠定了良好基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv1246c Rv1247c 蛋白表达
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人粒-巨噬细胞集落刺激因子和结核杆菌特异性抗原CFP10嵌合基因重组卡介苗的构建及鉴定
18
作者 杨晓玲 鲍朗 邓仪昊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期795-798,804,共5页
目的构建能共同表达人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)的重组卡介苗(recombinant BCG,rBCG)。方法运用分子克隆技术,通过SOE法(重叠延伸,Gene splicing by overlap exten-sion),扩增GMCSF-CFP10嵌... 目的构建能共同表达人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)的重组卡介苗(recombinant BCG,rBCG)。方法运用分子克隆技术,通过SOE法(重叠延伸,Gene splicing by overlap exten-sion),扩增GMCSF-CFP10嵌合基因,将该基因定向克隆到穿梭表达质粒pMV361中,构建重组pMV GMCSF-CFP10质粒。用电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rBCG,经热诱导后对rBCG表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果重组质粒pMVGMCSF-CFP10经PCR、酶切及测序证实构建成功,并在BCG中经热诱导成功表达了具有GMCSF-CFP10的嵌合蛋白。结论成功构建能表达GMCSF-CFP10蛋白的重组BCG,为发展新型结核病疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 GM-CSF CFP10 卡介苗 穿梭质粒
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赖型钩端螺旋体溶血素HlyX对血管内皮细胞通透性的影响
19
作者 孙湛 吴秉婷 +1 位作者 李道坤 鲍朗 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1682-1686,共5页
目的:克隆表达赖型钩端螺旋体溶血素基因hlyX,观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)通透性的影响,并初步探讨其机制。方法:将hlyX基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-hlyX,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨... 目的:克隆表达赖型钩端螺旋体溶血素基因hlyX,观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)通透性的影响,并初步探讨其机制。方法:将hlyX基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-hlyX,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-HlyX融合蛋白,并作亲和层析纯化。采用生物素标记白蛋白的酶联免疫吸附法测定目的蛋白对HUVECs单细胞层通透性的影响,并以流式细胞术及Ho-echst 33258荧光染色方法检测其作用于HUVECs后的细胞凋亡率。结果:成功构建了重组质粒pET-hlyX并高效表达出Trx-HlyX融合蛋白;与对照组相比较,蛋白Trx-HlyX作用于HUVECs后,明显增加其通透性(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论:重组质粒pET-hlyX高效表达出Trx-HlyX融合蛋白,纯化后的融合蛋白对HUVECs通透性有影响,且对HUVECs具有细胞毒性作用。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 HlyX 通透性 细胞凋亡 人脐静脉内皮细胞
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