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表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其功能研究
被引量：
5
1
作者
李岩
鲍朗
+2 位作者
张会东
李娅莎
朱海龙
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期923-926,共4页
目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌并对其免疫功能进行研究。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV-ESAT6,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,用电穿孔法将...
目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌并对其免疫功能进行研究。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV-ESAT6,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,用电穿孔法将重组质粒转染到耻垢分枝杆菌mc2155中。以SDS-PAGE检测ESAT-6蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达。以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞ANA-1,半定量RT-PCR检测ANA-1细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平,裂解巨噬细胞,计数胞内存活细菌数。结果重组耻垢分枝杆菌构建成功,经热诱导后可以表达相对分子质量约为6000的蛋白,与预期值一致。重组耻垢分枝杆菌能够诱导ANA-1细胞活化表达iNOS,并增强巨噬细胞的杀伤活性,重组耻垢分枝杆菌在胞内存活数低于对照组(P<0.05)。结论表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌具有免疫原性,为构建新型结核疫苗提供了实验基础。
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关键词
ESAT-6
大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒
重组耻垢分枝杆菌
巨噬细胞
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职称材料
IL-12基因不同亚基真核表达载体的构建及表达
被引量：
2
2
作者
郝牧
鲍朗
+2 位作者
张会东
高蕾
李娅莎
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期698-702,共5页
目的:克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、p40不同亚基的真核表达载体,瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达。方法:人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(HL-60),经DMSO、IFN-γ和LPS诱导后,用RT-PCR及SOEPCR扩增IL-12p40...
目的:克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、p40不同亚基的真核表达载体,瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达。方法:人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(HL-60),经DMSO、IFN-γ和LPS诱导后,用RT-PCR及SOEPCR扩增IL-12p40、p35及p40-p35融合基因;并构建pcDNA-p35、pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达载体。以3种重组质粒分别瞬时转染COS-7细胞后,通过RT-PCR及ELISA法检测目的基因的表达。结果:经诱导后,从HL-60细胞中扩增到IL-12p40和p35基因片段;但从THP-1细胞中只扩增到p35基因片段,未能扩增到p40基因片段;经酶切鉴定、PCR扩增及序列测定表明pcDNA-p35、pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达质粒构建成功;并在COS-7细胞中可检测到IL-12的表达。结论:含hIL-12基因不同亚基的真核表达质粒的成功构建,对进一步研究IL-12在免疫应答中的调节作用以及作为免疫佐剂改善BCG免疫保护效果的研究奠定了基础。
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关键词
白细胞介素12
SOE
PCR
真核表达
瞬时转染
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职称材料
题名
表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其功能研究
被引量：
5
1
作者
李岩
鲍朗
张会东
李娅莎
朱海龙
机构
四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期923-926,共4页
基金
国家自然科学基金(30271172)~~
文摘
目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌并对其免疫功能进行研究。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV-ESAT6,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,用电穿孔法将重组质粒转染到耻垢分枝杆菌mc2155中。以SDS-PAGE检测ESAT-6蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达。以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞ANA-1,半定量RT-PCR检测ANA-1细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平,裂解巨噬细胞,计数胞内存活细菌数。结果重组耻垢分枝杆菌构建成功,经热诱导后可以表达相对分子质量约为6000的蛋白,与预期值一致。重组耻垢分枝杆菌能够诱导ANA-1细胞活化表达iNOS,并增强巨噬细胞的杀伤活性,重组耻垢分枝杆菌在胞内存活数低于对照组(P<0.05)。结论表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌具有免疫原性,为构建新型结核疫苗提供了实验基础。
关键词
ESAT-6
大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒
重组耻垢分枝杆菌
巨噬细胞
Keywords
ESAT-6
E.coli-mycobacterium shuttle vector
recombinant Mycobacterium smegmatis
macrophages
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
IL-12基因不同亚基真核表达载体的构建及表达
被引量：
2
2
作者
郝牧
鲍朗
张会东
高蕾
李娅莎
机构
四川大学
华西
医学
中心
基础与
法
医学院
感染
与
免疫
研究室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期698-702,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30271172)
文摘
目的:克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、p40不同亚基的真核表达载体,瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达。方法:人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(HL-60),经DMSO、IFN-γ和LPS诱导后,用RT-PCR及SOEPCR扩增IL-12p40、p35及p40-p35融合基因;并构建pcDNA-p35、pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达载体。以3种重组质粒分别瞬时转染COS-7细胞后,通过RT-PCR及ELISA法检测目的基因的表达。结果:经诱导后,从HL-60细胞中扩增到IL-12p40和p35基因片段;但从THP-1细胞中只扩增到p35基因片段,未能扩增到p40基因片段;经酶切鉴定、PCR扩增及序列测定表明pcDNA-p35、pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达质粒构建成功;并在COS-7细胞中可检测到IL-12的表达。结论:含hIL-12基因不同亚基的真核表达质粒的成功构建,对进一步研究IL-12在免疫应答中的调节作用以及作为免疫佐剂改善BCG免疫保护效果的研究奠定了基础。
关键词
白细胞介素12
SOE
PCR
真核表达
瞬时转染
Keywords
Interleukin 12
SOE-PCR
eukaryotic expres-sion
transient transfection
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其功能研究
李岩
鲍朗
张会东
李娅莎
朱海龙
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
IL-12基因不同亚基真核表达载体的构建及表达
郝牧
鲍朗
张会东
高蕾
李娅莎
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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