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不同基因型PRRSV鉴别诊断多重RT-PCR检测方法的建立
被引量：
1
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作者
贾钦瑞
闫乙鑫
+4 位作者
罗志鹏
徐通
陈弟诗
周远成
朱玲
《四川农业大学学报》
北大核心
2025年第2期452-457,478,共7页
【目的】针对PRRSV的多基因型特性,旨在建立一种灵敏、特异且稳定的多重RT-PCR检测方法。【方法】根据GeneBank数据库中公布的ORF1、ORF6和Nsp2基因保守序列分别设计合成3对特异性引物,分别以PRRSV欧洲株(PRRSV-1)、高致病性毒株(HP-PRR...
【目的】针对PRRSV的多基因型特性,旨在建立一种灵敏、特异且稳定的多重RT-PCR检测方法。【方法】根据GeneBank数据库中公布的ORF1、ORF6和Nsp2基因保守序列分别设计合成3对特异性引物,分别以PRRSV欧洲株(PRRSV-1)、高致病性毒株(HP-PRRSV)、美洲经典株(Classic-PRRSV)和NADC30-like株cDNA为模板进行PCR扩增并构建重组质粒,通过对反应体系和反应条件的优化建立不同基因型PRRSV鉴别诊断多重RT-PCR检测方法。对该方法进行特异性、灵敏性、重复性和准确性验证。【结果】优化过后的cDNA模板为7.5μL,引物为0.5μL,退火温度为56℃;该方法与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)无交叉反应,特异性强。对PRRSV-1、NADC30、HP-PRRSV、Classic-PRRSV株的最低检测下限分别为3.93×10^(2)、4.52×10^(2)、3.70×10^(2)和4.58×10^(2)copies/μL,灵敏性较高。分别以10^(4)copies/μL的混合阳性质粒和4种单一阳性质粒为模板,进行PCR扩增,重复性较好。对来自四川各地的118份临床样本进行检测,总符合率达到98%。【结论】该方法能够精确鉴别PRRSV的不同基因型毒株,具有良好特异性、灵敏性、重复性和准确性,在临床样品中鉴别不同基因型PRRSV毒株的方面具有较高的应用价值。
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关键词
PRRSV欧洲株
高致病性毒株
美洲经典株
NADC30-like株
多重RT-PCR
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职称材料
题名
不同基因型PRRSV鉴别诊断多重RT-PCR检测方法的建立
被引量：
1
1
作者
贾钦瑞
闫乙鑫
罗志鹏
徐通
陈弟诗
周远成
朱玲
机构
四川
农业大学动物医学院
四川
省动物疫病预防控制中心
四川华神兽药生物制品有限公司
出处
《四川农业大学学报》
北大核心
2025年第2期452-457,478,共7页
基金
四川省“十四五”川猪重大科技专项(021ZDZX0010-3)
四川省科技计划重点研发项目(2023YFN0021)
国家生猪技术创新中心(NCTIP-MY23006)。
文摘
【目的】针对PRRSV的多基因型特性,旨在建立一种灵敏、特异且稳定的多重RT-PCR检测方法。【方法】根据GeneBank数据库中公布的ORF1、ORF6和Nsp2基因保守序列分别设计合成3对特异性引物,分别以PRRSV欧洲株(PRRSV-1)、高致病性毒株(HP-PRRSV)、美洲经典株(Classic-PRRSV)和NADC30-like株cDNA为模板进行PCR扩增并构建重组质粒,通过对反应体系和反应条件的优化建立不同基因型PRRSV鉴别诊断多重RT-PCR检测方法。对该方法进行特异性、灵敏性、重复性和准确性验证。【结果】优化过后的cDNA模板为7.5μL,引物为0.5μL,退火温度为56℃;该方法与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)无交叉反应,特异性强。对PRRSV-1、NADC30、HP-PRRSV、Classic-PRRSV株的最低检测下限分别为3.93×10^(2)、4.52×10^(2)、3.70×10^(2)和4.58×10^(2)copies/μL,灵敏性较高。分别以10^(4)copies/μL的混合阳性质粒和4种单一阳性质粒为模板,进行PCR扩增,重复性较好。对来自四川各地的118份临床样本进行检测,总符合率达到98%。【结论】该方法能够精确鉴别PRRSV的不同基因型毒株,具有良好特异性、灵敏性、重复性和准确性,在临床样品中鉴别不同基因型PRRSV毒株的方面具有较高的应用价值。
关键词
PRRSV欧洲株
高致病性毒株
美洲经典株
NADC30-like株
多重RT-PCR
Keywords
PRRSV-1
HP-PRRSV
Classic-PRRSV
NADC30-like
multiplex RT-PCR.
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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1
不同基因型PRRSV鉴别诊断多重RT-PCR检测方法的建立
贾钦瑞
闫乙鑫
罗志鹏
徐通
陈弟诗
周远成
朱玲
《四川农业大学学报》
北大核心
2025
1
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