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共表达猪IFN-γ基因对PPV VP2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究
被引量：
2
1
作者
陈燕凌
徐志文
+3 位作者
郭万柱
朱玲
徐凯
唐玉香
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期1274-1280,共7页
将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重...
将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒灭活苗和猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌肉注射免疫小鼠,检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能、T淋巴细胞亚群动态变化情况以及PPV、PCV2抗体水平。试验结果显示,在转染重组质粒的MDBK细胞中能扩增到ORF2-VP2和IFN-γ基因;转染后48h用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达。pCI-IFN-γ.ORF2.VP2免疫组从第7天开始脾淋巴细胞对ConA有明显反应,显著高于对照组和PCI-ORF2.VP2免疫组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组和pCI-ORF2.VP2免疫组;在免疫后第14天检测到PPV PCV抗体。结果表明,pCI-IFN-γ.ORF2.VP2能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。
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关键词
猪细小病毒
VP2基因
猪圆环病毒
ORF2基因
IFN-Γ基因
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职称材料
猪巨细胞病毒PCR检测方法的建立及应用
被引量：
2
2
作者
刘红亮
朱玲
+4 位作者
徐志文
王燕群
魏浩澈
郭万柱
赵玲
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第7期5-8,共4页
参考GenBank中收录的猪巨细胞病毒(PCMV)DNA聚合酶基因序列设计合成了一对引物,扩增目的片段为236 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性试验,建立了PCMV的PCR检测方法。结果表明,该方法对模板的最低检测量为1.1 pg,具有良好的...
参考GenBank中收录的猪巨细胞病毒(PCMV)DNA聚合酶基因序列设计合成了一对引物,扩增目的片段为236 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性试验,建立了PCMV的PCR检测方法。结果表明,该方法对模板的最低检测量为1.1 pg,具有良好的特异性、敏感性和重复性。应用该法对猪同时感染PCMV和PRRSV相关性进行初步探究,36份PRRSV阳性病料中,PCMV检出率为63.89%。该法可用于PCMV的临床发病诊断和流行病学监测等。
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关键词
猪巨细胞病毒
DNA聚合酶
PCR
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职称材料
PPV VP2和PCV2 ORF2重组病毒样颗粒的获得及其免疫原性研究
被引量：
1
3
作者
徐志文
蒋清蓉
+4 位作者
郭万柱
朱玲
胡秋炅
陈扬
廖晓丹
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1303-1308,共6页
将PCV2 ORF2基因插入PPV VP2基因HindⅢ酶切位点(即PPV VLPs的N端1/3处)获得重组基因VP2.ORF2,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-C1中得到重组质粒pEGFP-VP2.ORF2,经转染及电镜观察表明成功获得VP2.ORF2重组病毒样颗粒。重组病毒样颗粒经...
将PCV2 ORF2基因插入PPV VP2基因HindⅢ酶切位点(即PPV VLPs的N端1/3处)获得重组基因VP2.ORF2,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-C1中得到重组质粒pEGFP-VP2.ORF2,经转染及电镜观察表明成功获得VP2.ORF2重组病毒样颗粒。重组病毒样颗粒经超速离心纯化后免疫小鼠,同时设立PPV普通疫苗、PCV2弱毒株及空白对照组,并在不同时期检测小鼠CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞动态变化情况及PPV和PCV2抗体水平。结果显示:VP2.ORF2重组病毒样颗粒免疫小鼠后能诱导较高水平的细胞免疫和高于同等条件普通疫苗和弱毒株的体液免疫水平。此研究结果为进一步探索VP2.ORF2重组病毒样颗粒的形成机制提供了依据,也为PPV-PCV2二联疫苗的研发打下了基础。
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关键词
猪细小病毒
猪圆环病毒
病毒样颗粒
免疫应答
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职称材料
题名
共表达猪IFN-γ基因对PPV VP2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究
被引量：
2
1
作者
陈燕凌
徐志文
郭万柱
朱玲
徐凯
唐玉香
机构
四川农业大学动物生物技术中心动物疫病与人类健康实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期1274-1280,共7页
基金
国家自然科学基金项目(30500019)
四川省青年科技基金(2006Q14-049)
+1 种基金
四川省教育厅重点实验室项目(07ZZ027)
"长江学者和创新团队发展计划"创新团队项目(IRT0848)
文摘
将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒灭活苗和猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌肉注射免疫小鼠,检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能、T淋巴细胞亚群动态变化情况以及PPV、PCV2抗体水平。试验结果显示,在转染重组质粒的MDBK细胞中能扩增到ORF2-VP2和IFN-γ基因;转染后48h用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达。pCI-IFN-γ.ORF2.VP2免疫组从第7天开始脾淋巴细胞对ConA有明显反应,显著高于对照组和PCI-ORF2.VP2免疫组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组和pCI-ORF2.VP2免疫组;在免疫后第14天检测到PPV PCV抗体。结果表明,pCI-IFN-γ.ORF2.VP2能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。
关键词
猪细小病毒
VP2基因
猪圆环病毒
ORF2基因
IFN-Γ基因
Keywords
porcine parvovirus
VP2 gene
porcine circovirus type 2
ORF2 gene
IFN-γ gene
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪巨细胞病毒PCR检测方法的建立及应用
被引量：
2
2
作者
刘红亮
朱玲
徐志文
王燕群
魏浩澈
郭万柱
赵玲
机构
四川农业大学
动物
生物技术
中心
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第7期5-8,共4页
基金
“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0848)
四川省教育厅重点实验室项目
文摘
参考GenBank中收录的猪巨细胞病毒(PCMV)DNA聚合酶基因序列设计合成了一对引物,扩增目的片段为236 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性试验,建立了PCMV的PCR检测方法。结果表明,该方法对模板的最低检测量为1.1 pg,具有良好的特异性、敏感性和重复性。应用该法对猪同时感染PCMV和PRRSV相关性进行初步探究,36份PRRSV阳性病料中,PCMV检出率为63.89%。该法可用于PCMV的临床发病诊断和流行病学监测等。
关键词
猪巨细胞病毒
DNA聚合酶
PCR
Keywords
Porcine cytomegalovirus
DNA polymerase
PCR
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
PPV VP2和PCV2 ORF2重组病毒样颗粒的获得及其免疫原性研究
被引量：
1
3
作者
徐志文
蒋清蓉
郭万柱
朱玲
胡秋炅
陈扬
廖晓丹
机构
四川农业大学动物生物技术中心动物疫病与人类健康实验室
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1303-1308,共6页
基金
国家自然科学基金(30500019)资助项目
文摘
将PCV2 ORF2基因插入PPV VP2基因HindⅢ酶切位点(即PPV VLPs的N端1/3处)获得重组基因VP2.ORF2,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-C1中得到重组质粒pEGFP-VP2.ORF2,经转染及电镜观察表明成功获得VP2.ORF2重组病毒样颗粒。重组病毒样颗粒经超速离心纯化后免疫小鼠,同时设立PPV普通疫苗、PCV2弱毒株及空白对照组,并在不同时期检测小鼠CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞动态变化情况及PPV和PCV2抗体水平。结果显示:VP2.ORF2重组病毒样颗粒免疫小鼠后能诱导较高水平的细胞免疫和高于同等条件普通疫苗和弱毒株的体液免疫水平。此研究结果为进一步探索VP2.ORF2重组病毒样颗粒的形成机制提供了依据,也为PPV-PCV2二联疫苗的研发打下了基础。
关键词
猪细小病毒
猪圆环病毒
病毒样颗粒
免疫应答
Keywords
porcine parvovirus
porcine circovirus
virus-like particle
immune response
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
共表达猪IFN-γ基因对PPV VP2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究
陈燕凌
徐志文
郭万柱
朱玲
徐凯
唐玉香
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪巨细胞病毒PCR检测方法的建立及应用
刘红亮
朱玲
徐志文
王燕群
魏浩澈
郭万柱
赵玲
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
PPV VP2和PCV2 ORF2重组病毒样颗粒的获得及其免疫原性研究
徐志文
蒋清蓉
郭万柱
朱玲
胡秋炅
陈扬
廖晓丹
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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