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多重PCR技术在动物疫病诊断中的应用 被引量:28
1
作者 曹洪志 颜其贵 +3 位作者 郭万柱 樊汶樵 肖雪 李成贤 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第1期45-47,共3页
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction.PCR)技术已经建立20余年.在这20多年里.它被广泛应用于生命科学各个领域.已经显示出了强大的工具性作用和旺盛的生命力。PCR技术的广泛应用同时也带动了自身的发展.而PCR的发展又产生... 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction.PCR)技术已经建立20余年.在这20多年里.它被广泛应用于生命科学各个领域.已经显示出了强大的工具性作用和旺盛的生命力。PCR技术的广泛应用同时也带动了自身的发展.而PCR的发展又产生了一些新的应用.多重PCR技术就是其中之一。在疾病的诊断方面.人们一直在梦想寻找一种高度特异、敏感和简便的方法能同时将需要鉴别诊断的疾病一次性地得到确诊.多重PCR技术的出现。无疑使之成为了可能。它不仅使疾病在分子水平上得到了确诊.而且在类症鉴别上具有其他诊断方法无可比拟的优越性。 展开更多
关键词 多重PCR技术 疫病诊断 应用 聚合酶链式反应 动物 生命科学 鉴别诊断
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伪狂犬病基因缺失疫苗株(SA215)生物学特性研究 被引量:10
2
作者 陈陆 郭万柱 +2 位作者 徐志文 王小玉 王印 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期278-282,共5页
测定了伪狂犬病gE-/gI-/ TK-/ LacZ+基因缺失疫苗株(SA215)的致细胞病变效应、安全性、免疫原性和接种动物抗体消长规律等生物学特性。试验结果显示,该疫苗株能在 Vero细胞上适应生长,并形成典型的蚀斑。其对1日龄仔猪、妊娠母猪、牛、... 测定了伪狂犬病gE-/gI-/ TK-/ LacZ+基因缺失疫苗株(SA215)的致细胞病变效应、安全性、免疫原性和接种动物抗体消长规律等生物学特性。试验结果显示,该疫苗株能在 Vero细胞上适应生长,并形成典型的蚀斑。其对1日龄仔猪、妊娠母猪、牛、羊以及家兔安全,无不良接种反应,接种动物不向外散毒。SA215 疫苗接种猪能抵御高剂量(107 PFU) Fa株强毒感染,攻毒后试验猪的发热期、增重受阻天数、散毒滴度略低于 Bartha株疫苗接种猪,低于对照组猪。SA215接种猪能维持长时间的高水平中和抗体滴度。试验结果表明,SA215 株是一株安全、免疫原性好的疫苗株。 展开更多
关键词 基因缺失疫苗 伪狂犬病 种猪 接种 生物学特性研究 强毒感染 增重 SA 滴度 疫苗株
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猪瘟伪狂犬病重组病毒SA215(A)株的构建及生物学特性研究 被引量:8
3
作者 徐志文 郭万柱 +2 位作者 朱玲 王印 王晓玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1033-1037,共5页
采用磷酸钙转染系统,将伪狂犬病三基因缺失疫苗SA215株DNA与PP63LacZE2 DNA共转染Vero细胞,获得SA215(A)1、SA215(A)2和SA215(A)3等12个重组病毒株。以光生物素标记的HCV E2基因为探针进行初步鉴定后,挑选SA215(A)1株作BamHI酶切和south... 采用磷酸钙转染系统,将伪狂犬病三基因缺失疫苗SA215株DNA与PP63LacZE2 DNA共转染Vero细胞,获得SA215(A)1、SA215(A)2和SA215(A)3等12个重组病毒株。以光生物素标记的HCV E2基因为探针进行初步鉴定后,挑选SA215(A)1株作BamHI酶切和southern转印杂交鉴定,结果表明构建是成功的,将其命名为SA215(A)。直接荧光抗体检测、SDS-PAGE电泳和western免疫印迹检测结果表明HCV E2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约51 ku的囊膜糖蛋白。对SA215(A)株进行部分生物学特性研究,培养特性观察试验表明该毒株可适应Vero、BHK21和鸡胚成纤维细胞等多种细胞,但对不同细胞系表现有一定的差异。SA215(A)株105PFU/mL接种21日龄健康仔猪(伪狂犬病和猪瘟检测阴性),接种后28 d用106PFU的PRV Fa强毒株滴鼻攻毒,42 d用猪瘟SM株血毒1 mL(105MLD/mL)肌肉注射攻击,结果表明接种猪能抵御2次病毒攻击,表明SA215(A)株具有良好免疫原性,是一株优秀的猪瘟、伪狂犬病二价疫苗候选株。 展开更多
关键词 重组病毒 猪瘟 伪狂犬病 生物学特性 疫苗
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荧光定量PCR技术及其应用研究进展 被引量:24
4
作者 郭杨 陈世界 +1 位作者 郭万柱 李璟 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第2期78-82,共5页
荧光定量PCR是近年发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量PCR的核心。荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封... 荧光定量PCR是近年发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量PCR的核心。荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围。论文综述了FQ-PCR技术的原理、FQ-PCR实时定量检测系统及其应用。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 荧光探针 检测 应用
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大熊猫轮状病毒CH-1株外衣壳蛋白(VP7)基因的克隆和生物信息学分析 被引量:11
5
作者 颜其贵 雷燕 +5 位作者 张志和 王成东 阳爱国 王旭 左兰 肖洋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期705-710,共6页
为研究大熊猫轮状病毒(Giant Panda Rotavirus,GPRV)CH-1株外衣壳蛋白VP7基因的结构及功能,用MA-104细胞(恒河猴胎猴肾细胞)增殖GPRV,提取总RNA,运用RT-PCR扩增VP7基因,并测序,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果显示... 为研究大熊猫轮状病毒(Giant Panda Rotavirus,GPRV)CH-1株外衣壳蛋白VP7基因的结构及功能,用MA-104细胞(恒河猴胎猴肾细胞)增殖GPRV,提取总RNA,运用RT-PCR扩增VP7基因,并测序,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果显示成功获得了长1042bp的GPRV VP7蛋白基因(GenBank登录号GU188284)。经生物信息学分析,此序列包含1个981bp的完整开放阅读框,编码326个氨基酸;预测GPRV VP7蛋白理论相对分子质量为37354.8u,等电点为4.76,半衰期为30h,不稳定系数为26.71,总平均亲水性为-0.015,疏水性介于-2.344~3.567;1—24位氨基酸可能是信号肽序列;跨膜结构分析表明VP7蛋白有2个跨膜区,其N端和C端都位于病毒膜外区;抗原表位预测显示VP7蛋白有12个抗原决定簇;结构预测显示其可能包含2个N-糖基化作用位点,5个蛋白激酶C磷酸化作用位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点、1个酪氨酸激酶磷酸化作用位点、4个N-豆蔻酰化位点、1个原核膜脂蛋白脂附着点和1个革兰氏阳性球菌表面蛋白‘锚’六肽。系统进化树分析显示GPRV VP7基因与人A组轮状病毒VP7基因的进化距离最近。本研究成功获得了GPRV VP7基因,为今后研究此基因的生物学功能以及建立该病毒的诊断方法奠定基础。 展开更多
关键词 大熊猫轮状病毒 VP7基因 克隆 生物信息学分析
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四川省腹泻病猪的猪萨佩罗病毒检测及1B基因序列比较分析 被引量:4
6
作者 李雨濛 郭博 +6 位作者 徐逸飞 陈瑛琪 蔡瑶 李小璟 龚双燕 徐志文 朱玲 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第12期1992-1999,共8页
为了解猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)的流行及变异情况,采集2015-2016年四川地区12个县市34个猪场共计428份腹泻病料,采用QRT-PCR方法对PSV进行检测。结果显示:在428份病料中,共有114份为PSV阳性,阳性率为26.6%;所检测的34... 为了解猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)的流行及变异情况,采集2015-2016年四川地区12个县市34个猪场共计428份腹泻病料,采用QRT-PCR方法对PSV进行检测。结果显示:在428份病料中,共有114份为PSV阳性,阳性率为26.6%;所检测的34个猪场中,共有20个猪场显示PSV阳性,猪场阳性率为58.8%,表明PSV在四川地区普遍存在。此外,对来自不同县市共14份PSV阳性病料1B全基因进行PCR扩增,通过分子克隆,测序,再利用序列分析软件对四川部分地区猪萨佩罗病毒1B基因进行序列分析。结果表明,14条猪萨佩罗病毒1B基因核苷酸序列及推导出的氨基酸序列相似性分别为90.6%~100%和97.1%~100%。遗传进化分析显示,该研究获得的四川株与已知中国株分属于一个大的分支,说明我国猪萨佩罗病毒1B基因序列较为保守,没有发生大的基因变异。所有中国分离株与韩国株、德国株、英国株处在不同分支,又说明我国PSV的流行毒株可能存在独立进化。 展开更多
关键词 猪萨佩罗病毒 流行病学调查 1B基因 遗传进化分析
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猪瘟病毒四川分离株E2基因的分子克隆、原核表达及免疫学活性分析 被引量:4
7
作者 韩国全 郭万柱 +4 位作者 林华 王利娜 张博 陈弟诗 陈杨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期65-71,共7页
分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami... 分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami-TM(DE3)plysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达,Western blotting分析表达蛋白的免疫学活性。试验结果表明,成功克隆了E2基因,共1119 bp,包含有编码E2蛋白的完整序列,编码373个氨基酸;成功构建了CS-FVE2基因完整阅读框、主要抗原区原核表达载体pET-E2(pe)、pET-mE2(pe);蛋白质电泳结果显示,成功表达出约45.32、28.49 ku两目的蛋白,而且表达的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白均能被CSFV阳性血清所识别,具有良好的免疫学反应活性。因此,本试验成功获得CSFV四川分离株E2基因,表达出具有生物学活性的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 四川分离株 E2基因 原核表达 免疫学活性
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猪细小病毒检测技术研究进展 被引量:12
8
作者 陈进会 郭万柱 《动物医学进展》 CSCD 2005年第8期34-37,共4页
近年来,随着猪细小病毒分子生物学的研究进一步深入,各种新型疫苗的成功研制,为猪细小病毒病的防制带来希望。但目前为止猪细小病毒的检测技术以传统方法为主,大量研究发现猪细小病毒常与其他病原微生物混合感染,为了根除本病,必须提高... 近年来,随着猪细小病毒分子生物学的研究进一步深入,各种新型疫苗的成功研制,为猪细小病毒病的防制带来希望。但目前为止猪细小病毒的检测技术以传统方法为主,大量研究发现猪细小病毒常与其他病原微生物混合感染,为了根除本病,必须提高诊断和防疫水平。文章就该病诊断方法的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 猪细小病毒 抗原 抗体 诊断技术
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四川省规模化猪场猪瘟的流行病学调查 被引量:20
9
作者 徐凯 徐志文 +3 位作者 郭万柱 华丽 朱玲 王印 《养猪》 2010年第2期65-67,共3页
本研究以四川省13个规模化猪场为调查对象,随机采集经产母猪、后备母猪、公猪以及仔猪的扁桃体样品和血样各862份,进行猪瘟抗原和抗体的检测。扁桃体检测结果显示,13个猪场猪瘟抗原阳性率从1.78%到14.5%不等,平均为6.62%;血清检测结果显... 本研究以四川省13个规模化猪场为调查对象,随机采集经产母猪、后备母猪、公猪以及仔猪的扁桃体样品和血样各862份,进行猪瘟抗原和抗体的检测。扁桃体检测结果显示,13个猪场猪瘟抗原阳性率从1.78%到14.5%不等,平均为6.62%;血清检测结果显示,猪瘟抗体阳性率平均为68.1%,最高为86.7%,最低为20%。结果表明,各场免疫水平相差较大,平均阳性率低于70%的国家标准,猪瘟带毒现象在四川省内规模化猪场普遍存在。 展开更多
关键词 猪瘟 流行病学 调查
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猪白细胞介素-15基因的克隆及生物信息学分析 被引量:2
10
作者 骆爱芳 郭万柱 +1 位作者 宋振辉 韩国全 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第10期37-40,共4页
参照GenBank登录的猪白细胞介素-15(IL-15)基因序列自行设计1对特异性引物,运用RT-PCR技术从由刀豆蛋白A(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞扩增出猪IL-15基因的完整CDS序列,全长489 bp。同源比对结果表明,荣昌猪IL-15基因与已公布的... 参照GenBank登录的猪白细胞介素-15(IL-15)基因序列自行设计1对特异性引物,运用RT-PCR技术从由刀豆蛋白A(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞扩增出猪IL-15基因的完整CDS序列,全长489 bp。同源比对结果表明,荣昌猪IL-15基因与已公布的2个猪种IL-15基因核苷酸同源性均为99.4%,与哺乳动物的同源性较高,与鸡的同源性较低。密码子偏爱性分析显示,荣昌猪IL-15基因在密码子使用上存在一定的偏爱性;分子进化分析结果表明其与人及哺乳动物IL-15基因的进化关系较近,而与禽类鸡的IL-15基因进化距离较远;结构域预测分析显示其与人的IL-15存在很大的相似性,可能在功能上有相似性。 展开更多
关键词 荣昌猪 猪IL-15基因 克隆 生物信息学分析
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四川省PPV与PCV2的病原流行病学调查 被引量:6
11
作者 徐君 郭万柱 +2 位作者 陈杨 徐志文 王小玉 《中国兽药杂志》 2012年第4期44-47,共4页
从四川省21个规模化猪场采集样品273份,利用PCR方法检测并分析了猪细小病毒和猪圆环病毒的感染及混合感染情况,结果共检出PPV病原阳性样品47份(占17.22%);PPV阳性猪场8个(占38.1%);种猪的感染率较高,仔猪感染率相对较低;检出PCV2病原阳... 从四川省21个规模化猪场采集样品273份,利用PCR方法检测并分析了猪细小病毒和猪圆环病毒的感染及混合感染情况,结果共检出PPV病原阳性样品47份(占17.22%);PPV阳性猪场8个(占38.1%);种猪的感染率较高,仔猪感染率相对较低;检出PCV2病原阳性样品143份(占52.38%),PCV2阳性猪场18个(占85.7%);PCV2感染随猪年龄的增长而升高;检出PPV和PCV2混合感染样品29份(占10.62%);同时存在PPV和PCV2的猪场6个(占28.7%),混合感染主要集中在母猪和保育仔猪阶段。仅有3个猪场未检出PPV和PCV2病原,占14.3%。该结果说明PPV与PCV2及其混合感染在四川省流行广泛,对养殖业构成了较严重的危害。 展开更多
关键词 猪细小病毒 猪圆环病毒 流行病学
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缓释复合酸化剂与抗生素联合使用对断奶仔猪肠道微生物及肠黏膜抗体的影响 被引量:4
12
作者 晏家友 贾刚 王康宁 《猪业科学》 2009年第9期88-91,共4页
本试验选用28日龄断奶、平均体重7.00±0.10kg的长白猪(♂)×大白猪(♀)二元杂交仔猪64头,研究在玉米-豆粕-膨化大豆型基础日粮中单独添加或联合使用包被复合酸化剂与抗生素对断奶仔猪肠道微生物和肠黏膜抗体的影响。试验设4个... 本试验选用28日龄断奶、平均体重7.00±0.10kg的长白猪(♂)×大白猪(♀)二元杂交仔猪64头,研究在玉米-豆粕-膨化大豆型基础日粮中单独添加或联合使用包被复合酸化剂与抗生素对断奶仔猪肠道微生物和肠黏膜抗体的影响。试验设4个处理,每个处理4个重复,每个重复4头猪(公母各半),饲养试验时间为5周。结果表明,与对照组和抗生素处理组相比,缓释复合酸化剂与抗生素联合使用可以极显著提高仔猪盲肠和结肠中乳酸杆菌数量、降低大肠杆菌数量(P<0.01);与酸化剂处理组相比,缓释复合酸化剂与抗生素联合使用可以显著提高仔猪盲肠中乳酸杆菌数量、降低大肠杆菌数量(P<0.05);缓释复合酸化剂与抗生素联合使用还有增加仔猪肠黏膜抗体SIgA分泌量的趋势,但与其他处理组相比较,差异并不显著(P>0.05)。结果提示,缓释复合酸化剂与抗生素在断奶仔猪饲粮中联合使用,可以优化仔猪肠道微生物区系、提高仔猪免疫力,并且作用效果优于单独使用酸化剂或抗生素。 展开更多
关键词 缓释复合酸化剂 抗生素 断奶仔猪 肠道微生物 肠黏膜抗体
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四川省猪巨细胞病毒病感染调查及分析 被引量:2
13
作者 刘骁 徐志文 +2 位作者 周远程 王燕群 史小红 《猪业科学》 2013年第1期94-95,共2页
为了掌握四川省猪巨细胞病毒病感染情况,为今后的猪巨细胞病毒病防治打下基础,进行了猪巨细胞病毒病感染情况的调查和分析工作。实验采用四川农业大学动物生物技术中心建立的PCMV套式PCR检测方法,对采自四川省11个地市的204份血清和组... 为了掌握四川省猪巨细胞病毒病感染情况,为今后的猪巨细胞病毒病防治打下基础,进行了猪巨细胞病毒病感染情况的调查和分析工作。实验采用四川农业大学动物生物技术中心建立的PCMV套式PCR检测方法,对采自四川省11个地市的204份血清和组织样品进行了检测,感染调查结果显示,目前四川地区的规模化猪场普遍存在猪巨细胞病毒感染情况,抗原平均阳性率高达81.9%。该病毒在猪各器官内均有分布,在不同类别的猪群中,仔猪、保育猪和种母猪的抗原阳性率很高,都达到80%以上,种母猪平时不发病,但受感染母猪会产出木乃伊胎和弱仔,会严重影响猪种群质量和猪场经济效益。 展开更多
关键词 猪巨细胞病毒 感染调查 PCR检测
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四川省部分地区猪场猪伪狂犬病野毒感染的血清流行病学调查 被引量:1
14
作者 李淞 朱玲 赵玲 《养猪》 2011年第5期92-93,共2页
伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种高度接触性传染病,猪感染伪狂犬病毒可导致种猪繁殖障碍,仔猪发生腹泻、生长发育受阻、神经症状等,同时伪狂犬病病毒也是引起猪呼吸道病综合征... 伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种高度接触性传染病,猪感染伪狂犬病毒可导致种猪繁殖障碍,仔猪发生腹泻、生长发育受阻、神经症状等,同时伪狂犬病病毒也是引起猪呼吸道病综合征的重要原发性病原之一。感染伪狂犬病病毒后可引起种猪繁殖障碍、产弱仔,新生仔猪出现共济失调、抽搐以及突然死亡;在生长肥育猪群中, 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 流行病学调查 感染 四川省 伪狂犬病病毒 猪呼吸道病综合征 猪繁殖障碍 血清
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四川某地区狂犬病流行病学调查与分析 被引量:1
15
作者 赵玲 徐志文 +2 位作者 何万平 刘艳 阳爱国 《中国畜禽种业》 2017年第8期11-11,共1页
通过流行病学调查,分析四川省某地区狂犬病的危害性和流行趋势,寻找发病原因,为制定防控措施提供科学依据。
关键词 狂犬病 流行病学
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伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析 被引量:11
16
作者 王勤 郭万柱 +2 位作者 徐志文 汪铭书 王小玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期389-393,共5页
根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到... 根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒PpgE。重组质粒PpgE经酶切鉴定为含有PRV的gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了gE基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。gE序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。 展开更多
关键词 伪狂犬病 病毒 Fa株 GE基因 克隆 序列分析 PCR扩增
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含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建 被引量:11
17
作者 罗燕 郭万柱 +5 位作者 徐志文 刘艳丽 殷华平 王新 王小玉 苟琳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1064-1068,共5页
将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察... 将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHⅠ酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93 ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 猪细小病毒 VP2基因 EGFP 重组病毒
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伪狂犬病病毒3基因缺失株(SA215)的遗传稳定性研究 被引量:8
18
作者 徐志文 郭万柱 +1 位作者 朱玲 唐善虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期694-697,共4页
测定了伪狂犬病病毒Fa株3基因缺失株(SA215)在鸡胚成纤维细胞上连续传代15代次,在非免疫仔猪体内连续传代5代次后,病毒毒价及对易感动物的安全性变化。并以核酸杂交、核酸酶切和gE-ELISA检测技术分别研究了缺失株(SA215)传代后不同代次... 测定了伪狂犬病病毒Fa株3基因缺失株(SA215)在鸡胚成纤维细胞上连续传代15代次,在非免疫仔猪体内连续传代5代次后,病毒毒价及对易感动物的安全性变化。并以核酸杂交、核酸酶切和gE-ELISA检测技术分别研究了缺失株(SA215)传代后不同代次病毒的外源插入基因(LacZ)、缺失基因(TK、gE、gI)遗传变异情况。结果表明缺失株(SA215)毒价及对易感动物安全性未发生变化,外源插入基因得到稳定遗传,缺失基因未见回复突变,证明缺失株(SA215)具有良好遗传稳定性。 展开更多
关键词 代次 伪狂犬病病毒 遗传稳定性 毒价 外源 易感动物 仔猪 SA 基因缺失 缺失基因
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猪霍乱沙门氏菌的分离与鉴定以及PCR检测方法的建立 被引量:20
19
作者 陈弟诗 郭万柱 +2 位作者 徐志文 李雯 王小玉 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第20期6020-6023,共4页
[目的]为了确定四川省某猪场初生仔猪大规模发病的原因。[方法]对发病仔猪进行细菌分离、培养特性及形态结构观察、生化鉴定、药敏试验、动物致病性试验和血清型鉴定,并建立PCR快速检测方法。[结果]从发病仔猪体内分离到1株优势菌,初步... [目的]为了确定四川省某猪场初生仔猪大规模发病的原因。[方法]对发病仔猪进行细菌分离、培养特性及形态结构观察、生化鉴定、药敏试验、动物致病性试验和血清型鉴定,并建立PCR快速检测方法。[结果]从发病仔猪体内分离到1株优势菌,初步鉴定为沙门氏菌。根据沙门氏菌invB基因设计的1对引物进行PCR扩增,得到408bp的特异性条带,PCR产物经T-A克隆测序证实为invB基因,与参比序列具有非常高的同源性,说明该PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性。经血清学试验确定该分离株为猪霍乱沙门氏菌,毒力试验和药敏试验结果表明分离菌致病性很强,对头孢三嗪、氯霉素、氧氟沙星等敏感。[结论]该研究为沙门氏菌病原鉴定与疾病诊断提供了依据。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌 分离 鉴定 PCR
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山羊和绵羊地方性鼻内腺癌研究进展 被引量:13
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作者 张国俊 冯迎春 +2 位作者 颜其贵 郭万柱 王小玉 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期101-104,共4页
羊地方性鼻内腺癌(ENA)起源于鼻黏膜腺体,是由逆转录病毒ENTV引起的一种接触传染性肿瘤,主要发生于青年及成年山羊和绵羊。临床特征主要表现为持续性鼻漏、呼吸困难、头骨变形。论文重点论述了该病的病原,并结合ENTV的免疫学特性对该病... 羊地方性鼻内腺癌(ENA)起源于鼻黏膜腺体,是由逆转录病毒ENTV引起的一种接触传染性肿瘤,主要发生于青年及成年山羊和绵羊。临床特征主要表现为持续性鼻漏、呼吸困难、头骨变形。论文重点论述了该病的病原,并结合ENTV的免疫学特性对该病的诊断与防控方法进行了比较,以期为该病的预防及早期诊断提供参考资料。 展开更多
关键词 地方性鼻内腺癌 地方性鼻内肿瘤病毒 逆转录病毒
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